目的:探讨1-甲基色氨酸（1-methyltryptophan，1-MT）对脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）诱导的人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells，HUVECs）通透性及细胞凋亡的影响。方法:将HUVECs分为三组，即磷酸缓冲盐溶液（phosphate buffered saline，PBS对照组）、1 μg/mL LPS（LPS组）、含有LPS及1 mmol/L 1-MT（1-MT组）。采用蛋白免疫印迹试验（Western blot）检测孵育8 h后的p120连环（p120 concatemer，p120ctn）、血管内皮钙粘蛋白（vascular endothelial cadherin，VE-cadherin）、caspase-3及DNA修复酶多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶-1（DNA repair enzyme polyadenylate ribose polymerase-1，PARP-1）的表达。采用高效液相色谱法（high performance liquid chromatography，HPLC）分别检测孵育2、4、6和8 h的犬尿氨酸（kynurenine，Kyn）浓度，并计算吲哚胺2,3-双加氧酶（indoleamine 2,3-dioxygenase, IDO）活性。组间两两均数比较用LSD- t检验。 结果:与PBS对照组相比较，LPS组caspase-3 [（74.01±7.91）% vs（157.14±7.63）%， P<0.01]、Kyn表达显著增高，而p120ctn [（49.12±2.15）% vs（37.61±1.80）%， P<0.01]、VE-cadherin [（107.70±7.01）% vs（90.66±2.58）%， P=0.027]及抗凋亡蛋白PARP-1 [（67.95±3.08）% vs（57.93±5.26）%， P=0.038]水平显著降低，IDO活性升高（ P<0.05）。与LPS组比较，1-MT组caspase-3 [（157.14±7.63）% vs（110.74±7.89）%, P<0.01]表达显著降低，然而p120ctn [（37.61±1.80）% vs（47.19±0.82）%， P<0.01] 、VE-cadherin [（90.66±2.58）% vs（107.27±9.89）%， P=0.029]及PARP-1 [（57.93±5.26）% vs（74.12±4.90）%， P=0.005]表达显著升高，不同时间点IDO活性均降低（ P<0.05）。PBS组和1-MT组p120ctn、VE-cadherin、PARP-1蛋白水平、Kyn浓度及IDO活性差异无统计学意义（ P>0.05），1-MT组caspase-3蛋白水平较PBS组升高（ P=0.001）。 结论:LPS刺激HUVECs通透性增加，而1-MT可通过抑制IDO活性和降低Kyn水平拮抗LPS的刺激作用，此外，1-MT还可降低细胞凋亡，其机制可能是通过增加PARP-1表达，降低caspase-3水平，从而发挥内皮细胞的保护作用。

目的:研究纳米二氧化钛颗粒（TiO 2-NPs）职业暴露人群血清代谢谱变化，探索TiO 2-NPs健康效应的生物标志物和损伤机制。 方法:于2020年6月至2021年6月，通过典型抽样的方法选取某TiO 2-NPs生产企业职工为研究对象，从企业中选取接触TiO 2-NPs工人64人为暴露组，选取同企业后勤行政人员62人为对照组，使用非抗凝采血管收集血样。样品经甲醇沉淀蛋白后采用超高效液相色谱飞行时间质谱技术采集非靶向代谢组学数据，筛选生物标志物并进行代谢通路分析。 结果:通过 P<0.05和变量重要性投影指标（ VIP）值>1两个指标筛选出46个差异代谢物，主要包括甘油酯类、鞘磷脂类、甘油磷脂类、脂肪酰基类等；通过受试者工作曲线（ROC）分析确定3-羟基-4，5-二甲基-2（5H）-呋喃酮、4-氨基联苯、庚酰肉碱、十六烷二酸单-L-肉碱酯、伊布利特、LysoPA[18∶1（9Z）/0∶0]、LysoPC（18∶0）、PC（16∶0/16∶0）、PC[16∶0/20∶4（5Z，8Z，11Z，14Z）]、PC[P-18∶1（9Z）/P-18∶1（9Z）]10个候选生物标志物；涉及4条代谢通路的变化，分别为甘油磷脂代谢，鞘脂代谢，苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸的生物合成，亚油酸代谢。 结论:TiO 2-NPs职业暴露会对血清代谢谱产生明显影响。

目的 利用超高效液相色谱-质谱(UHPLC-MS)非靶标技术探索胃复方干预SGC-7901荷瘤裸鼠的潜在代谢通路,为研究胃复方的体内代谢机制提供基础.方法 将胃癌细胞SGC-7901接种于6只裸鼠右侧乳垫处皮下,制备供瘤鼠模型.供瘤鼠瘤块长至10 mm×10 mm左右时,剥离瘤体进行鼠间传代接种,建立SGC-7901皮下移植瘤模型.将24只实验鼠按随机数字表法分为对照组和胃复方高、中、低剂量组,每组6只.对照组裸鼠每天给予0.2 mL生理盐水灌胃,胃复方高、中、低剂量组裸鼠每天给予0.2 mL相应药物灌胃,均连续给药14 d.通过祼鼠体质量、瘤体质量、抑瘤率分析干预效果,采用HE染色观察肿瘤标本.使用R程序包提取代谢物信息后,运用SIMCA软件进行主成分分析(PCA)及正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA),在Metabo Analyst软件中筛选出意义最大的代谢通路.结果 与对照组比较,中剂量胃复方抑制肿瘤生长效果较好(P<0.05),抑瘤率为35.97%,其次是高剂量和低剂量(P<0.05),抑瘤率分别为30.29%、30.07%.给药14 d内,对照组裸鼠体质量均高于胃复方高、中、低剂量组;第11天起,胃复方高、中剂量组裸鼠体质量均明显低于对照组(P<0.05).胃复方干预荷瘤裸鼠后,筛选出19种显著差异代谢物,包括甜菜碱、葫芦巴碱、水苏碱、蛋氨酸亚砜、L-酪氨酸、2,3-二羟基-3-甲基丁酸酯、肌酸、鸟氨酸、L-脯氨酸、N-乙酰亮氨酸等,其中精氨酸和脯氨酸代谢通路,烟酸和烟酰胺代谢通路,苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸代谢通路为3条关键代谢通路.结论 胃复方能抑制SGC-7901荷瘤裸鼠肿瘤生长,可能与调节体内氨基酸代谢通路有关.

目的·探讨氧化三甲胺(trimethylamine oxide,TMAO)对肥厚型心肌病(hypertrophic cardiomyopathy,HCM)小鼠心功能的影响和潜在分子机制.方法·以肌球蛋白重链6(myosin heavy chain 6,Myh6)c.1211G>A(p.R404Q+/-)点突变的小鼠(HCM小鼠)为动物模型.根据分别向饲料中补充TMAO、TMAO抑制剂碘甲基胆碱(iodomethylcholine,IMC)进行喂养,将野生型(wild type,WT)小鼠、HCM小鼠分为WT组、HCM组(HCM-1组、HCM-2组)、WT+TMAO组、HCM+TMAO组及HCM+IMC组.采用超声心动图评估上述小鼠的左心室短轴缩短(left ventricular fraction shortening,FS)率和左心室后壁厚度(left ventricular posterior wall thickness,LVPW).采用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测HCM-1组和WT组小鼠血清TMAO浓度.采用苏木精-伊红染色(hematoxylin and eosin staining,HE staining,HE染色)评估小鼠心肌细胞排列规整度.采用马松(Masson)染色评估小鼠心肌纤维化比例.使用心肌蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)试剂盒检测小鼠心肌组织PKA活性.采用蛋白质印迹法(Western blotting)检测小鼠心肌组织兰尼碱受体2(ryanodine receptor 2,RyR2)及p-RyR2(S2808)的表达.结果·超声心动图的结果显示,12月龄时WT+TMAO组、HCM+TMAO组小鼠的FS率分别低于对应的WT组、HCM-1组(均P<0.05);HCM+TMAO组小鼠的LVPW高于HCM-1组,而HCM+IMC组小鼠的LVPW低于HCM-2组(均P<0.05).ELISA结果显示,HCM-1组小鼠血清中TMAO浓度高于WT组(P<0.05).HE染色和Masson染色的结果显示,HCM+TMAO组小鼠相较于HCM-1组的心肌细胞排列规整程度较低、纤维化比例较高,而HCM+IMC组小鼠相较于HCM-2组则相反(均P<0.05).PKA的检测结果显示,经TMAO饲养后,WT+TMAO组、HCM+TMAO组小鼠的心肌组织PKA活性均有增加,而经IMC饲养的HCM+ IMC组小鼠的心肌组织PKA活性则有下降(均P<0.05).Western blotting的结果显示,经TMAO饲养后,WT+TMAO组、HCM+TMAO组小鼠的心肌组织中p-RyR2(S2808)表达升高,经IMC饲养的HCM+IMC组小鼠的p-RyR2(S2808)表达则降低(均P<0.05);而RyR2的表达在各组间未见差异.结论·TMAO可增加心肌PKA活性,诱导RyR2色氨酸2808位点发生磷酸化,能够引起HCM小鼠心室重构并损害其心功能.

目的 研究左归降糖解郁方通过调节引哚胺-2,3-双加氧酶(indoleamine2,3-dioxygenasel,IDO)信号抑制糖尿病并发抑郁症大鼠海马N-甲基D-天冬氨酸受体(N-methyl D-aspartatereceptor,NR)过激致海马突触损伤的作用机制.方法 建立糖尿病并发抑郁症大鼠模型,并随机分为空白组、模型组、IDO抑制剂(3mg/kg)组、左归降糖解郁方(20.52g/kg)组和阳性对照(二甲双胍0.18g/kg+氟西汀1.8mg/kg)组.各组大鼠ig给药28d后,采用旷场实验、强迫游泳实验和Morris水迷宫检测大鼠抑郁样行为和记忆认知功能;采用Western blotting和qRT-PCR检测海马IDO蛋白和基因表达;采用ELISA试剂盒检测血清和海马中γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)、CC族趋化因子配体2(CC chemokineligand2,CCL2)、色氨酸、5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)、犬尿氨酸、犬尿喹啉酸(kynurenine acid,KA)、喹啉酸、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-a(tumornecrosis factor-α,TNF-α)和IL-6水平;采用免疫荧光法检测海马中离子钙接头蛋白-1(ionized calcium binding adaptor molecule-1,Iba-1)、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)、突触素(synaptophysin,Syn)、突触后致密蛋白-95(post synaptic density protein-95,PSD-95)的表达;采用 Western blotting 检测海马中腺苷 A1R 受体(adenosine Al receptor,A1R)、腺苷 A2AR 受体(adenosine A2A receptor,A2AR)、腺苷 A3R 受体(adenosine A3 receptor,A3R)、N-甲基 D-天冬氨酸受体 2A(N-methyl D-aspartate receptor 2A,NR2A)、N-甲基 D-天冬氨酸受体 2B(N-methyl D-aspartate receptor 2B,NR2B)和脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)蛋白表达;采用苏木素-伊红染色、Nissl染色和TUNEL法检测海马病理损伤及凋亡情况.结果 左归降糖解郁方能显著降低模型大鼠血糖水平(P＜0.01),并改善抑郁样行为,表现为旷场实验总距离和中心时间显著增加(P＜0.01)、强迫游泳不动时间显著缩短(P＜0.01)、Morris水迷宫实验定位巡航时间显著降低(P＜0.05)和空间探索时间显著增加(P＜0.01).左归降糖解郁方组和IDO抑制剂均能通过显著下调IDO蛋白和基因表达(P＜0.001),并不同程度降低IFN-γ、CCL2、犬尿氨酸、喹啉酸水平(P＜0.05、0.01),逆转色氨酸-犬尿氨酸代谢紊乱;同时显著抑制Iba-1、GFAP表达(P＜0.05、0.01),并降低IL-1β、TNF-a、IL-6水平(P＜0.05、0.01),抑制体内炎症水平;进而降低A2AR、NR2A、NR2B蛋白表达(P＜0.05、0.01),增加A1R、A3R蛋白表达(P＜0.05),改善NR过度激活;最终提高Syn、PSD-95、BDNF表达(P＜0.05),显著改善海马病理损伤及降低神经元凋亡(P＜0.05、0.01),对海马突触损伤和神经元产生保护作用.结论 左归降糖解郁方通过抑制IDO水平,调节糖尿病并发抑郁症大鼠海马色氨酸-犬尿氨酸代谢通路,从而改善NR过激致海马突触损伤,发挥抗抑郁作用.

使用鼻腔灌洗液(nasal lavage fluid,NLF)进行代谢组学研究,探索其可行性,并用于小青龙汤治疗变应性鼻炎(aller-gic rhinitis,AR)的临床代谢组学研究,旨在通过鼻部局部代谢差异探究小青龙汤治疗AR的分子机制.以AR患者为研究对象,以鼻腔灌洗液为样本,采用液相色谱-质谱的代谢组学技术对正常组、AR组、小青龙汤组进行检测,结合主成分分析、偏最小二乘法判别分析比较各组间代谢谱的差异,得到差异代谢物,并进行相应的代谢途径分析.结果显示,小青龙汤可显著改善AR患者症状,代谢组学显示AR组与小青龙汤组对比得到 20 个差异代谢物,其中相对正常组具有回调趋势的核心代谢物为三甲基己二酸,代谢物涉及β-丙氨酸代谢、谷胱甘肽代谢、苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸生物合成等多个通路.初步证明鼻腔灌洗液在鼻部代谢组学中的可行性,找出了小青龙汤治疗AR患者的差异代谢物及富集通路,可能通过对多种代谢物的调控,从抗氧化、纠正Th1/Th2 失衡等方面改善鼻炎症状.

目的 运用代谢组学方法分析淫羊藿95％乙醇洗脱部位(E95EE)对正常大鼠尿液中内源性物质代谢的影响,通过寻找相关代谢途径及潜在作用靶点,探究其标志物表达的差异是否会随体液循环分布影响机体的不同系统,从而产生潜在的保护或毒性作用.方法 SD大鼠随机分为正常对照组和E95EE给药组,各10只,E95EE组ig给予E95EE 17.1 g·L-1,1/d,连续20 d.正常对照组以等量生理盐水代替,于末次给药后用代谢笼收集大鼠12 h尿液,处理后进行UPLC-TOF/MS分析.结果 鉴定出9个差异性的内源性代谢产物,即3-sn-磷脂酸、l-1磷脂酰乙醇胺、草酰乙酸、甲酰-N-乙酰-5-甲氧基犬尿素烯胺、N-乙酰-5-羟色胺、5,10-甲酰四氢叶酸、N-亚氨代甲基l-l-谷氨酸盐、1-酰基甘油酮3-磷酸盐和亚硫酸;6条主要代谢通路,即柠檬酸的乙酰辅酶A生物合成、组氨酸代谢、甘油三酯代谢、色氨酸代谢、维生素A代谢、糖酵解与糖异生;推测E95EE可能通过降低3-sn-磷脂酸和草酰乙酸水平,上调N-亚氨代甲基l-l-谷氨酸盐的表达,从而对神经、心血管系统发挥保护作用;可能通过降低5,10-甲酰四氢叶酸和l-1磷脂酰乙醇胺水平,增加肿瘤发生的风险.结论 E95EE对正常大鼠神经系统、心脑血管系统、免疫系统及肿瘤相关疾病存在药效与毒性并存的干预作用,其作用机制与甘油三酯代谢、维生素A代谢和色氨酸和组氨酸代谢等通路有关.

目的:对臭参正丁醇萃取部位的化学成分进行研究.方法:采用反相、凝胶和高效液相等色谱法结合核磁共振波谱、质谱等分离和鉴定臭参正丁醇萃取部位化合物的结构.结果:从中分离得到21个化合物,分别为7R,8R-苏式4,7,9,9-四羟基-3-甲氧基-8-O-4'-新木脂素-3'-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(1),儿茶素-7-O-β-D-葡萄糖苷(2),紫丁香酚苷(3),松柏苷(4),党参苷Ⅱ(5),(Z)4-羟基肉桂醇-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(6),2-羟甲基苯基-1-O-β-D-葡萄糖苷(7),苄基-6-O-β-D-吡喃木糖基-O-β-D-毗喃葡萄糖苷(8),(2E)-2-(β-D-吡喃葡萄糖氧基)-3-苯基-2-丙烯酸(9),(2Z)-2-(3-D-吡喃葡萄糖氧基)-3-苯基-2-丙烯酸(10),2-苯乙基-6-O-β-D-吡喃木糖基-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(11),党参苷Ⅰ(12),3-羟基4-｛4-[(1E)4-羟基丙-1-烯-1-基]-2-甲氧基苯氧基}丙基-β-D-毗喃葡萄糖苷(13),(2E)4-羟基-2-己烯酸(14),(2E)-3-甲基-2-戊二酸(15),5-乙酰莽草酸(16),色氨酸(17),腺苷(18),烟酸(19),咖啡因(20),5-(甲氧羰基)-2-吡咯烷酮(21).结论:21个化合物均为已知化合物,其中化合物8、9、11、13和21为首次从臭参中分离得到.

通过比较归身和归尾对溶血性血虚大鼠血清内源性代谢物的差异,探讨归身和归尾补血机制的异同.采用乙酰苯肼(APH)复制溶血性血虚大鼠模型,基于UPLC-Q-TOF/MS比较归身和归尾给药后的大鼠血清代谢指纹图谱,采用SIMCA-P14.0软件进行多变量统计分析和单变量统计分析,寻找差异代谢物.与空白对照组比,溶血性血虚模型组中琥珀酸盐、尿嘧啶、乳清酸、胞啶、尿苷、胆酸、焦谷氨酸、胞嘧啶、脱氧尿苷、3-甲基组氨酸、甲基腺苷在模型组中相对含量升高,而左旋谷酰胺、左旋色氨酸、异亮氨酸、PC(16∶ 0/16∶0)、脯氨酸相对含量降低,归身和归尾给药后,各代谢物出现不同程度的回调,归身组回调更接近正常组.同时,归身和归尾给药后可通过嘧啶代谢、氨基酸代谢、饱和和不饱和脂肪酸代谢及能量代谢等途径调节代谢通路.

目的 对色氨酸代谢物调控Th17/Treg分化在小鼠哮喘变应原特异性免疫治疗中的作用及机制进行研究.方法 将30只BALB/c鼠随机法分为5组:对照组、哮喘组、OVA-SIT组(OVA:鸡卵白蛋白;SIT:变应原特异性免疫治疗)、OVA-SIT+ 1-MT组(1-MT:IDO抑制剂,1-甲基色氨酸),OVA-SIT+1-MT+ KYN组(KYN:色氨酸代谢产物,犬尿氨酸).哮喘组:第0、7d予OVA致敏,第6周每天予1％OVA雾化激发,50 d予10％ OVA加强激发;OVA-SIT组:第4周每天予大剂量OVA皮下注射,余同哮喘组;OVA-SIT+ 1-MT组:第4周每天在腹腔内注入1-MT,1h后予大剂量OVA皮下注射h,余同哮喘组;OVA-SIT+ 1-MT+ KYN组:第3周每天加入1-MT,第4周每天加入KYN,末次加入KYN后1h予大剂量OVA行免疫治疗,余同哮喘组.末次激发6h内检测气道高反应性;对支气管肺泡灌洗液(BALF)进行细胞计数分析;ELISA检测血清IgE及BALF中IL-5、IL-10、IL-17;流式细胞技术检测脾脏CD4+RORγt+T及CD4+Foxp3+T细胞分化情况.结果 OVA-SIT+1-MT+KYN组较OVA-SIT+1-MT组酸性粒细胞浸润减少,炎症反应明显减轻.前者BALF中Il-5为74.8 ～ 86.8(83.48±6.02) pg/mL,IL-17为33.8～46.5(38.72 ±4.61) pg/mL,CD4+ RORγt+T细胞为2.45 ～2.82(2.60±0.14)％,CD4+ Foxp3+T细胞为7.83 ～9.09(8.36 ±0.53)％;后者BALF中Il-5为240.3～285.1 (259.65±16.27) pg/mL,IL-17为55.2 ～ 65.8(59.97±3.76) pg/mL,CD4+ RORγt+T细胞为4.31 ～5.34(4.94±0.38)％,CD4+Foxp3+T细胞为5.93～6.59(6.33 ±0.28)％,因此OVA-SIT+ 1-MT+ KYN组中Il-5、IL-17细胞因子以及脾脏中CD4+ RORγt+T细胞均明显低于OVA-SIT+ 1-MT组,差异均有统计学意义(P＜0.01),而前组脾脏中CD4+ Foxp3+T细胞水平明显高于后者,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 色氨酸代谢产物有助于特异性免疫治疗减轻气道炎症作用,其机制与通过调控Th17及Treg分化有关.