目的 探讨阿尔茨海默病(alzheimer disease,AD)患者血清β-淀粉样蛋白1-42(β-amyloid protein 1-42,Aβ1-42)、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白 3(nucleotide binding oligomerization domain-like receptor protein 3,NLRP3)、磷酸化 Tau-181 蛋白(phosphorylated tau-181 protein,P-Tau181)与认知功能的关系.方法 选取我院132例AD患者为AD组,并纳入同期120例健康体检者作为健康组,分别采用蒙特利尔认知评估量表(Montreal Cognitive Assessment,MoCA)、临床痴呆评估量表评估两组认知功能,根据MoCA评分将AD组患者分为轻度组、中度组和重度组,比较两组患者基线资料、血清Aβ1-42、NLRP3、P-Tau181水平.结果 AD组与健康组患者性别、年龄、体质量、病程、高血压、糖尿病、高血脂、吸烟史比较均无显著差异(P＞0.05);AD组患者血清Aβ1-42、NLRP3、P-Tau181水平均显著高于健康组(P＜0.05);重度组患者血清Aβ1-42、NLRP3、P-Tau181水平明显高于中、轻度组患者(P＜0.05),中度组患者血清Aβ1-42、NLRP3、P-Tau181水平明显高于轻度组患者(P＜0.05).结论 AD患者血清Aβ1-42、NLRP3、P-Tau181与疾病发生发展相关,其表达水平与患者认知功能损害程度正相关.

目的:探讨外源性左旋肉碱对过度内质网应激介导的严重烫伤大鼠肝细胞焦亡的影响及其分子机制。方法:采用实验研究方法。将15只6~8周龄雌性SD大鼠按随机数字表法（分组方法下同）分为假伤组、单纯烫伤组、烫伤+肉碱组，每组5只，单纯烫伤组和烫伤+肉碱组大鼠背部制作30%体表总面积的Ⅲ度烫伤，其中烫伤+肉碱组大鼠另外给予腹腔注射左旋肉碱。伤后72 h，采用全自动生化仪检测肝损伤生物化学指标天冬氨酸转氨酶（AST）和丙氨酸转氨酶（ALT）水平，样本数为5。伤后72 h，采用苏木精-伊红染色观察肝组织损伤情况。伤后72 h，采用实时荧光定量反转录PCR（RT-qPCR）法检测肝组织中细胞焦亡相关标志物核苷酸结合寡聚化结构域蛋白样受体热蛋白结构域相关蛋白3（NLRP3）、胱天蛋白酶1（caspase-1）、消皮素D和白细胞介素1β（IL-1β）以及内质网应激相关标志物葡萄糖调节蛋白78（GRP78）、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白（CHOP）的mRNA水平；采用蛋白质印迹法检测肝组织中GRP78、CHOP、NLRP3、caspase-1、caspase-1/p20、消皮素D-N、剪切型IL-1β蛋白表达水平，样本数均为5。取人肝癌细胞HepG2，分为二甲基亚砜（DMSO）组、0.1 μmol/L衣霉素组、0.2 μmol/L衣霉素组、0.4 μmol/L衣霉素组、0.8 μmol/L衣霉素组，分别作相应处理。培养24 h后，采用细胞计数试剂盒8法检测细胞活力并筛选衣霉素干预浓度（样本数为5）。取HepG2人肝癌细胞，分为DMSO组、单纯衣霉素组和衣霉素+肉碱组，分别作相应处理。培养24 h后，采用蛋白质印迹法检测细胞中GRP78、CHOP、NLRP3、caspase-1、caspase-1/p20、消皮素D-N、剪切型IL-1β蛋白表达水平，样本数均为3。对数据行单因素方差分析和LSD- t检验。 结果:伤后72 h，单纯烫伤组大鼠血清中AST和ALT水平分别为（640±22）、（157±8）U/L，均分别明显高于假伤组的（106±13）、（42±6）U/L（ t值分别为-46.78、-25.98， P<0.01）；烫伤+肉碱组大鼠血清中AST和ALT水平分别为（519±50）、（121±10）U/L，均明显低于单纯烫伤组（ t值分别为4.93、6.06， P<0.01）。伤后72 h，假伤组大鼠肝组织形态基本正常，未见明显的炎症细胞浸润；与假伤组相比，单纯烫伤组大鼠肝组织可见大量的炎症细胞浸润，细胞排列紊乱；与单纯烫伤组相比，烫伤+肉碱组大鼠肝组织可见少量的炎症细胞浸润。伤后72 h，单纯烫伤组大鼠肝组织中NLRP3、caspase-1、消皮素D和IL-1β mRNA表达水平均明显高于假伤组（ t值分别为34.42、41.93、30.17、15.68， P<0.01）；烫伤+肉碱组大鼠肝组织中NLRP3、caspase-1、消皮素D和IL-1β mRNA表达水平均明显低于单纯烫伤组（ t值分别为34.40、37.20、19.95、7.88， P<0.01）。伤后72 h，与假伤组相比，单纯烫伤组大鼠肝组织中NLRP3、caspase-1、caspase-1/p20、消皮素D-N、剪切型IL-1β蛋白表达水平均明显升高（ t值分别为12.28、26.92、5.20、10.02、24.78， P<0.01）；与单纯烫伤组相比，烫伤+肉碱组大鼠肝组织中NLRP3、caspase-1、caspase-1/p20、消皮素D-N、剪切型IL-1β蛋白表达水平均明显下降（ t值分别为10.99、27.96、12.69、8.96、12.27， P<0.01）。伤后72 h，单纯烫伤组大鼠肝组织中GRP78、CHOP的mRNA水平均明显高于假伤组（ t值分别为21.00、16.52， P<0.01），烫伤+肉碱组大鼠肝组织中GRP78、CHOP的mRNA水平均明显低于单纯烫伤组（ t值分别为8.92、8.21， P<0.01）；单纯烫伤组大鼠肝组织中GRP78、CHOP的蛋白表达水平均明显高于假伤组（ t值分别为22.50、14.29， P<0.01），烫伤+肉碱组大鼠肝组织中GRP78、CHOP的蛋白表达水平均明显低于单纯烫伤组（ t值分别为14.29、5.33， P<0.01）。培养24 h后，与DMSO组相比，0.1 μmol/L衣霉素组、0.2 μmol/L衣霉素组、0.4 μmol/L衣霉素组、0.8 μmol/L衣霉素组细胞存活率均明显下降（ t值分别为4.90、9.35、18.64、25.09， P<0.01）；选择0.8 μmol/L作为后续衣霉素的干预浓度。培养24 h后，与DMSO组相比，单纯衣霉素组细胞GRP78、CHOP的蛋白表达水平均明显升高（ t值分别为10.48、17.67， P<0.01）；与单纯衣霉素组相比，衣霉素+肉碱组细胞GRP78、CHOP的蛋白表达水平均明显下降（ t值分别为8.08、13.23， P<0.05或 P<0.01）。培养24 h后，与DMSO组相比，单纯衣霉素组细胞NLRP3、消皮素D-N蛋白表达水平均明显升高（ t值分别为13.44、27.51， P<0.01），caspase-1、caspase-1/p20、剪切型IL-1β蛋白表达水平均无明显变化（ P>0.05）；与单纯衣霉素组相比，衣霉素+肉碱组细胞NLRP3、消皮素D-N蛋白表达水平均明显下降（ t值分别为20.49、21.95， P<0.01），caspase-1、caspase-1/p20、剪切型IL-1β蛋白表达水平均无明显变化（ P>0.05）。 结论:在严重烫伤大鼠中，外源性左旋肉碱可能通过抑制过度内质网应激介导的细胞焦亡相关通路发挥对肝损伤的保护作用。

目的:评价核因子E2相关因子2/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(Nrf2/NLRP3)信号通路在丙泊酚后处理减轻氧糖剥夺-复糖复氧大鼠海马神经元损伤中的作用。方法:原代培养孕16~18 d Wistar大鼠胎鼠海马神经元7 d，采用随机数字表法分为4组( n＝42)：对照组(C组)正常培养；氧糖剥夺-复糖复氧组(O组)氧糖剥夺1 h后复糖复氧；丙泊酚后处理组(P组)复糖复氧即刻加入丙泊酚(终浓度1.2 μg/ml)孵育2 h，更换为正常培养液；Nrf2 siRNA(-)转染组(N组)原代神经元培养第3天行携带Nrf2基因敲除的慢病毒转染，24 h后更换为正常培养液，第7天进行模型制备及丙泊酚后处理。于继续培养24 h时收集细胞，采用流式细胞术检测神经元凋亡率，RT-PCR法检测Nrf2和NLRP3 mRNA表达，Western blot法检测Nrf2和NLRP3表达，ELISA法测定TNF-α、IL-6和IL-1β浓度；试剂盒法检测还原性谷胱甘肽(GSH)、SOD和过氧化氢酶(CAT)活性。 结果:与C组比较，O组和P组神经元凋亡率升高，TNF-α、IL-6和IL-1β浓度升高，GSH、SOD和CAT水平降低，Nrf2、NLRP3及其mRNA表达上调，Nrf2细胞核/浆比例增加( P<0.05)；与O组比较，P组神经元凋亡率降低，TNF-α、IL-6和IL-1β浓度降低，GSH、SOD和CAT水平升高，Nrf2及其mRNA表达上调，Nrf2细胞核/浆比例增加，NLRP3及其mRNA表达下调( P<0.05)；与P组比较，N组神经元凋亡率升高，TNF-α、IL-6和IL-1β浓度升高，GSH、SOD和CAT水平降低，Nrf2及其mRNA表达下调，Nrf2细胞核/浆比例降低，NLRP3及其mRNA表达上调( P<0.05)。 结论:Nrf2/NLRP3信号通路参与了丙泊酚后处理减轻氧糖剥夺-复糖复氧大鼠海马神经元损伤的过程。

目的:观察生慧益智汤对AD模型快速老化小鼠（SAMP8）学习记忆能力的影响，并探讨其作用机制。方法:将24只SAMP8小鼠按随机数字表法分为模型组、安理申组（1 mg/kg）、生慧益智汤组（15.6 g/kg），每组8只，8只同龄、同品系的对抗快速老化小鼠（SAMR1）设为对照组，分别给予相应药物或等体积蒸馏水连续灌胃90 d。给药结束后，采用Morris水迷宫检测小鼠学习记忆和空间探索能力，免疫组化染色检测小鼠海马β淀粉样蛋白1-42（Aβ 1-42）表达，ELISA法检测海马IL-1β、IL-6、TNF-α水平，采用实时荧光定量PCR、Western blot法检测海马组织核苷酸结合寡聚化结构域样受体3（NLRP3）、Caspase-1、IL-1β mRNA和蛋白表达。 结果:与模型组比较，生慧益智汤组和安理申组小鼠空间探索能力和记忆能力改善（ P<0.05或 P<0.01），海马区Aβ 1-42表达减少（ P<0.01），TNF-α、IL-6、IL-1β水平降低（ P<0.01或 P<0.05），NLRP3、Caspase-1及IL-1β mRNA及蛋白表达降低（ P<0.01或 P<0.05）。 结论:生慧益智汤可有效改善SAMP8小鼠的学习记忆能力，其机制可能与调控NLRP3/Caspase-1/IL-1β通路抑制炎症小体活化、抑制神经炎症反应有关。

目的:探讨核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3（NLRP3）炎症小体表达与湿性年龄相关性黄斑变性（wAMD）抗血管内皮生长因子（VEGF）治疗后黄斑结构改善的关系。方法:自身前后对照研究。选取2019年8月至2021年12月山东第一医科大学附属人民医院眼科收治的wAMD患者110例（110眼），玻璃体注射抗VEGF药物（雷珠单抗或贝伐单抗）治疗，收集患者房水，采用荧光定量PCR技术检测房水中NLRP3、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1（Caspase-1）、凋亡相关斑点样蛋白（ASC）及白细胞介素（IL）1β的mRNA水平，酶联免疫吸附（ELISA）法检测房水中IL-1β、IL-18、肿瘤坏死因子α（TNF-α）及VEGF水平，分析上述指标与wAMD患者中心黄斑厚度（CMT）的相关性。结果:纳入110例wAMD患者，男68例，女42例，年龄（68.7±7.6）岁。与治疗前比较，wAMD患者注药1针和注药2针后房水中NLRP3（1.65±0.27、1.34±0.19比1.97±0.23，均 P<0.017）、Caspase-1（1.47±0.15、1.29±0.17比1.53±0.18，均 P<0.017）、ASC（1.33±0.14、1.21±0.18比1.47±0.12，均 P<0.017）、IL-1β（1.78±0.21、1.46±0.17比2.21±0.24，均 P<0.017）mRNA水平及IL-1β［（26.9±5.7）、（20.3±4.6）比（33.6±8.3）ng/L，均 P<0.017］、IL-18［（32.7±7.6）、（23.3±6.9）比（46.4±9.4）ng/L，均 P<0.017］、TNF-α［（39.4±6.6）、（21.7±6.3）比（52.9±9.1）ng/L，均 P<0.017］、VEGF［（35.7±10.2）、（23.4±6.7）比（65.4±19.3）ng/L，均 P<0.017］水平均降低，且注药2针后上述指标均低于注药1针后（均 P<0.017）。多重线性回归分析结果显示，注药后NLRP3 mRNA（注药1针β=53.750， P<0.001；注药2针β=94.648， P<0.001）、IL-1β（注药1针β=1.356， P=0.021；注药2针β=2.008， P=0.003）、IL-18（注药1针β=1.984， P<0.001；注药2针β=1.251， P=0.003）及VEGF（注药1针β=1.875， P<0.001；注药2针β=2.119， P<0.001）水平与CMT呈线性关系。 结论:房水中NLRP3炎症小体及其产物表达降低可能与wAMD患者抗VEGF治疗后黄斑结构的改善有关。

目的:研究慢性阻塞性肺疾病(COPD)稳定期患者外周血核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)与肺功能及血清炎症因子的相关性。方法:本研究为病例对照研究。采用非随机抽样法，选取涉县医院呼吸与危重症医学科2019年1月至2021年12月诊治的稳定期COPD患者106例设为观察组，并根据慢性阻塞性肺疾病全球创议(GOLD)分级标准将患者按COPD严重程度分为轻中度组(42例)、重度组(39例)、极重度组(25例)，另选择同期来院体检的40名健康者作为对照组。测定纳入对象入院时NLRP3、肺功能指标[第1秒用力呼气容积(FEV 1)与第1秒用力呼气容积占预计值百分比(FEV 1%pred)、FEV 1/用力肺活量(FVC)]及血清炎症因子[白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]水平。对比观察组和对照组NLRP3、肺功能指标及血清炎症因子水平，借助受试者工作特征曲线分析NLRP3、FEV 1%pred、FEV 1/FVC、IL-1β、TNF-α对COPD重度及极重度发生的诊断价值。对比不同GOLD分级患者NLRP3、肺功能指标及血清炎症因子水平，采用Spearman秩相关分析NLRP3与肺功能及血清炎症因子的相关性。 结果:观察组NLRP3、IL-1β、TNF-α水平显著高于对照组，FEV 1%pred、FEV 1/FVC显著低于对照组( P值均<0.05)。经受试者工作特征曲线分析，NLRP3、FEV 1%pred、FEV 1/FVC、IL-1β、TNF-α诊断COPD重度及极重度发生的曲线下面积分别为0.79、0.83、0.88、0.93、0.94( P值均<0.05)。极重度组NLRP3、IL-1β、TNF-α水平显著高于轻中度组及重度组，FEV 1%pred、FEV 1/FVC显著低于轻中度组及重度组( P值均<0.05)；重度组NLRP3、IL-1β、TNF-α水平显著高于轻中度组，FEV 1%pred、FEV 1/FVC显著低于轻中度组( P值均<0.05)。经相关性分析，NLRP3与FEV 1%pred、FEV 1/FVC均呈负相关，与IL-1β、TNF-α水平均呈正相关( P值均<0.05)。 结论:NLRP3与稳定期COPD患者FEV 1%pred、FEV 1/FVC、IL-1β、TNF-α水平具有明显相关性，临床应给予关注。

目的:探讨脑脊液中α-突触核蛋白寡聚体(o-α-syn)与老年患者髋关节置换术后认知功能障碍(POCD)的关系.方法:选取择期行髋关节置换术的136例老年患者作为研究对象,患者拟行蛛网膜下隙阻滞,抽取脑脊液2 mL.记录患者手术时长、体质量指数、年龄、性别、术中出血量等.分别于术前1 d、术后7 d评估认知功能.将术后发生POCD为POCD组,采用1:1配对,从未发生POCD的患者中选取病例数,为Non-POCD组.采用ELISA法测量两组脑脊液中的总α-突触核蛋白(t-α-syn)、o-α-syn、Aβ40、Aβ42的浓度.结果:发生POCD有17例,POCD发生率为16％.两组患者受教育年限、性别、年龄、BMI、术前MMSE评分、术中失血量和手术时间均无统计学差异.与Non-POCD组比较,POCD组MMSE、DST2、CDT评分降低(P<0.05);与Non-POCD组比较,POCD组t-α-syn、o-α-syn、Aβ40、Aβ42均显著升高(P<0.05).Logistic回归分析结果显示,t-α-syn(OR=1.003,95％CI:1.000～1.006,P<0.05)、o-α-syn(OR=1.245,95％CI:1.020～1.520,P<0.05)、Aβ40(OR=1.001,95％CI:1.000～1.002,P<0.05)、Aβ42(OR=1.024,95％CI:1.006～1.043,P<0.05)均是老年人髋关节置换术后认知功能障碍的危险因素.ROC曲线分析提示,o-α-syn是预测POCD曲线下面积为0.749(P<0.05).结论:脑脊液中o-α-syn浓度升高是老年髋关节置换患者术后发生认知功能障碍的独立危险因素,是预测POCD的一个良好的指标.

目的 观察沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)/过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α(PGC-1α)的表达及检测活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量和线粒体膜电势,探讨丹酚酸B(SalB)减轻β淀粉样多肽1-42(A β1-42)干预小鼠来源神经瘤母细胞(N2A)后氧化应激损伤的作用及机制.方法 使用10 μM Aβ1-42寡聚体干预N2A细胞构建阿尔茨海默病(AD)细胞模型,使用40μM SalB干预细胞为对照组,模型组和SalB干预组.使用MTT法检测不同实验组细胞活力;DCFH-DA染色测定实验组细胞内ROS水平;ELISA法检测SOD,MDA水平;Western blot法和RT-PCR法分别检测不同实验组SIRT1、PGC-1 α蛋白和mRNA水平.结果 与A β干预N2A细胞构建的模型组相比,SalB组处理后的模型组细胞活力显著升高(P＜0.001),SalB组细胞中ROS水平显著下降(P＜0.01),SOD水平显著上升(P＜0.001),MDA生成显著减少(P＜0.05),有效恢复线粒体膜电势(P＜0.05).另外,SalB处理后模型组细胞的SIRT1、PGC-1 α蛋白和mRNA水平均升高.结论 SalB可以显著降低A β干预N2A细胞后诱导的氧化应激反应,减少ROS产生及下调MDA水平,上调SOD水平,该神经保护作用可能与上调SIRT1/PGC-1α通路相关.

目的 探讨巴戟天丸组方对Aβ损伤成骨细胞的骨形成作用及其机制.方法 以新生 24 h Wistar大鼠所分离的成骨细胞为研究对象,用 Aβ1-42 寡聚体对成骨细胞进行损伤,并用巴戟天丸组方水提物进行药物干预.分别采用MTT法、碱性磷酸酶(ALP)活性检测、过氧化氢酶(CAT)活性检测、超氧化物歧化酶(SOD)活性检测、谷胱甘肽(GSH)活性检测以及丙二醛(MDA)活性检测.采用蛋白质印迹法检测骨形成相关蛋白骨形态发生蛋白 2(BMP2)、成骨特异性转录因子(RUNX-2)、骨保护蛋白(OPG)的表达水平;明确巴戟天丸组方对Aβ损伤成骨细胞的作用后,采用网络药理学方法对潜在的作用机制进行预测.结果 巴戟天丸组方可显著促进Aβ损伤成骨细胞的增殖,提高 ALP、SOD、GSH 活性,抑制MDA活性,并促进骨形成相关蛋白BMP2、RUNX-2、OPG的表达.网络药理学分析显示,巴戟天丸组方发挥改善Aβ损伤成骨细胞的作用主要与AGE-RAGE信号通路、PI3K-Akt信号通路、MAPK信号通路以及神经活性配体与受体的相互作用通路等有关.结论 明确巴戟天丸组方具有改善Aβ损伤成骨细胞的作用,并通过网络药理学方法探究其相关作用通路,为传统方剂巴戟天丸抗骨质疏松的临床应用提供借鉴.

目的:通过体内外实验探讨阿尔茨海默病关键发病分子β-淀粉样蛋白42寡聚体(Aβ42Os)作用下离子型谷氨酸受体N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDAR)亚基(NR2A、NR2B和NR1)和代谢型谷氨酸受体5(mGluR5)在突触内外的表达分布变化.方法:(1)用不同浓度的Aβ42Os处理乳小鼠原代神经元,Western blot和免疫荧光染色检测原代神经元中mGluR5和NMDAR的表达和分布情况.(2)在C57BL/6小鼠侧脑室立体定位注射不同浓度的Aβ42Os,Western blot检测海马组织中mGluR5和NMDAR在突触内外的蛋白水平,以及mGluR5下游磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(PKB/AKT)信号通路相关蛋白、钙信号下游通路相关蛋白和突触相关蛋白的表达.结果:(1)高浓度Aβ42Os处理原代小鼠神经元增加mGluR5表达(P<0.01),减少NR2A、NR2B和NR1表达(P<0.01);引起mGluR5膜表面聚集,而使NR2A、NR2B和NR1膜表面表达分布减少.(2)高浓度Aβ42Os引起小鼠海马组织中突触mGluR5表达增加(P<0.01),NR2A(P<0.05)和NR2B(P<0.01)表达减少,突触外NR2B表达增加(P<0.01);抑制PI3K表达及AKT和细胞外信号调节激酶(ERK)磷酸化,过度激活钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶IIα(CaMKIIα);引起突触后致密蛋白95、亲棘蛋白(spinophilin)、突触小泡蛋白(synaptophysin)和微管相关蛋白2表达减少(P<0.01).结论:(1)高浓度Aβ42Os引起神经元突触mGluR5过度聚集,NR2A、NR2B和NR1表达减少,而突触外NR2B表达增加.(2)高浓度Aβ42Os抑制PI3K/AKT和ERK信号通路,过度激活CaMKIIα通路,损伤突触结构.