目的:比较人肺腺癌顺铂耐药株A549/DDP细胞与人肺腺癌顺铂敏感株A549细胞的自噬水平,观察微小RNA-126(microRNA-126,miRNA-126)对肺癌顺铂耐药细胞自噬的影响,并探讨miRNA-126在肺癌顺铂耐药中的作用.方法:MTT法检测顺铂的半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50);RT-qPCR检测miRNA-126转染后肺癌细胞中miRNA-126的表达量;吖啶橙染色观察肺癌细胞自噬囊泡的形成情况;Western blot检测自噬标志蛋白微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)的表达变化.结果:A549/DDP细胞自噬囊泡数量和LC3水平显著高于A549细胞(P<0.01);转染miRNA-126上调了A549/DDP细胞中miRNA-126的表达量(P<0.01);miRNA-126降低A549/DDP细胞中自噬囊泡比例和LC3-Ⅱ蛋白表达水平(P<0.01),从而抑制了顺铂耐药细胞A549/DDP的自噬水平;自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)提高A549/DDP细胞对顺铂的敏感性,miRNA-126联合3-MA进一步增加A549/DDP细胞对顺铂的敏感性(P<0.01).结论:miRNA-126通过抑制自噬逆转了肺癌A549/DDP细胞顺铂耐药.

目的:探讨补中益气汤含药血清联合顺铂对人肺腺癌A549/DDP细胞中核因子红系2 相关因子2（Nrf2）及其下游抗氧化蛋白的影响。方法:将60只大鼠按随机数字表法分为空白组、低剂量组、中剂量组、高剂量组，每组15只。低、中、高剂量组分别灌胃3.29、6.57、13.13 g/kg补中益气汤，1次/d，持续7 d。末次给药后1 h，腹主动脉取血，制备补中益气汤含药血清。将A549/DDP细胞按随机数字表法分为空白组（空白组大鼠血清）、模型组（空白组大鼠血清+顺铂）、低剂量组（低剂量含药血清+顺铂）、中剂量组（中剂量含药血清+顺铂）、高剂量组（高剂量含药血清+顺铂），相应药物干预24 h后，采用CCK-8法检测各组A549/DDP细胞对顺铂的半数抑制浓度（IC 50）；共聚焦荧光定位法检测p-Nrf2荧光表达强度；RT-qPCR法检测Nrf2 mRNA水平；Western blot法检测各组A549/DDP细胞中Nrf2、p-Nrf2、过氧化物还原酶1（PRX1）、谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）、SOD蛋白相对表达。 结果:与模型组比较，低、中、高剂量组A549/DDP细胞对顺铂的IC 50降低（ P<0.01）；p-Nrf2荧光强度降低（ P<0.01）；Nrf2 mRNA水平降低（ P<0.01）；Nrf2、p-Nrf2、SOD、PRX1、GPX4蛋白表达下调（ P<0.01），尤以中、高剂量组效果更显著（ P<0.05）。 结论:补中益气汤含药血清通过抑制A549/DDP细胞中Nrf2活性表达及下调其靶基因SOD、PRX1、GPX4蛋白表达，改善肺腺癌顺铂耐药。

中药通过干预人肺腺癌A549细胞发挥抗肿瘤作用，主要包括通过影响PI3K/Akt等通路激活或抑制下游靶蛋白Bcl-2、Bax或形成RIP1/RIP3/MLKL复合小体，从而诱导肺腺癌A549细胞凋亡；使细胞生长期阻滞，从而抑制肺腺癌A549细胞增殖；通过影响MMPs通路、STAT3通路和调控上皮间充质转化相关因子，从而抑制A549细胞侵袭和转移；抑制或激活相关蛋白表达或影响相关信号通路，从而逆转肺癌A549/DDP细胞株对顺铂和紫杉醇的耐药性。

目的 观察肺复方对人肺癌顺铂耐药株A549/DDP细胞耐药性的作用及对PI3K/Akt/Nrf2信号通路的影响.方法 选用A549/DDP细胞设立不含药血清的空白对照组、肺复方组、顺铂组、联合组,流式细胞术检测各组细胞周期分布和细胞中活性氧(ROS)的变化,Western blotting和RT-PCR检测PI3K/Akt/Nrf2信号通路及下游血红素氧合酶1(HO-1)、NAD(P)H:醌氧化还原酶1(NQO1)、多药耐药相关蛋白1(MRP1)的表达变化.结果 与空白对照组、顺铂组相比,联合组引起细胞G1期阻滞,增加细胞内活性氧的累积,差异具有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01);与空白对照组比,肺复方组和联合组能减少Nrf2核转位,下调p-Akt、HO-1、NQ01、MRP1蛋白表达和mRNA表达水平,差异具有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).结论 肺复方能够通过调控PI3K/Akt/Nrf2信号通路增加A549/DDP细胞对顺铂的敏感性.

目的 探索贝伐单抗是否可逆转肺腺癌顺铂耐药并探讨其作用机制.方法 按处理方式不同将细胞分为对照组(Control)、顺铂组(DDP)、贝伐单抗组和联合组(贝伐单抗/DDP).细胞增殖活性(CCK8法)检测DDP对肺腺癌细胞系(A549)和顺铂耐药细胞株(A549/DDP)细胞增殖活力的影响,检测A549/DDP细胞的耐药系数,并检测贝伐单抗联合DDP对A549/DDP细胞的杀伤作用;细胞侵袭实验(Transwell法)用于检测细胞的侵袭能力,细胞划痕实验检测细胞迁移,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白免疫印迹(Western blot)检测基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血管内皮生长因子(VEGF)的释放水平.结果 贝伐单抗及DDP均能有效抑制A549/DDP细胞的迁移和侵袭,并促进凋亡,贝伐单抗联合DDP较单独使用贝伐单抗及DDP的效果更明显,差异均有统计学意义(P<0.05).此外,贝伐珠单抗与DDP均能抑制A549/DDP细胞中VEGF的释放,下调MMP-2、MMP-9蛋白的表达,且贝伐单抗联合顺铂抑制效果更为显著,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 贝伐单抗通过抑制MMP-2、MMP-9蛋白表达及VEGF释放抑制肺腺癌顺铂耐药细胞株的增殖、迁移及侵袭能力,并促进凋亡,从而逆转顺铂耐药.

目的:明确康莱特注射液(KLTi)通过调控胆固醇代谢对肺腺癌A549细胞恶性生物学行为的抑制作用.方法:构建A549细胞体外培养模型,设置空白对照组(CON组)、KLTi组、顺铂(DDP)组及KLTi+DDP组,分别给予对应药物干预,采用CCK-8法检测不同分组的药物干预对A549细胞增殖的影响,并确定IC50值用于后续实验;使用细胞划痕实验、平板克隆形成实验、Transwell侵袭实验观察不同分组药物对A549细胞恶性生物学行为的影响;流式细胞术检测不同分组药物对A549细胞晚期凋亡水平的影响;WB法检测各组细胞上皮间质转化(EMT)相关蛋白表达,ELISA法检测促炎因子释放水平.采用比色法检测细胞胆固醇含量水平的组间差异,借助WB法检测胆固醇代谢相关膜通道蛋白ATP结合盒转运蛋白A1(ABCA1)及功能蛋白ATP柠檬酸裂解酶(ACLY)、肽基脯氨酰异构酶B(PPIB)表达水平差异.结果:KLTi及DDP对A549细胞抑制作用具有时间及剂量依赖性(均P<0.05),最终选择2 mg/mL KLTi、3 μg/mL DDP作为干预剂量,按分组加药干预48 h后显示,KLTi单用或联合DDP均可抑制A549细胞克隆形成、迁移、侵袭能力且促进其晚期凋亡,KLTi+DDP组的效果更加明显(P<0.05或P<0.01);KLTi单用或联合DDP可通过调控E-cadherin、vimentin、snail蛋白表达从而影响A549细胞EMT进程(P<0.05或P<0.01),同时下调IL-6及IL-8的释放水平(P<0.05或P<0.01).KLTi单用及联合DDP均可以明显降低A549细胞胆固醇含量(P<0.05或P<0.01),并且对ABCA1、ACLY、PPIB表达具有调控作用,联合组的效果更加明显(P<0.05或P<0.01).结论:KLTi可能通过调控胆固醇代谢水平及相关通道蛋白抑制肺腺癌A549细胞增殖、迁移、侵袭等恶性生物学行为及EMT进程.

目的 探讨吉马酮(GMC)调节局部黏着斑激酶(FAK)/Yes相关蛋白(YAP)通路对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞顺铂(DDP)耐药性的影响.方法 将A549/DDP细胞分为CK组、低剂量GMC组(GMC-L组,5μmol/L)、中剂量GMC组(GMC-M组,10μmol/L)、高剂量GMC组(GMC-H组,20μmol/L)、GMC-H+pcDNA组(20μmol/L+转染pcDNA)、GMC-H+pcDNA-FAK组(20μmol/L+转染pcDNA-FAK).检测各组细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭情况;检测多药耐药基因1(MDR1)、增殖细胞核抗原(PCNA)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、磷酸化的FAK(p-FAK)、YAP蛋白表达情况.结果 与CK组比较,GMC-L组、GMC-M组、GMC-H组A549/DDP细胞OD450值、克隆形成率、划痕愈合率、侵袭细胞数、MDR1、PCNA、Bcl-2、MMP-2、MMP-9、p-FAK蛋白及核YAP蛋白表达降低,细胞凋亡率升高,且呈浓度依赖性(P＜0.05);与GMC-H组、GMC-H+pcDNA组比较,GMC-H+pcDNA-FAK组A549/DDP细胞OD450值、克隆形成率、划痕愈合率、侵袭细胞数、MDR1、PCNA、Bcl-2、MMP-2、MMP-9、p-FAK蛋白及核YAP蛋白表达升高,细胞凋亡率降低(P＜0.05).结论 GMC可能通过抑制FAK/YAP信号通路减弱NSCLC细胞DDP耐药性.

目的 探讨circ重组人溶酶体相关膜蛋白(LAMP)1 对肺癌细胞顺铂(DDP)耐药性的影响及其机制是否与miR-1193 有关.方法 用浓度为 1.25、2.50、5.00、10.00、20.00、40.00 μg/ml的DDP 处理A549 细胞、A549/DDP 细胞,噻唑蓝(MTT)检测A549、A549/DDP细胞抑制率及半数抑制浓度(IC50);将A549/DDP 细胞分为DDP+si-circLAMP1 组、DDP+si-NC组、DDP+miR-1193 组、DDP+miR-NC组、DDP+si-circLAMP1+anti-miR-1193 组、DDP+si-circLAMP1+anti-miR-NC组;实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测A549 及A549/DDP细胞中circLAMP1 和miR-1193 的表达水平;CCK-8和克隆形成实验检测细胞增殖;划痕实验和Transwell分别检测迁移和侵袭;流式细胞术检测细胞凋亡;Western印迹法检测蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验检测circLAMP1 和miR-1193 的靶向关系.结果 与A549 细胞相比,A549/DDP细胞抑制率降低,IC50 值升高,circLAMP1 表达水平升高,miR-1193 表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05).干扰circLAMP1 表达或miR-1193 过表达联合DDP处理后,A549/DDP细胞活性、克隆形成数、划痕愈合率、侵袭数及N-cadherin蛋白表达降低,凋亡率及E-cad-herin、cleaved-caspase3 和cleaved-caspase9 蛋白表达升高,差异有统计学意义(P<0.05).下调miR-1193 表达逆转了干扰cir-cLAMP1 表达联合DDP对A549/DDP细胞增殖、迁移侵袭和凋亡的作用.circLAMP1 靶向负调控miR-1193.结论 干扰cir-cLAMP1 表达可通过靶向调控miR-1193 增强DDP对A549/DDP细胞增殖、迁移、侵袭的抑制和凋亡促进作用,可降低肺癌细胞的DDP耐药性.

[目的]探究补中益气汤的有效成分槲皮素联合顺铂治疗在增强肺腺癌对顺铂敏感性中的作用及其潜在分子机理.[方法](1)网络药理学分析:从TCMSP数据库筛选补中益气汤的有效成分及其对应靶点,从TCGA数据库下载肺腺癌疾病的数据,并基于差异分析和网络药理学分析挖掘补中益气汤治疗肺腺癌的主要活性成分和潜在作用靶点,通过富集分析以判断相关信号通路,通过分子对接模拟技术分析关键基因与有效成分之间的对接关系.(2)细胞实验:槲皮素或顺铂单一处理以及两者联合处理肺腺癌细胞(A549、A549/DDP),通过细胞计数试剂盒(CCK)-8、Western Blot法、流式细胞术分别对应分析肺腺癌细胞的细胞活力、关键蛋白的表达和细胞凋亡情况.细胞热迁移分析(CETSA)验证活性成分槲皮素与靶蛋白谷胱甘肽S-转移酶π(GSTP1)的结合关系.[结果]补中益气汤中的有效成分槲皮素能与GSTP1紧密结合.通路富集分析显示槲皮素和顺铂可能通过铂类耐药以及Janus激酶(JAK)-信号传导与转录激活因子(STAT)通路影响肺腺癌的进展.此外,槲皮素联合顺铂可下调肺腺癌细胞中GSTP1和JAK-STAT信号通路相关蛋白的表达.在功能上,槲皮素能加强顺铂诱导的肺腺癌细胞的抗癌活性.[结论]槲皮素可减轻肺腺癌耐药细胞对顺铂的耐药性.

目的 观察龙胆苦苷对非小细胞肺癌细胞A549 株化疗敏感性的影响,并探讨可能机制.方法 取对数期A549/DDP细胞,随机分为对照组(常规培养基)、龙胆苦苷组(培养基含有龙胆苦苷 40 μmol/L)、IGF-1 组(培养基含有IGF-1 100 μg/L)、联合组(培养基含有龙胆苦苷40 μmol/L及IGF-1 100 μg/L).培养48h进行后续实验.MTT法检测细胞增殖抑制率;流式细胞术检测细胞凋亡率;MDC染色检测细胞自噬小体;Western blot法检测细胞微管相关蛋白1轻链3 融合蛋白Ⅱ(LC3Ⅱ)、p62/SQSTM1、蛋白激酶B(Akt)、p-Akt、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、p-mTOR蛋白表达量.结果 与对照组比较,龙胆苦苷组增殖抑制率、凋亡率、MDC阳性率、LC3Ⅱ蛋白表达量升高,p62/SQSTM1 蛋白表达量、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR降低(P＜0.05),IGF-1 组增殖抑制率、凋亡率、MDC阳性率、LC3Ⅱ蛋白表达量降低,p62/SQSTM1 蛋白表达量、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR升高(P＜0.05);与龙胆苦苷组比较,联合组增殖抑制率、凋亡率、MDC阳性率、LC3Ⅱ蛋白表达量降低,p62/SQSTM1 蛋白表达量、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR升高(P＜0.05);与IGF-1组比较,联合组增殖抑制率、凋亡率、MDC阳性率、LC3Ⅱ蛋白表达量升高,p62/SQSTM1 蛋白表达量、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR降低(P＜0.05).结论 龙胆苦苷可诱导非小细胞肺癌耐药细胞自噬并提升其化疗敏感性,抑制PI3K/Akt信号通路可能是其作用机制之一.