目的:探讨沉默信息调节因子2(SIRT2)的选择性抑制剂AGK2对硫代乙酰胺(TAA)诱导的L02肝细胞的线粒体保护作用及相关机制。方法:体外培养人源性肝细胞系L02细胞，以不同浓度SIRT2抑制剂AGK2作为干预药物，CCK8检测不同浓度的AGK2对L02细胞活性的影响，选取适宜的浓度为AGK2干预组。正常组不予以任何药物干预；造模组给予90 mmol/L TAA进行造模；低、中、高剂量AGK2组在造模2 h前分别加入1、2、4 μmol/L AGK2。CCK8检测各组细胞活性。倒置光镜下观察细胞形态变化。蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞内异柠檬酸脱氢酶(IDH1)、苹果酸脱氢酶(MDH1)、SIRT2和裂变蛋白1同系物(FIS1)的蛋白相对表达量。共聚焦激光扫描显微镜下观察各组细胞SIRT2的表达情况。荧光显微镜下观察各组细胞线粒体膜电位。结果:当AGK2的浓度为1、2、4 μmol/L时，细胞的存活率分别为98.05%、95.76%、91.65%，与正常组相比差异均无统计学意义(均 P>0.05)。当AGK2浓度为8、16、32、64、128 μmol/L时，细胞存活率与正常组相比均显著下降(均 P<0.05)。与模型组相比，低、中、高剂量AGK2组L02细胞活性和贴壁性较好，漂浮细胞显著减少，且AGK2浓度越高细胞活性和贴壁性越好，漂浮细胞越少。与模型组相比，AGK2组的L02细胞显示红色荧光增强，而绿色荧光减弱，且AGK2浓度越高红色荧光越强，绿色荧光越弱。与模型组相比，低、中、高剂量AGK2组L02细胞内SIRT2的荧光减弱，且AGK2浓度越高，SIRT2的荧光越弱。低、中、高剂量AGK2组L02细胞内IDH1、MDH1的蛋白表达量显著高于模型组(均 P<0.05)，且与AGK2的浓度呈正相关( r＝0.818， P<0.05； r＝0.960， P<0.05)；SIRT2和FIS1的蛋白表达量显著低于模型组( P<0.05)，且与AGK2的浓度呈负相关( r＝－0.992， P<0.05； r＝－0.998， P<0.05)。 结论:AGK2可以降低TAA刺激的L02细胞内线粒体膜电位、增加IDH1和MDH1蛋白表达量，减少L02细胞内SIRT2和FIS1的蛋白表达量，且作用呈剂量依赖性。

孕妇24岁，孕3产2，孕25周。按照《超声产前筛查指南2021》对胎儿进行筛查，胎儿头面部超声检查显示：胎儿颅骨环、大脑镰、透明隔腔、侧脑室、脉络丛、丘脑、小脑、小脑延髓池及上唇冠状切面均未见明显异常；胎儿双侧眼眶可见，双眼球大小正常，双侧晶状体呈高回声，左侧大小约2.9 mm×2.7 mm，右侧大小约3.0 mm×2.9 mm，透声差(图1)。胎儿心脏超声检查显示：四腔心结构存在，心房正位，心室右襻，左右心房、心室腔基本对称，左心室流出道、右心室流出道可显示，左心室可见一点状强回声(图2)。胎儿脊柱、胸腔、腹部、四肢等结构均未见明显异常。产前超声提示：胎儿双侧晶状体呈高回声，先天性白内障可能，胎儿左心室点状强回声，建议遗传咨询。胎儿12 ＋4周超声检查提示颈项透明层1.0 mm，15 ＋1周胎儿无创DNA检测21-三体、18-三体、13-三体均为低风险，耳聋基因检测未见异常。家族史：夫妻双方均健康，否认家族性传染病史、遗传病史及类似疾病史。孕产史：孕妇怀孕3次，第一胎，女性，产检未见异常，产后体检正常，第3个月时出现呼吸功能异常，抢救无效死亡，未进一步明确诊断；第二胎，女性，产检未见异常，生后左眼瞳孔中心可见白点，右眼不明显白点，2个月时确诊先天性白内障，3个月左右夭折，未进一步明确诊断；本次为第三次妊娠，产前超声提示胎儿双侧晶状体呈高回声，先天性白内障可能，胎儿左心室点状强回声，建议遗传咨询。孕妇及家属慎重考虑后决定终止妊娠，于本院引产一女性胎儿，生后双眼瞳孔可见白点，孕妇拒绝病理检测，同意基因检测。后全外显子组测序显示：胎儿的AGK基因7号外显子存在1个纯合变异c.412C>T(p.R138*)(图3)，为无义突变，经Sanger验证，该变异遗传自父母。

目的 探究大黄素(Emodin)对脂多糖(LPS)刺激的小鼠巨噬细胞系(RAW264.7)氧化应激反应的影响及其机制.方法 利用LPS、RAW264.7细胞和大黄素进行研究.设空白对照(Control)组、LPS(1 μg/mL)组、LPS(1 μg/mL)+大黄素(15 μmol/L预处理)组,在予LPS处理后6、12、18 h检测丙二醛(MDA)含量、细胞内活性氧(ROS)水平以及沉默信息调节因子2(Sirt2)表达水平等.使用Sirt2抑制剂AGK2(20 μmol/L)预处理RAW264.7细胞,仅在予LPS处理后6 h检测上述指标.结果 与Control组相比,各时间点LPS组RAW264.7细胞的MDA含量、ROS水平及Sirt2 mRNA水平及蛋白表达水平均增加(P<0.05).LPS+大黄素组与LPS组相比,各时间点的RAW264.7细胞Sirt2 mRNA水平及蛋白水平均显著升高(P<0.05),ROS水平均降低(P<0.05);6、18 h的MDA含量均降低(P<0.05).与LPS+大黄素组相比,LPS+大黄素+AGK2组Sirt2 mRNA及蛋白表达水平均降低,且MDA含量、ROS水平均增加(P<0.05).结论 LPS刺激RAW264.7细胞后氧化应激反应显著增加,大黄素可通过Sirt2在LPS刺激RAW264.7细胞模型中抑制氧化应激反应.

目的 探讨儿童横纹肌肉瘤(AMS)伴颅内浸润的临床特点、治疗方法和预后.方法 回顾性分析2012年12月至2017年12月首都医科大学附属北京同仁医院儿科收治的AMS伴颅内浸润患儿的临床资料,共12例,其中男5例,女7例;发病年龄1. 2~10. 2岁,中位年龄3. 4岁.总结12例患儿的临床特点、治疗方法及预后.结果 12例患儿中,9例原发部位为头颈部(75﹪),2例为胸背部(17﹪),1例为会阴(8﹪).9例患儿有较明显的中枢神经系统受累症状,12例患儿均有颅内浸润的头颅影像学表现.临床病理分期及危险度分级:6例 Ⅳ 期(1例为中枢侵犯),6例Ⅲ期(4例为中枢侵犯);高危组10例(其中4例为Ⅲ期中枢侵犯),中危组2例(Ⅲ期).12例患儿均接受全身化疗,8例患儿行局部或全颅脑╱脊柱放疗,9例患儿行原发灶切除术,4例患儿行开颅手术切除颅内病灶.随访截至2018年1月,12例AMS患儿中4例存活(其中2例无病生存),死亡8例,总生存率为33﹪(4╱12例),无病生存率为17﹪(2╱12例).结论 AMS伴颅内浸润预后差,治疗效果不佳,早期病灶完全切除是治愈的关键,放疗、个体化方案化疗及手术切除颅内病灶均可能有控制疾病、延长生存时间的价值.

目的 分析视网膜母细胞瘤(Ab)患儿化疗前后血清尿素氮( BRN)和血清肌酐(Scr)变化的临床意义,为提高治疗的安全性提供依据.方法 回顾性分析280例接受CEV方案(卡铂+依托泊苷+长春新碱)化疗的Ab患儿.280例Ab患儿中,男153例,女127例;平均年龄21. 5个月(1~84个月);平均疗程4. 5次(2~12次).临床诊断149例,病理诊断131例;眼外期8例,青光眼期3例,眼内期269例(单眼101例,双眼168).测定患儿初次化疗前及末次化疗后BRN和Scr水平,分析化疗前后BRN和Scr水平的变化.结果 分析初次化疗前和末次化疗后 BRN和Scr值,仅4 ~ ＜12 个月(73 例)年龄段患儿化疗前后 BRN( BRN均值3. 05 mmol╱F 比3. 46 mmol╱F)差异有统计学意义(t﹦ -2. 829,P﹦0. 006),化疗后BRN水平高于化疗前,但未超出参考区间高限(1. 70~7. 10 mmol╱F).280 例Ab患儿中,149 例(53. 2﹪)初次化疗前Scr处于参考区间(男30~104 μmol╱F,女30~84 μmol╱F)以下,20例(7. 0﹪)患儿初次化疗前BRN处于区间以下.2例患儿初次化疗前BRN略高于正常值(分别为7. 25 mmol╱F、7. 34 mmol╱F),末次化疗后恢复正常(分别为5. 01 mmol╱F、4. 98 mmol╱F);1例患儿初次化疗前BRN正常(5. 62 mmol╱F),末次化疗后高于正常区间高限(7. 33 mmol╱F);1例患儿化疗前后BRN均正常,但化疗后BRN指标为化疗前的4. 69倍.结论 Ab患儿治疗前肾功能与同年龄健康儿童一致,其中7. 0﹪患儿BRN位于区间下,53. 2﹪患儿Scr位于区间下,提示BRN和Scr区间需要调整.婴儿Ab化疗后BRN有明显升高,但未达目前轻度肾毒性诊断标准,需警惕存在早期肾损害.

目的 总结2岁以下婴幼儿横纹肌肉瘤( AMS)的临床特征、治疗效果及预后相关因素,以进一步提高对此年龄段患儿的认识.方法 回顾性分析2012年1月至2017年4月在北京儿童医院血液肿瘤中心诊治,且年龄在2岁以下AMS患儿的临床资料及治疗效果,根据国际儿童实体瘤的疗效标准分为完全缓解组和进展╱复发组,分析影响患儿预后的危险因素.结果 本研究共收集20例2岁以内婴幼儿AMS,占同期AMS的12. 4﹪;20例患儿的中位随访时间为(16. 1 ± 1. 8)个月,5例患儿在治疗9~12个月及停药2~3个月时出现进展╱复发;本组患儿2年无事件生存(EPS)率及总生存( OS)率分别为48﹪及61﹪;其中,胚胎型患儿的2年EPS率显著高于腺泡型,差异有统计学意义( χ2 ﹦0. 854,P﹦0. 034);在进展╱复发组与完全缓解组患儿中,男性、胚胎型、非肿瘤不良部位及中危均可降低AMS进展╱复发的风险,而肿瘤直径＞5 cm及临床分期Ⅳ期可增加AMS进展╱复发的风险,但差异无统计学意义( P＞0. 05).结论 2岁以内AMS患儿具有早期恶性程度高,易转移,并且由于受到化疗强度及局部治疗的限制,总体预后差,其2年EPS率及OS率均低于儿童AMS的总体指标,需要灵活采取多种治疗手段,包括延迟放疗、粒子植入等,以进一步提高疗效,改善预后.

达玛烷合成酶(dammarenediol synthase,DS)是三萜类皂苷化合物进入达玛烷型皂苷合成途径的首个关键酶,对人参属植物三萜皂苷的生物合成具有重要的调控作用.本实验以6年生栽培种竹节参为实验材料,基于竹节参转录组数据,利用RT-PCR方法克隆得到DS基因的全长cDNA序列,命名为pjDS.该基因序列长度为2 556 bp,其中包含一段完整开放阅读框,长达2 310 bp,一共编码了769个氨基酸.经生物信息学分析后得出,该基因编码的蛋白质分子量为88.40 kD,理论等电点为5.84,为亲水性蛋白质,并含有跨膜区,具有56处磷酸化位点.其二级结构主要由α-螺旋(44.21％)和无规则线圈(34.72％)构成,并具有QW (QXXXXXW)和DCTAE这2种氧化鲨烯环化酶(OCS)家族的特征性保守基序.pjDS蛋白序列与人参(ACZ71036.1)、西洋参(AGK62449.1)、三七(AIK21788.1)、锡金三七(ANB82450.1)和越南人参(AGS16975.1)氨基酸序列的相似性分别为99％、99％、99％、99％和98％.实时荧光定量PCR的结果表明,pjDS基因在竹节参的根状茎、茎、叶和花等各器官组织均有所表达,进一步发现该基因在花中表达量最高,而在根状茎中的表达量最低.本研究为进一步研究竹节参中三萜皂苷生物合成机制提供理论依据.

Dear Editor,Mitochondria are essential organelles in cellular metabolism,homeostasis,and apoptosis.1,2 Most mitochondrial proteins are synthesized as precursors in the cytosol and then imported into mitochondria by specific protein translocase complexes,including the translocase of the outer membrane complex (TOM complex),the carrier translocase of the inner membrane complex (TIM22 complex),the presequence translocase of the inner membrane complex (TIM23 complex),the sorting and assembly machinery(SAM complex),and the mitochondrial import complex (MIM complex).3 The TIM22 complex is responsible for the translocation and insertion of hydrophobic membrane proteins,including mitochondrial carrier proteins and translocase subunits (Tim17,Tim22 and Tim23).3 In humans,TIM22 is a 440-kDa complex comprising at least six components:the hypothetical channel?forming protein Tim22t three small Tim proteins (Tim9,TimlOa and Tim10b),Tim29 and acyiglycerol kinase (AGK).1 Considering the functional importance of mitochondrial protein import,the TIM22 complex has been linked to many diseases.For example,mutations in the TIM22 gene have been reported to cause early-onset mitochondrial myopathy.4 AGK participates in lipid bio-synthesis,and mutations in the AGK gene lead to Sengers syndrome.2 Mutations in the TIMM8A gene (also called DDP1)cause deafness dystonia syndrome.2

Metabolic reprogramming is associated with NLRP3 inflammasome activation in activated macrophages,contributing to inflammatory responses.Tanshinone ⅡA(Tan-ⅡA)is a major constituent from Salvia miltiorrhiza Bunge,which exhibits anti-inflammatory activity.In this study,we investigated the effects of Tan-ⅡA on inflammation in macrophages in focus on its regulation of metabolism and redox state.In lipopolysaccharides(LPS)-stimulated mouse bone marrow-derived macrophages(BMDMs),Tan-ⅡA(10 μM)significantly decreased succinate-boosted IL-1β and IL-6 production,accompanied by upregulation of IL-1RA and IL-10 release via inhibiting succinate dehydrogenase(SDH).Tan-ⅡA concentration dependently inhibited SDH activity with an estimated IC50 of 4.47 μM in LPS-activated BMDMs.Tan-ⅡA decreased succinate accumulation,suppressed mitochondrial reactive oxygen species production,thus preventing hypoxia-inducible factor-1 α(HIF-1α)induction.Consequently,Tan-ⅡA reduced glycolysis and protected the activity of Sirtuin2(Sirt2),an NAD+-dependent protein deacetylase,by raising the ratio of NAD+/NADH in activated macrophages.The acetylation of α-tubulin was required for the assembly of NLRP3 inflammasome;Tan-ⅡA increased the binding of Sirt2 to α-tubulin,and thus reduced the acetylation of α-tubulin,thus impairing this process.Sirt2 knockdown or application of Sirt2 inhibitor AGK-2(10 μM)neutralized the effects of Tan-ⅡA,suggesting that Tan-ⅡA inactivated NLRP3 inflammasome in a manner dependent on Sirt2 regulation.The anti-inflammatory effects of Tan-ⅡA were observed in mice subjected to LPS challenge:pre-administration of Tan-ⅡA(20 mg/kg,ip)significantly attenuated LPS-induced acute inflammatory responses,characterized by elevated IL-1β but reduced IL-10 levels in serum.The peritoneal macrophages isolated from the mice displayed similar metabolic regulation.In conclusion,Tan-ⅡA reduces HIF-1α induction via SDH inactivation,and preserves Sirt2 activity via downregulation of glycolysis,contributing to suppression of NLRP3 inflammasome activation.This study provides a new insight into the anti-inflammatory action of Tan-ⅡA from the respect of metabolic and redox regulation.