目的:探讨经二代测序确诊的5例吡哆醇依赖性癫痫（PDE）的临床表型、治疗及乙醛脱氢酶7家族成员A1（ALDH7A1）基因突变的遗传学特点。方法:回顾性分析2018年2月至2019年11月郑州大学附属儿童医院神经内科确诊的5例以早期癫痫起病的吡哆醇依赖性癫痫患儿的临床资料，采用二代测序方法对先证者进行ALDH7A1基因测序，并对其家系成员进行一代Sanger验证，对其基因突变特点进行分析。结果:在5例确诊为吡哆醇依赖性癫痫的患儿中，男女比例为4∶1，就诊年龄为出生2~10个月。临床表型中5例患儿均为新生儿期起病，有反复癫痫发作，表现为肌阵挛发作、痉挛发作或局灶性发作；应用抗癫痫药物控制发作较差，长期大剂量口服吡哆醇疗效较好；5例患儿均来自其父亲和（或）母亲的复合杂合突变；例1为剪切纯合突变c.247-2（IVS2）A>T，例2为错义突变c.584A>G（p.N195S）及无义突变c.1003C>T（p.R335 *），例3为错义突变c.1553G>C（p.R518T）及c.1547A>G（p.Y516C），例4为错义突变c.1547A>G（p.Y516C）及移码突变c.1566_1568delTAC（p.522_523delCTinsC），例5为错义突变c.1061A>G（p.Y354C）及无义突变c.841C>T（p.Q281X， 259）。其中c.247-2（IVS2）A>T为未报道过的新生剪切位点突变。 结论:吡哆醇依赖性癫痫由ALDH7A1基因突变引起，早期临床表现多以新生儿期难治性癫痫起病；抗癫痫药物治疗疗效差，经吡哆醇有效控制，对该类患者应尽早行基因分析以早期确诊。

目的:分析吡哆醇依赖性癫痫（PDE）患儿的临床表型及基因型特征，明确其致病原因，为临床诊断提供依据。方法:收集湖南省儿童医院2016年7月至2020年12月诊治的3例PDE患儿的临床资料，对患儿进行全外显子测序，应用生物信息学方法结合临床症状分析、筛选致病性变异，并对核心家系成员采用Sanger测序分析突变来源。结果:3例患儿中，例1、2为姐弟，均在出生后24 h内出现抽搐，基因检测发现两姐弟 ALDH7A1基因存在c.796C>T（p.R266 *）和c.1553G>C（p.R518T）复合杂合突变，分别来自其父亲与母亲，均为已报道的致病突变；例3为女性，1岁时出现抽搐，基因检测发现其 ALDH7A1基因存在c.1094-109T>A和c.7C>T（p.R3C）复合杂合突变，分别来自其父亲与母亲。经检索HGMDPro、PubMed、千人基因组及dbSNP数据库，c.1094-109T>A和c.7C>T（p.R3C）2个突变均为未报道过的新发突变。经不同生物学信息分析软件进行突变位点致病性预测，结果均提示2个突变有害。3例患儿均在大剂量维生素B6治疗后无癫痫发作。 结论:出现不明原因的抽搐，尤其是新生儿阶段发生的抽搐，需警惕 ALDH7A1基因突变造成的PDE，吡哆醇精准治疗效果好。c.1094-109T>A和c.7C>T（p.R3C）这2个新发突变的发现丰富了 ALDH7A1基因致PDE的突变谱。全外显子基因检测对癫痫的诊断有辅助意义。

目的:探究病因不明的早发癫痫性脑病(EOEE)的遗传学病因及其在早期诊断中的价值。方法:前瞻性收集2018年1月至2021年1月就诊于福建省立医院门诊及住院部的60例病因不明的EOEE患儿的资料，采集外周血进行全外显子组测序及拷贝数变异(CNV)检测，分析患儿临床特点、遗传学测序结果。结果:检测出EOEE相关的致病或可疑致病突变24例，包括婴儿痉挛症(10例)、Dravet综合征(3例)、吡哆醇依赖性癫痫及大田原综合征(各1例)、非已知癫痫性脑病(9例)。患儿起病年龄1 d~11个月(中位年龄4.2个月)，就诊年龄2 d~4岁(中位年龄10个月)，确诊年龄均控制在就诊1个月以内。发现单基因变异20例(33.3%)，CNV 4例(6.7%)；涉及13种基因： KCNQ2、SCN1A、SCN8A、CACNA1E、CDKL5、PPP3CA、PCDH19、TSC1、TSC2、ZEB2、ALDH7A1、DCX、HNRNPU；4例CNV异常分别为17p13.3缺失、11q23.3q25缺失、1q36.31-p36.33缺失、1q43-1q44缺失合并Xp22.33重复；共20种变异为国内外首次报道的新发位点；11q23.3q25缺失导致婴儿痉挛症为国内外首次报道； ZEB2变异导致婴儿痉挛症、 PPP3CA基因导致癫痫性脑病均系国内首例报道。 结论:基因与CNV是EOEE患儿的重要潜在病因，病因不明时联合采用全外显子组测序和CNV测序技术检测，可提高EOEE患儿的遗传学病因诊断水平；对此类患儿早期进行遗传学检测，可以早期确诊及进行癫痫精准治疗。

目的:探讨合并围生期缺氧的新生儿脑病遗传因素。方法:收集2016年1月至2019年1月参与复旦大学附属儿科医院“新生儿基因组计划”的133例新生儿。纳入标准为诊断为新生儿脑病、合并围生期急性缺氧事件或Apgar评分≤7分的患儿。回顾性分析患儿临床表现、脑电图及头颅影像学表现、基因测序结果和转归等。结果:133例患儿中男77例（57.9%），女56例（42.1%）；剖宫产出生56例（42.1%），自然出生77例（57.9%）；其中诊断为新生儿缺氧缺血性脑病的患儿68例（51.1%），颅内出血25例（18.8%），遗传学病因的20例（15.0%），败血症（未合并颅内感染）5例（3.8%）。20例二代测序结果阳性的遗传学病因患儿中，19例明确致病性，1例为意义不明；分别为 4例先天性肌病相关变异基因（MTM1基因变异2例、ACTA1基因变异和RYR1基因变异各1例），4例综合征相关变异基因（CHD7基因变异2例、PTN11和NSDHL基因变异各1例），3例代谢性疾病相关变异基因（OTC、MTHFR、ALDH7A1基因变异各1例），2例癫痫性脑病相关变异基因（KCNT1和PACS2基因变异各1例），1例为呼吸中枢相关变异基因（PHOX2B基因变异）以及6例拷贝数致病变异。20例遗传学病因患儿中，8例（40.0%）肌张力减低，7例（35.0%）惊厥，5例（25.0%）合并畸形；20例患儿或家庭均进行遗传咨询，4例患儿死亡，10例患儿放弃治疗出院，6例患儿经过对症支持治疗后症状缓解，出院后进一步制定专科随访计划。结论:在合并围生期缺氧的新生儿中，遗传学病因并不少见。先天性肌病、综合征类、代谢性疾病和癫痫性脑病相关变异基因为常见遗传学病因。

目的:探究慢性神经病理性疼痛小鼠是否出现空间记忆障碍并研究其海马转录组学变化。方法:24只雄性C57BL/6小鼠按随机数字表法分为两组：假手术组（Sham组）、坐骨神经慢性缩窄性损伤（chronic constrictive injury of sciatic nerve, CCI）组（CCI组），每组12只。分别于术前、术后7 d、术后28 d采用Von Frey纤维丝实验检测小鼠机械刺激缩足阈值（paw withdrawal mechanical threshold, PWMT）；在术后7、28 d通过旷场实验检测小鼠运动能力和焦虑状况，通过空间位置识别实验检测小鼠空间记忆；于术后28 d取新鲜海马组织进行转录组学测序检测两组小鼠基因表达差异并分析测序结果，采用实时荧光定量聚合酶链反应（real time fluorescent quantitative polymerase chain reaction, RT-qPCR）验证纤调蛋白（fibromodulin, FMOD）、骨形态发生蛋白7（bone morphogenetic protein 7, Bmp7）、前列腺素D2合成酶（prostaglandin D2 synthase, PTGDS）、醛脱氢酶1家族成员A2（aldehyde dehydrogenase 1 family member A2, Aldh1a2）四组基因表达情况。结果:与Sham组比较，CCI组小鼠造模侧后足PWMT在术后7 d（ t=6.01， P<0.001）、术后28 d（ t=4.49， P<0.001）明显降低。术后7、28 d两组小鼠运动能力和焦虑状况差异无统计学意义（运动距离：术后7 d t=0.25， P=0.962，术后28 d t=0.32， P=0.939。旷场中心区域活动时间：术后7 d t=1.16， P=0.439，术后28 d t=0.34， P=0.931）。术后7 d两组小鼠空间记忆差异无统计学意义（ t=2.00， P=0.101），而在术后28 d CCI组小鼠空间记忆较Sham组明显降低（ t=2.93， P=0.011）。转录组学测序发现两组小鼠海马存在大量差异表达基因（differentially expressed genes，DEGs）。RT-qPCR检测发现：与Sham组小鼠海马组织比较，CCI组小鼠海马组织中FMOD（ t=8.07， P<0.001）、Bmp7（ t=4.81， P=0.003）、PTGDS（ t=4.07， P=0.007）、Aldh1a2（ t=7.93， P<0.001）基因表达均降低。 结论:慢性神经病理性疼痛小鼠可出现空间记忆障碍，且小鼠海马组织转录组学发生显著变化。

为探究根肿菌胁迫对菘蓝生物碱及其合成关键酶基因表达的影响,该研究对根肿菌侵染后0、7、14、21 d的菘蓝进行病情形态分级、组织学观察、生理生化指标测定以及转录组学和代谢组学分析.结果表明:(1)接菌后0、7、14、21 d菘蓝根部分别发展为0级、1级、3级、5级的肿根,并且7 d是皮层入侵的关键时间点.(2)接种根肿菌14 d后,菘蓝叶内可溶性蛋白、丙二醛的含量,超氧化物歧化酶、过氧化物酶、多酚氧化酶、过氧化氢酶的活性与同时间对照组比较显著提高,并随着接菌时间的延长呈增加的趋势.(3)代谢组学一共检测到161种生物碱,其中吲哚类生物碱数量较多;与未接菌相比,菘蓝接菌后7、14、21 d分别存在16种、17种、39种差异代谢物且各组差异代谢物多富集在生物碱和氨基酸代谢通路.(4)转录组测序结果显示,与未接菌相比,菘蓝接菌后7、14、21 d分别存在2 439个、256个、6 437个差异表达基因,这3组共同富集到11个生物碱相关的代谢通路;与未接菌相比,接菌后7、14、21 d有9个基因(编码4种酶THS、TAT、YUCCA、ALDH)表达量均上升.该研究结果揭示了芸薹根肿菌与菘蓝之间的互作机制,探究了芸薹根肿菌对吲哚生物碱合成及其关键酶基因的影响,为后期菘蓝根肿病抗性基因及生物碱次生代谢途径的研究奠定了基础.

目的 探讨乙醛脱氢酶1A 3(ALDH1A3)和巢蛋白(Nestin)的表达与原发性星形胶质细胞瘤患者预后的关系及对可能机制的初步探讨.方法 标本均来自于2006年1月至2012年1月在首都医科大学附属北京天坛医院神经外科行手术治疗的原发星形胶质细胞瘤患者,共130例.采用全基因组mRNA测序获得肿瘤干细胞标志物CD133、ALDH1A3、Nestin mRNA的表达,采用异柠檬酸脱氢酶1(IDH1)焦磷酸测序获得IDH1突变类型.按照基因表达值从高到低,前65例为此基因高表达组,后65例为低表达组,其中ALDH1A3和Nestin均高表达者为A组(32例),ALDH1A3高表达+ Nestin低表达或ALDH1A3低表达+Nestin高表达者为B组(66例),ALDH1A3和Nestin均低表达者为C组(32例).分析3种肿瘤干细胞标志物的表达与预后的关系及各组IDH1突变类型对预后的影响.结果 (1) ALDH1A3高、低表达组患者的中位生存时间分别为432 d、1 131 d,Nestin高、低表达组患者的中位生存时间分别为423 d、1 074 d,差异均有统计学意义(均P＜0.001);CD133高、低表达组患者的中位生存时间分别为720 d、965 d,差异无统计学意义(P =0.273).(2)A、B组的中位生存时间分别为333 d、720 d;C组的生存时间最长,至末次随访有＞50％的患者生存.3组比较差异有统计学意义(P＜0.001).(3)A、B、C组IDH1野生型分别占100.0％ (32/32)、75.8％(50/66)、21.9％(7/32) (P＜0.001).B组IDH1野生型和突变型者的中位生存期分别为514 d、1 374 d(P=0.028),C组IDH1野生型者的中位生存期为660 d,突变型者至末次随访有＞50％的患者存活(P＜0.001).结论 在原发性星形胶质细胞瘤患者中,肿瘤干细胞标志物ALDH1 A3、Nestin的表达可能与预后有关;IDH1的突变类型可能参与对患者预后的影响.

目的 总结早期癫(癎)性脑病患儿临床表型和基因突变特征,探讨二代基因测序在病因诊断中的应用.方法 收集68例早期癫(癎)性脑病患儿临床资料,采集患儿及其父母外周静脉血,采用二代基因测序筛选可疑致病性突变,并经Sanger测序验证基因突变来源.结果 68例早期癫(癎)性脑病患儿中18例(26.47％)检测出癫(癎)相关致病基因,明确诊断为吡哆醇依赖性癫(癎)1例,系ALDH7A1基因突变所致;硫胺素代谢紊乱综合征2型1例,系SLC19A3基因突变所致.13例病因明确的癫(癎)综合征中Dravet综合征6例,5例系SCN1A基因错义突变所致,1例系SCN1A基因无义突变所致;婴儿痉挛症4例,1例系TSC1基因无义突变所致,但无法确定该基因的致病性,3例未见可疑致病性突变;早期婴儿型癫(癎)性脑病(亦称为大田原综合征)2例,1例系STXBP1基因错义突变所致,1例未见可疑致病性突变;婴儿严重局灶性游走性癫(癎)1例,未见可疑致病性突变.53例非特异性癫(癎)性脑病中9例发现可疑致病性突变,1例为SCN8A基因错义突变、1例KCNQ2基因错义突变、1例KCNH5基因错义突变、1例CA CNA1A基因错义突变、2例CDKL5基因无义突变、1例CDKL5基因框移突变、1例PCDH19基因无义突变、1例GRIN2A基因错义突变.均予2种及以上抗癫(癎)药物治疗,1例明确诊断为吡哆醇依赖性癫(癎)后,予维生素B620 mg/(kg·d);1例明确诊断为硫胺素代谢紊乱综合征2型后,予维生素B125 mg/(kg·d)和生物素2 mg/(kg·d).平均随访6个月至8年,15例(22.06％)癫(癎)发作控制良好,21例(30,88％)癫(癎)发作部分控制,32例(47.06％)癫(癎)发作未控制.结论 早期癫(癎)性脑病临床表型多样,经基因检测明确诊断吡哆醇依赖性癫(癎)和硫胺素代谢紊乱综合征2型各1例,对于可治疗的遗传性疾病针对病因治疗,癫(癎)发作控制良好.3例SCN1A基因错义突变、1例STXBP1基因错义突变、1例KCNH5基因错义突变、1例CACNA1A基因错义突变、1例CDKL5基因框移突变、1例PCDH19基因无义突变为新发突变,丰富了早期癫(癎)性脑病的临床表型和基因谱.

目的 探讨EphA7在口腔鳞癌组织中的表达情况并分析其与放化疗后复发及肿瘤干细胞之间的关系.方法 采用免疫组化检测EphA7在54例口腔鳞癌组织(原发性口腔鳞癌40例、根治性手术+放疗后复发7例和根治性手术+化疗后复发7例)和14例癌旁组织中的表达情况.利用siRNA体外沉默口腔鳞癌细胞CAL27中EphA7基因,检测其成球能力的变化,Western blotting检测相关干细胞指标的表达情况.结果 EphA7在口腔鳞癌组织与癌旁组织中的高表达率分别为59.2％(32/54)和14.3％(2/14),差异有统计学意义(P<0.05).EphA7在放疗和化疗后复发的口腔鳞癌组织中的高表达率均为85.7％(6/7),高于原发性口腔鳞癌组织的50.0％(20/40),差异有统计学意义(P<0.05).沉默EphA7表达能够使CAL27细胞的成球率由57.0％.下降至21. ,差异有统计学意义(P<0.05).沉默EphA7表达能下调干细胞相关分子标志(ALDH1、 BMI1和OCT4)的表达水平.结论 EphA7在口腔鳞癌干性维持中可能具有重要作用,有望成为口腔鳞癌靶向治疗的一个潜在靶标.

目的 探讨肺非终末呼吸单元(non?TRU)型腺癌的临床病理特征.方法 收集南京医科大学附属苏州医院/苏州肿瘤诊疗中心病理科和解放军南京总医院病理科2005年1月至2016年12月72例手术切除的肺non?TRU型腺癌的病例资料,光镜下观察组织学和细胞学特征及其前驱病变,免疫组织化学检测谱系特异性标志物和肿瘤干细胞标志物的表达.应用扩增阻滞突变系统(ARMS)或直接基因测序法检测表皮生长因子受体(EGFR)、KRAS、BRAF、EML4?ALK和ROS1基因.结果 non?TRU型腺癌常见于男性(65.3％,47/72)、有吸烟史(68.1％,49/72)、年龄较大(平均61岁)、中央型腺癌(75.0％,54/72)、有肿瘤性坏死(61.1％,44/72)和高级别(73.6％,53/72)腺癌.光镜下,non?TRU型腺癌具有复杂多变的组织学结构,通常表现为大而不规则的、裂隙状腺样或囊泡状结构,腔内充满黏液、坏死的肿瘤细胞碎屑及中性粒细胞,或表现为伴有显著黏液产生的浸润性腺癌.肿瘤细胞具有支气管表面上皮细胞、黏液柱状细胞、多角形细胞或杯状细胞特征.25.0％(18/72)、31.9％(23/72)和38.9％(28/72)的病例伴有纤毛柱状细胞化生(CCCM)、黏液柱状细胞变(MCCC)和细支气管上皮异型增生(BCCD).免疫组织化学表达细胞角蛋白(CK)7(100％,72/72)、甲状腺转录因子1(TTF1;12.5％,9/72)、Napsin A(5.6％,4/72)、MUC5AC(81.9％,59/72)、MUC5B(87.5％,63/72)、p53(66.7％,48/72)、CK5/6(12.5％,9/72)、p63(18.1％,13/72)、CK20(19.4％,14/72)和CDX2(16.7％,12/72),肿瘤干细胞标志物表达CD44(43.1％,31/72)、CD133(31.9％,23/72)、β?catenin(58.3％,42/72)、ALDH1(36.1％,26/72)、GATA6(12.5％、9/72)、SOX2(20.8％,15/72)和OCT4(29.2％,21/72).驱动基因中19例(26.4％,19/72)KRAS突变,2例(2.8％,2/72)EGFR基因突变,1例(1.4％,1/72)EML4?ALK融合基因,未检测到BRAF和ROS1改变.结论non?TRU型腺癌具有显著的临床病理特征、组织形态学表现、免疫学表型和驱动基因改变,是肺腺癌独立的少见类型.