目的:评价天麻素对神经病理性痛大鼠脊髓腺苷酸激活蛋白激酶(AMPK)/瞬时受体电位通道A1(TRPA1)信号通路的影响。方法:SPF级健康雄性SD大鼠36只，6～8周龄，体质量200～230 g，采用随机数字表法分为3组( n＝12)：假手术＋生理盐水组(SHAM组)、神经病理性痛＋生理盐水组(NP组)和神经病理性痛＋天麻素组(GAS组)。2%异氟烷麻醉下，采用坐骨神经慢性结扎损伤法制备大鼠神经病理性痛模型，SHAM组未结扎。造模后连续14 d，GAS组腹腔注射天麻素100 mg/kg，SHAM组和NP组注射等量生理盐水。分别于造模前1 d(T 0)、造模后第1、3、5、7、10和14天(T 1-6)时测定机械缩足反应阈(MWT)和热缩足潜伏期(TWL)。在T 4和T 6时测完痛阈后，2%异氟烷麻醉处死大鼠取L 4-6脊髓组织，采用qRT-PCR法检测TRPA1 mRNA表达，Western blot法检测脊髓TRPA1、AMPK和p-AMPK表达，免疫荧光染色法检测脊髓TRPA1表达；免疫组织化学染色法观察TNF-α、IL-1β和c-fos的表达。 结果:与SHAM组相比，NP组T 1-6时MWT和TWL降低，脊髓TRPA1 mRNA、TRPA1、TNF-α、IL-1β和c-fos表达上调，p-AMPK表达下调( P<0.05)，AMPK表达差异无统计学意义( P>0.05)；与NP组相比，GAS组T 3-6时MWT和T 2-6时TWL升高，脊髓TRPA1 mRNA、TRPA1、TNF-α、IL-1β和c-fos表达下调，p-AMPK表达上调( P<0.05)，AMPK表达差异无统计学意义( P>0.05)。 结论:天麻素减轻大鼠神经病理性痛的机制可能与调控AMPK/TRPA1信号通路有关。

钙稳态失衡和自噬异常是PD、AD及肌萎缩侧索硬化症(ALS)等神经退行性疾病的重要发病机制，二者之间存在相关性。研究显示，细胞不同储钙区室可经钙通道或钙离子(Ca 2+)相关信号蛋白影响自噬，例如细胞膜钙释放激活钙通道调节分子1(Orai1)和瞬时受体电位通道(TRPC)、内质网钙通道肌醇1，4，5-三磷酸受体(IP3R)途径、线粒体Ca 2+摄取相关的钙单向转运体(MCU)、溶酶体钙通道瞬时受体电位通道粘蛋白1(TRPML1)和两孔通道、胞浆钙调素依赖蛋白激酶的激酶β(CaMKKβ)/腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)途径等。本文现围绕神经退行性疾病中细胞内不同储钙区室和胞浆Ca 2+调控自噬的研究进展进行综述，以期加深临床同道对其的认识。

AMP活化蛋白激酶（AMPK）是一种广泛存在于真核细胞生物中且进化上保守的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶。在调控细胞能量代谢方面，AMPK作为能量代谢激酶具有极其重要的作用。当机体处于低能量状态时，AMPK对细胞内腺嘌呤核苷酸水平的变化作出反应，与一磷酸腺苷（AMP）或二磷酸腺苷（ADP）结合后被激活。激活的AMPK可调控各种代谢过程，包括脂质、葡萄糖代谢和细胞自噬。AMPK可通过磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物1（mTORC1）、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶-失调51样激酶1（ULK1）和Ⅲ型磷脂酰肌醇3-激酶-空泡分选蛋白34（PIK3C3-VPS34）复合物中的自噬相关蛋白直接促进细胞自噬；也可通过调节叉头框蛋白O3（FOXO3）、溶酶体功能的转录因子EB（TFEB）和溴结构域蛋白4（BRD4）等转录因子下游自噬相关基因的表达间接促进细胞自噬；还可调节线粒体自噬，诱导受损的线粒体分裂，促进自噬反应向受损线粒体转移。AMPK另一个功能是调控线粒体健康，可通过刺激线粒体生物发生参与并调控线粒体内稳态的各个方面。本综述讨论了AMPK信号通道作为细胞响应能量应激和调控线粒体的中心，对线粒体生物学和内环境稳态的重要调控作用，重点介绍了AMPK在调节细胞自噬和线粒体自噬过程中的关键作用，以及调控线粒体稳态的研究进展。

目的 研究人类精子囊性纤维化跨膜传导调节因子(CFTR)通过AMPK信号通道影响精子活力的机制.方法 使用CFTRinh-172 和毛喉素分别处理正常活力的精子和弱精症精子,检测精子活力、顶体酶活性、精子凋亡水平、细胞内ATP、ROS、线粒体膜电位(MMP),以及CFTR、AMPK、Bax和Bcl-2 的表达水平.结果 与各自对照组相比,CFTRinh-172 处理组的精子活力、顶体酶活性、ATP、MMP,以及CFTR、Bcl-2 的表达均降低,精子凋亡率、AMPK、Bax的表达升高;FSK处理组的精子活力、精子凋亡率、MMP、AMPK、Bax的表达均降低,顶体酶活性、ATP、CFTR、Bcl-2 的表达升高.结论 CFTR通过AMPK信号通路影响精子线粒体结构和功能,调控精子凋亡和活力.

目的:探讨高糖条件下通过氧化应激-AMP活化蛋白激酶(AMPK)-缝隙连接蛋白43(Cx43)-核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)通路对胃平滑肌细胞外基质重构的调节作用.方法:将体外培养的大鼠原代平滑肌细胞分为正常糖组、高糖组、高糖+NLRP3抑制剂MCC950(15 nmol/L)组、高糖+Cx43半通道阻滞剂GAP19(100 μmol/L)组、高糖+AMPK抑制剂Compound C(CC;10 μmol/L)组和高糖+抗氧化剂α-硫辛酸(α-LA;100 μmol/L)组,均培养48 h后检测.Western blot检测细胞中caspase-1、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、NLRP3、Cx43、转化生长因子β1(TGF-β1)、TGF-β3、金属蛋白酶组织抑制物1(TIMP-1)、嘌呤能P2X7受体(P2X7R)和磷酸化AMPK(p-AMPK)蛋白水平;ELISA检测细胞培养液中腺苷三磷酸、白细胞介素1β、Ⅰ型胶原(Col Ⅰ)和Col Ⅲ含量.结果:与高糖组相比,高糖+MCC950组MMP-2和TGF-β3表达水平显著降低(P<0.01),TGF-β1和TIMP-1表达水平显著升高(P<0.01);高糖+GAP19组NLRP3和caspase-1表达水平显著降低(P<0.01),而P2X7R表达无显著差异;高糖+CC组NLRP3、caspase-1、P2X7R、总Cx43和胞膜Cx43蛋白水平,以及胞膜Cx43/胞浆Cx43比值均显著降低(P<0.01);高糖+α-LA组p-AMPK、caspase-1、NLRP3、P2X7R、总Cx43和胞膜Cx43蛋白水平,以及胞膜Cx43/胞浆Cx43比值均显著下降(P<0.05).结论:高糖通过氧化应激-AMPK-Cx43-NLRP3通路调节Col I和Col Ⅲ含量,进而参与了胃平滑肌细胞外基质的重构.

目的 通过气道类器官培养研究哮喘中肝激酶B1(Lkb1)调控上皮再生的机制.方法 取Lkb1f/f(对照组,10只)和Scgb1a1CreER;Lkb1f/f小鼠(Lkb1敲除组,9只),采用雾化吸入鸡卵清蛋白(OVA)的方法建立过敏性哮喘模型,收集支气管肺泡灌洗液(BALF)和肺组织,统计BALF中炎性细胞数量,肺组织切片免疫荧光染色比较钙激活氯离子通道蛋白3(CLCA3)阳性细胞数量.通过流式细胞术分选出Club细胞进行类器官培养,统计类器官的平均直径和类器官形成率,回收细胞通过实时荧光定量PCR(RT-PCR)技术检测高脚杯细胞标志物CLCA3、纤毛细胞标志物叉头框蛋白J1(FOXJ1)和Club细胞中腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)的表达水平.结果 与对照组相比,Lkb1敲除组BALF中巨噬细胞、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞和淋巴细胞数量变化差异无统计学意义;Lkb1敲除后CLCA3阳性细胞数量减少;类器官培养结果显示敲除Lkb1后Club细胞来源的类器官平均直径减小,类器官形成率降低,纤毛细胞分化标志物FOXJ1 mRNA表达水平降低,缺失Lkb1后Club细胞表达AMPKα水平降低,且Club细胞增殖受到抑制,激活Lkb1的下游信号通路AMPK可以减弱Lkb1缺失对Club细胞再生功能的影响.结论 Lkb1通过AMPK通路促进气道祖细胞增殖.

非酒精性脂肪性肝炎(nonalcoholic steatohepatitis,NASH)是代谢相关性脂肪肝病(metabolic associatedfattyliverdisease,MAFLD)肝脏特征性病理表现,是MAFLD从相对良性和可逆阶段向肝损伤甚至肝硬化和肝细胞癌发展的关键转折点.近年来研究表明,脂质沉积和氧化应激贯穿于MAFLD始终,而改善肝脂肪沉积和氧化应激是目前治疗和预防NASH疾病发生和发展的主要干预途径.一般来说,促进自噬水平可减少脂质积累(triglyceride,TG)和氧化应激(oxidative stress,OS)并促进肝细胞存活,而阻断自噬水平可能会加速NASH的进展.但自噬水平的激活与上游信号AMPK/mTOR/ULK1 的活化及EI24 的调控密不可分.其中一种与AMPK、mTOR通道活化密切相关的自噬跨膜蛋白依托泊苷诱导 2.4 蛋白(Etoposide-induced protein 2.4,EI24),可通过促进自噬溶酶体的降解加速自噬流的活化过程.同时,间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)作为理想的自噬诱导体,凭借其激活AMPK/mTOR介导性自噬在治疗各种NASH炎症性疾病方面优异的治疗效果被广泛研究.因此,当采用MSCs以"药物作用"调控EI24/AMPK/mTOR轴促进自噬改善或逆转NASH脂肪堆积、氧化应激等肝损伤,以期为NASH相关发病机制的阐明和开发新的治疗策略提供依据.

为从蛋白水平探索钙缓解氟中毒的作用机制,本试验建立氟中毒和补钙干预动物模型进行骨骼差异蛋白的分离鉴定.通过双向凝胶电泳技术(Two-dimensional electrophoresis,2-DE)和基质辅助质量飞行时间质谱技术(MALDI-TOF MS)鉴定骨骼中的差异蛋白质,并通过gene ontology (GO)注释、pathway富集和互作网络对差异蛋白进行分析.结果 表明,与对照组(C)相比,在氟中毒组(F)和氟中毒补钙组(F+Ca)中有17种差异性的蛋白,包括Ⅰ型胶原蛋白(Col1a1)、肌动蛋白(Actb)、蛋白质谷氨酰胺转移酶2(Tgm2)等.这些差异蛋白富集到黏着斑(Focal adhesion)、PI3K-Akt信号通路、AMPK信号通路等38条骨代谢通路.并且这些蛋白的功能主要与细胞骨架、能量代谢、物质转运、离子通道、细胞凋亡有关.因此推测,钙可能通过调控黏着斑、PI3K-Akt、AMPK等信号通路进而缓解氟对骨骼带来的损伤,具体作用机制还需要进一步验证.

目的 探讨磷酸甘油酸激酶1(PGK1)对乳腺浸润癌患者预后影响及潜在相关机制.方法 下载TCGA数据库中乳腺浸润癌患者的RNA表达谱及临床数据,按PGK1表达水平分为高表达组(n=526)和低表达组(n=525),比较2组生存时间、肿瘤不同分期患者的PGK1表达水平;将患者所测各RNA表达水平逐一与PGK1表达水平进行Pearson相关性检测,选取相关性最高的前50个基因;对筛选出的50个基因进行GO富集分析和KEGG通路富集分析.结果 PGK1高表达组患者的中位生存时间低于PGK1低表达组(P<0.05);临床分期Ⅰ期患者PGK1表达水平低于Ⅱ～Ⅳ期,Ⅳ期患者PGK1表达水平高于Ⅰ～Ⅲ期(P<0.05);T4期患者PGK1表达水平均高于其他3期(P<0.05);M1期患者PGK1表达水平高于M0期(P<0.05).在检测的20154个基因中,有11872个基因与PGK1存在相关性(P<0.05),其中细胞死亡诱导DFFA样效应因子c和水通道蛋白7与PGK1表达水平的相关系数最高(r=0.8220、0.8216,P<0.05).GO富集分析可见,主要涉及的生物学过程包括代谢过程、对刺激的反应、生物调;主要涉及的细胞组分为膜、细胞外空间、囊泡;主要涉及的分子功能为蛋白质结合、离子结合、转运活动.KEGG通路富集分析可见主要涉及的信号通路为PPAR信号通路、调节脂肪细胞中的脂肪分解、AMPK信号通路.结论 PGK1高表达与乳腺浸润癌患者远期生存率降低及肿瘤分级更高相关,这可能与其通过调控物质代谢水平从而为肿瘤细胞提供更多能量,促进肿瘤细胞生长有关.

目的 探索肝脏X受体(LXR)激动剂相关阿尔茨海默病(AD)的分子机制,为AD治疗的研究提供指导.方法 自GEO数据库中下载数据集GSE31624的原始基因芯片数据,按照AD动物模型(Tg2576小鼠)的处理方法(注射和不注射LXR激动剂苯甲磺酰胺),将所有样本的基因芯片数据分为LXR组和AD组两组,每组11只.对原始数据进行标准化,用R语言中的Limma包通过贝叶斯检验分析得到差异表达基因(DEGs).之后利用DAVID数据库对DEGs进行基因本体论(GO)分析,通过KEGG数据库对DEGs进行通路富集分析,并利用STRING数据库构建蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络,通过Cytoscape软件进行可视化处理,利用Cy-toHubba插件分析得到互作强度最高的基因(Hub基因).结果 总共得到665个DEGs,其中上调基因284个,下调基因381个.GO分析结果表明,DEGs主要位于乙酰胆碱门控通道复合物,其功能主要集中于突触传递、脂蛋白运输、细胞内信号转导的正调节和神经肌肉突触传递等过程.KEGG分析结果显示Ras信号通路、5-腺嘌呤核苷酸(AMP)依赖的蛋白激酶(AMPK)信号通路、Janus激酶(Jak)-信号转导与转录激活剂(STAT)信号通路、磷脂酰肌醇-4,5-双磷酸3-激酶(PI3K)-胸腺嘧啶核苷激酶(AKT)信号通路、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路等信号通路在LXR激动剂治疗AD的机制中发挥着重要的作用.通过PPI网络分析共得到Cftr、Lrp2、Rnf144b、Tfrc、Uba52、Slc18a3、Aak1、Dvl2、Dab2、Arpc5、Ube4a、Trim71、Asb1、Ube2v2、Rnf220和Asb17等16个Hub基因.结论 通过分析LXR激动剂治疗AD相关的基因芯片数据,发现了可能发挥重要作用的Cftr、Lrp2、Rnf144b、Tfrc、Uba52、Slc18a3、Aak1、Dvl2、Dab2、Arpc5、Ube4a、Trim 71、Asb1、Ube2v2、Rnf220和Asb17等16个关键基因,以及Ras信号通路、AMPK信号通路和Jak-STAT信号通路等8个关键的信号通路,它们可能是LXR激动剂治疗AD的作用靶点.