目的 应用 6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚氨基氨基甲酸酯(AQC)柱前衍生化技术,建立康复新液中游离氨基酸和总肽的高效液相色谱(HPLC)含量测定方法,并以总肽含量为指标对市售样品进行检测.方法 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(Kromasil 100-5 C18 色谱柱);60%乙腈(A)-0.14 mol·L-1 三水合乙酸钠溶液,用磷酸调节pH值至 5.0(B)为流动相,梯度洗脱;柱温:39℃;流速:1.0 mL·min-1,检测波长:248 nm.结果 14 种氨基酸均能达到良好的分离效果;门冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、组氨酸、甘氨酸、精氨酸、苏氨酸、丙氨酸、脯氨酸、缬氨酸、赖氨酸、异亮氨酸、亮氨酸和苯丙氨酸分别在 2.0～99.7、3.4～168.5、2.8～139.6、4.0～201.4、4.8～238.1、6.7～336.9、3.3～167.5、9.7～487.3、4.1～202.5、4.4～221.6、5.4～270.5、3.3～166.8、4.8～240.8、4.7～236.6 μg·mL-1 范围内呈现良好的线性关系(r=0.999 5～1.000 0);游离氨基酸的平均加样回收率(n=6)为 86.8%～108.1%,RSD为 2.8%～4.4%,总肽酸水解氨基酸的平均加样回收率(n=6)为 83.2%～102.7%,RSD为 0.1%～3.1%;仪器精密度、重复性、稳定性实验的RSD均小于 5.0%.结论 该方法与现行质量标准的紫外分光光度法比较,二者测定的总氨基酸含量结果基本一致,但前者的专属性、重现性更优;以具有生物活性的总肽为质控指标,针对性更强,可为康复新液的质量评价提供更科学、合理的方法.

目的:建立中药龟甲的HPLC指纹图谱,以达到鉴别龟甲与其混伪品的目的.方法:收集不同产地的龟甲及其混伪品21批,按上下甲进行分类,共42个样品.通过盐酸水解、脱磷、脱钙等前处理,以6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚胺基-氨基甲酸酯(AQC)进行衍生化反应,采用C18色谱柱(3.9 mm×150 mm,3μm),柱温37℃,以乙腈,水,缓冲盐为流动相进行梯度洗脱,流速1.00 mL/min,检测波长248 nm.采用"中药指纹图谱相似度评价系统"(《中华人民共和国药典》2012版)对正品龟甲上甲与下甲、正品与常见混伪品进行相似度分析.结果:所建立的指纹图谱具有较好的精密度、重现性和稳定性.正品龟甲的上下甲相似度为0.932～0.995.正品与混伪品的相似度在0.90以下者占90.91％.结论:正品上、下甲的HPLC图谱差异较小,正品与混伪品差异较明显.所建立的HPLC指纹图谱可用于龟甲的质量评价.

目的 建立人凝血因子Ⅷ中氨基酸含量的柱前衍生HPLC检测方法.方法 采用6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚氨基氨基甲酸酯(6-aminoquinoline-N-hydroxysuccinimide carbamate,AQC)在一定条件下与氨基酸形成稳定的衍生产物(柱前衍生),再通过高效液相色谱仪,采用氨基酸分析柱(150 mm×3.9 mm,4μm)检测,以不同流动相进行梯度洗脱[在《中国药典》三部(2015版)的基础上进行调整],柱温为37℃,流速为1.0 mL/min,检测波长为248 nm.同时验证方法的系统适应性、专属性、线性范围、精密性及准确度.结果 甘氨酸及盐酸赖氨酸均可在25 min内获得较好分离,与相应相邻色谱峰之间的分离度均＞1.5,拖尾因子在0.95～1.40之间;各样品的氨基酸种类均能正确检出,混合样品与单纯样品出峰时间保持一致,且供试品溶液与对照品溶液主峰保留时间相对偏差均＜2％;当甘氨酸浓度在12.5～62.5μg/mL,盐酸赖氨酸浓度在4.0～20.0μg/mL时,与相应氨基酸与内标峰面积比呈良好的线性关系,相关系数(r)分别为0.999 9和0.999 8;甘氨酸及盐酸赖氨酸重复性的相对标准偏差(RSD)分别为0.4％和0.5％,中间精密度RSD分别为1.3％和1.o％;两种氨基酸的回收率均在95％～105％范围内,RSD均≤2％.结论 建立的方法具有良好的专属性、精密性及准确度,可用于测定人凝血因子Ⅷ中的氨基酸含量.