目的 建立同时测定大鼠血清中19种氨基酸含量的异硫氰酸苯酯(phenyl isothiocyanate,PITC)柱前衍生化-超高效液相色谱法,并进行验证及初步应用.方法 采用ACQUITY UPLC?BEH C18色谱柱(2.1 mm × 100 mm,1.7 μm),以0.1mol/L醋酸钠缓冲液-乙腈为流动相,梯度洗脱,体积流量0.3mL/min,柱温52 ℃,检测波长254 nm.在优化色谱条件和供试品制备方法的基础上对方法进行专属性、线性、精密性、稳定性和准确性验证,并采用建立的方法对大鼠血清中19种氨基酸的含量进行测定.结果 大鼠血清中19种氨基酸在10 min内分离良好,空白衍生化溶剂和内标化合物对氨基酸分析无干扰;各氨基酸在相应浓度范围内的线性关系良好(r≥0.998 0),检测限为0.004 6～0.186 5 μg/mL,定量限为0.013 9～0.559 6 μg/mL;精密性和稳定性试验的RSD均小于4％;平均加标回收率为90％～110％,RSD均小于5％.大鼠血清中氨基酸含量在4.837～110.233 μg/mL之间.结论 建立的方法灵敏度高,简便易行,适用于大鼠血清中氨基酸的分析.

目的 应用 6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚氨基氨基甲酸酯(AQC)柱前衍生化技术,建立康复新液中游离氨基酸和总肽的高效液相色谱(HPLC)含量测定方法,并以总肽含量为指标对市售样品进行检测.方法 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(Kromasil 100-5 C18 色谱柱);60%乙腈(A)-0.14 mol·L-1 三水合乙酸钠溶液,用磷酸调节pH值至 5.0(B)为流动相,梯度洗脱;柱温:39℃;流速:1.0 mL·min-1,检测波长:248 nm.结果 14 种氨基酸均能达到良好的分离效果;门冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、组氨酸、甘氨酸、精氨酸、苏氨酸、丙氨酸、脯氨酸、缬氨酸、赖氨酸、异亮氨酸、亮氨酸和苯丙氨酸分别在 2.0～99.7、3.4～168.5、2.8～139.6、4.0～201.4、4.8～238.1、6.7～336.9、3.3～167.5、9.7～487.3、4.1～202.5、4.4～221.6、5.4～270.5、3.3～166.8、4.8～240.8、4.7～236.6 μg·mL-1 范围内呈现良好的线性关系(r=0.999 5～1.000 0);游离氨基酸的平均加样回收率(n=6)为 86.8%～108.1%,RSD为 2.8%～4.4%,总肽酸水解氨基酸的平均加样回收率(n=6)为 83.2%～102.7%,RSD为 0.1%～3.1%;仪器精密度、重复性、稳定性实验的RSD均小于 5.0%.结论 该方法与现行质量标准的紫外分光光度法比较,二者测定的总氨基酸含量结果基本一致,但前者的专属性、重现性更优;以具有生物活性的总肽为质控指标,针对性更强,可为康复新液的质量评价提供更科学、合理的方法.

目的 研究多花黄精精制多糖的结构特征并探究其抗疲劳及改善肠道菌作用,为以多花黄精精制多糖为功能性成分的产品开发提供理论依据.方法 采用PMP柱前衍生化-高效液相色谱法、三甲基硅醚衍生化-气相色谱法等方法对多花黄精精制多糖进行化学表征;采用小鼠负重游泳试验结合生化指标评价其抗疲劳作用;采用 16S rRNA肠道菌群测序研究多花黄精精制多糖的改善肠道菌作用.结果 获得的多花黄精精制多糖是一种果聚糖产物,且含有少量葡萄糖(Glc)、半乳糖(Gal)、阿拉伯糖(Ara)、甘露糖(Man)、鼠李糖(Rha)和半乳糖醛酸(GalA),其相对分子质量在 0.4～285 kDa内,主要组分的分子量在 3 kDa左右.与模型组比较,多花黄精精制多糖高剂量组能明显延长小鼠的力竭游泳时间(P＜0.01),降低血清中BUN、UA水平,显著降低肌肉组织中LA(P＜0.01)和MDA水平(P＜0.05);显著提高肝脏组织中SOD(P＜0.01)活性,GSH-Px(P＜0.001)和CAT(P＜0.05)水平.与空白对照组相比,多花黄精精制多糖低剂量组能够上调小鼠粪便微生物中益生菌伊格尔兹氏菌属(g_unclassified_f_Eggerthelaceae)和魏斯氏菌属(g_Weissella)相对丰度(P＜0.05).结论 确定了多花黄精精制多糖的化学组成,并证明了该多糖具有较好的抗疲劳功效,能促进肠道中益生菌生长,为以多花黄精精制多糖作为功能性成分的产品开发提供依据.

目的 从罗汉果Siraitiagrosuenorii根中分离纯化多糖组分,初步分析其结构特征并研究其免疫调节作用.方法 干燥罗汉果根经95％乙醇脱脂,用70 ℃水提醇沉得到粗多糖,再经Cellulose DE-52纤维素阴离子交换柱、Sephadex LH-20凝胶柱分离纯化,得到均一多糖LGP-A.采用高效凝胶渗透色谱法(high performance gel permeation chromatography,HPGPC)与PMP柱前衍生化法测定其相对分子质量和单糖组成;通过傅里叶红外光谱(FT-IR)、核磁共振波谱(NMR)、刚果红实验、扫描电子显微镜(scanning electron microscope,SEM)等方法对LGP-A的初步结构进行分析.利用CCK法、ELISA试剂盒、中性红实验对RAW264.7细胞的增殖、一氧化氮(NO)、白介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumornecrosis factor-α,TNF-α)及吞噬能力进行检测,评价LGP-A的免疫活性.结果LGP-A的相对分子质量为1.83 × 106,主要由半乳糖(Galp,51.23％)和阿拉伯糖(Araf,44.68％)组成.红外光谱及核磁波共振波谱对其结构分析证明,LGP-A可能主要含有 T-α-L-Araf(A)、→3)-α-L-Araf-(1→(B)、→5)-α-L-Araf-(1→(C)、→3,5)-α-L-Araf-(1→(D)、→3)-β-D-Galp-(1→(E)、→3,6)-β-D-Galp-(1→(F)、→6)-β-D-Galp-(1→(G)和→3)-α-D-Galp-(1→(H)片段.质量浓度在 0.625～5.0 μg/mL时,LGP-A能促进RAW264.7细胞的增殖,并能明显促进细胞分泌NO、IL-6和TNF-α,提高细胞吞噬率,表明LGP-A具有显著的免疫调节活性.结论LGP-A是从罗汉果根中得到的天然均一多糖,其初步结构和活性的研究为罗汉果根资源的开发提供了一定的依据.

目的:建立一种同时测定蜈蚣中 8 种氨基酸(甘氨酸、丙氨酸、丝氨酸、谷氨酸、精氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸)含量的方法.方法:使用邻苯二甲醛(OPA)和 3-巯基丙酸(3-MPA)以 3∶1 的比例进行柱前衍生化,将非荧光氨基酸转化为荧光物质,使用HPLC结合荧光检测器进行分离和检测;以含 3.0%20 mmol/L四氢呋喃的醋酸盐缓冲液(pH=7.6)-100 mmol/L醋酸盐缓冲液∶乙腈∶甲醇(1∶2∶2)为流动相进行洗脱分离.结果:各氨基酸在一定的浓度范围内线性关系良好.10 批蜈蚣中 8 种氨基酸含量以谷氨酸和丝氨酸较高.结论:该方法有利于蜈蚣质量控制,可为蜈蚣从鲜品到加工过程中提供一种常规的监测方法.

目的:探究苦碟子注射液中的多糖类成分理化性质、表征结构并分析其体外抗氧化活性能力.方法:采用醇沉法从苦碟子注射液中富集多糖,D101大孔吸附树脂法脱色;采用DEAE-52纤维素离子交换层析柱、SephadexG-100纯化得到苦碟子多糖KDTD11;采用PMP(1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮)柱前衍生化、凝胶渗透色谱、红外光谱、甲基化法对KDTD11进行结构表征,并考察其清除羟基自由基、DPPH自由基及ABTS自由基能力以评价KDTD11体外抗氧化活性.结果:KDTD11中性糖含量为90.5％,酸性糖含量为0.05％,蛋白质含量为0.02％,相对分子质量为1.2×104,KDTD11由Rha、Glc、Gal和Xyl组成,摩尔质量比为1.5∶9.8∶1∶0.8;KDTD11主要包含8种糖残基,其中有3个末端,2个分支点,主要以→2)-Glcp-(1→及→4)-Glcp-(1→为主链.抗氧化试验结果显示当KDTD11质量浓度为1 mg·mL-1时,对羟自由基、DPPH自由基、ABTS自由基的清除率分别为82.3％、82.4％、67.6％,并在0.1～1.0 mg·mL-1范围内呈现一定量效关系.结论:从苦碟子注射液中分离得到具有支链的杂多糖KDTD11且具有一定的抗氧化活性,对进一步明确苦碟子注射液的药效物质基础打下基础.

目的 建立人参多糖成分的高效液相色谱(HPLC)指纹图谱,并用于其多糖成分的质量控制.方法 采用快速溶剂萃取法(ASE)提取人参多糖,经三氟乙酸水解和1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)柱前衍生化后,HPLC测定人参多糖的单糖组成.并采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》建立11批人参多糖中单糖的HPLC指纹图谱并分析其相似度,通过与对照品图谱比对进行共有峰指认.结果 建立了11批人参多糖的指纹图谱,共匹配5个共有峰;人参多糖中单糖组成以葡萄糖为主,其次为半乳糖醛酸、半乳糖、阿拉伯糖和鼠李糖等;含量分别为3.373,1.236,0.558,0.549,0.148 mg/g.通过聚类分析,11批人参多糖共聚为三大类.结论 相似度评价表明,11批人参多糖指纹图谱的相似度较高,均大于0.90,表明人参多糖的质量稳定.方法学考察结果表明,建立的HPLC指纹图谱分析方法重现性好,结果可靠,可用于人参中多糖成分的质量标准评价.

[背景]双乙酰(DC)被广泛应用于食品调味行业,过量职业接触会引起人体严重的呼吸系统疾病,但目前对于工作场所空气中DC尚缺乏相应的国家标准检测方法.[目的]建立 4-硝基邻苯二胺(NPDA)柱前衍生-高效液相色谱法测定工作场所空气中DC的方法.[方法]用溶液吸收法采集工作场所空气中DC,采用 4-硝基邻二苯胺作为衍生化试剂.通过调整吸收液磷酸浓度,优化反应试剂比例、反应温度和时间,建立测定工作场所空气中DC的高效液相色谱方法,得到线性、检出限、定量下限等性能指标.采用相对比较法评价方法采样效率,吸收液保存试验评价样品稳定性,加标回收试验评价方法准确度和精密度,并进行干扰试验.将所建立的方法应用于实际样品检测,考察方法的适应性.[结果]衍生化反应温度越高,反应时间越长,衍生化效率越高,因此选择 60℃衍生化 2 h.反应液经SB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)分离,在 30℃柱温下,用甲醇-水(体积比:65%/35%)混合液为流动相,以 1.0 mL·min-1 的流速洗脱,紫外检测器(λmax=257 nm)检测,保留时间定性,外标法定量.本法DC检测范围为 5～2000 μg·L-1,相关系数为 0.9999,检出限为1.3 μg·L-1,定量下限为 4.3 μg·L-1,最低检出浓度为 4.3 μg·m-3,最低定量浓度为 14.3 μg·m-3(以采样体积V0=3.0 L计).本法样品加标回收率为 99.1%～100.8%,批内精密度为 0.5%～3.0%,批间精密度为 1.2%～2.0%.本法平均采样效率为 94.5%,样品在 4℃下至少可保存 14 d,工作场所空气共存成分不干扰DC的测定.本法检测某香精生产车间空气,DC含量为 5.86～8.85 mg·m-3.[结论]采用 1.0%磷酸吸收液采集、NPDA柱前衍生-高效液相色谱法测定空气中DC,方法简单实用,准确度好,灵敏度高,DC吸收液无损失降解,可应用于工作场所空气中DC的检测.

目的 建立完全水解-柱前衍生化HPLC法测定甘草多糖含量方法,比较甘草蜜炙前后多糖含量的变化.方法 以甘草多糖为研究对象,通过平行实验优选多糖提取、完全酸水解条件、衍生化条件、色谱分析条件,建立完全酸水解-PMP柱前衍生化分析测定甘草多糖中鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖含量的方法,并进一步结合含量校正因子计算多糖含量.结果 3批生甘草饮片炮制前多糖平均含量为(58.6±9.0)mg/g,蜜炙后饮片中平均含量为(79.3±8.5)mg/g,其炮制后多糖的平均含量提升了35.3％.结论 该方法准确可行,是对生、炙甘草质量评价方法的重要补充,同时也可对其他中药多糖的含量表征提供参考.

目的 采用柱前衍生化超高效液相色谱-串联质谱法检测盐酸二甲双胍原料及缓释片中的痕量二甲胺.方法 以2,4-二硝基氟苯为衍生化试剂,采用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱(50 mm×2.1 mm,1.8 μm),以0.1％甲酸水溶液-乙腈为流动相,梯度洗脱,正离子(ESI+)模式下平行反应监测(PRM)方式检测.结果 2.70～270.53 ng·mL-1二甲胺与峰面积线性关系良好(r=0.9990);原料、缓释片的平均回收率分别为115.1％、111.2％,RSD分别为5.30％、4.90％(n=9);二甲胺的检测限为5.3 × 10-4ng.9批原料和6批缓释片均检出二甲胺.结论 所用方法灵敏度高,准确性好,可用于盐酸二甲双胍原料和制剂中二甲胺的痕量检查.