目的:探讨七氟醚（sevoflurane, SEV）对乳腺癌细胞增殖、侵袭的作用。方法:购买正常人乳腺上皮细胞系MCF10A和人乳腺癌细胞系MCF7，测定沉默信息调节因子2（sirtuin 2, SIRT2）、ATP柠檬酸裂合酶（ATP citrate lyase, ACLY）在乳腺癌细胞中的表达水平及ACLY的乙酰化水平。将乳腺癌细胞分为如下组：Control组、2% SEV组、4% SEV组、si-NC组、si-SIRT2组、4% SEV+si-NC组、4% SEV+si-SIRT2组、SIRT2组、SIRT2+ACLY-WT组、SIRT2+ACLY-3KQ组、SIRT2+ACLY-3KQ+4% SEV组、si-ACLY组、si-ACLY+ACLY-WT组、si-ACLY+ACLY-3KQ组。MTT、Transwell实验检测细胞增殖及侵袭。结果:相对于MCF-10A细胞（1.00±0.15），SIRT2在Control组细胞（0.43±0.03）中低表达（ q=11.98， P<0.001），SEV能诱导SIRT2的表达（ F=88.71， P<0.001）。此外，乳腺癌细胞中ACLY和ACLY-3K乙酰化水平上调（均 P<0.05）。敲减SIRT2或过表达ACLY、ACLY-3KQ均能促进MCF7细胞增殖、侵袭（均 P<0.05），而SEV、过表达SIRT2或敲减ACLY则呈现相反效果（均 P<0.05）。 结论:SEV可能通过SIRT2抑制乳腺癌细胞的增殖、侵袭，该作用可能与调控ACLY的去乙酰化有关。

目的:基于低氧诱导因子-1α（HIF-1α）/ATP柠檬酸裂合酶（ACLY）信号通路，探究透明细胞肾细胞癌（clear cell renal cell carcinoma，ccRCC）潜在发病机制，为ccRCC的治疗提供新思路。方法:收集苏州大学附属第一医院诊断为ccRCC的78例标本，通过外显子测序明确VHL基因突变情况；通过免疫组织化学染色评估HIF-1α/ACLY在VHL基因突变的ccRCC中表达情况，通过Western blot实验在携带VHL基因突变的ccRCC细胞系（786-O、A498、UM-RC-2、SNU-333和Caki-2）中进行进一步验证。在ccRCC细胞系中过表达或者干扰HIF-1α，通过即时定量PCR（qPCR）和Western blot实验检测ACLY的mRNA和蛋白质水平。CoCl 2和低氧（1%O 2）处理HeLa细胞激活HIF-1α，检测ACLY的mRNA和蛋白水平。通过JASPAR数据库结合染色质免疫共沉淀实验（ChIP）及荧光素酶报告基因实验等探究HIF-1α调控ACLY潜在分子机制。通过BODIPY染色等细胞生物学技术检测HIF-1α/ACLY调控轴对脂质积累的作用。比较ccRCC患者与良性病变患者ACLY表达情况，通过生存期分析探究ACLY作为ccRCC预后指标可行性。 结果:外显子测序发现，78例ccRCC患者中有55例携带VHL失活突变，其中HIF-1α与ACLY蛋白水平呈正相关，携带VHL基因突变的ccRCC细胞系中ACLY和HIF-1α的蛋白水平同样呈现不同程度正相关；在A498细胞中过表达HIF-1α可以增加ACLY的mRNA和蛋白水平，在Caki-2细胞中敲低HIF-1α则可以抑制ACLY的mRNA和蛋白质水平（均 P<0.001），CoCl 2和低氧处理可以通过激活HIF-1α显著提高ACLY的mRNA和蛋白水平（均 P<0.001）。荧光素酶报告基因转录活性量化及ChIP-qPCR结果提示HIF-1α可以直接与ACLY启动子区域结合从而转录激活ACLY表达，提高ACLY蛋白水平（均 P<0.001）。BODIPY染色结果提示细胞系中游离脂肪酸的含量和细胞中HIF-1α及ACLY的水平呈正相关，敲低HIF-1α可以有效降低细胞中脂质积累，过表达ACLY则可以逆转这一过程。同时，细胞功能实验提示 HIF-1α敲低的ccRCC细胞增殖速率显著下降，外源性过表达ACLY则可以恢复肿瘤细胞的增殖能力（ P<0.001）。通过生存分析发现，相较于ACLY低表达组，ACLY高表达组ccRCC患者预后较差，中位生存期较短（ P<0.001）。 结论:ccRCC中VHL失活突变介导的HIF-1α高表达通过上调ACLY促进脂质合成，促进肿瘤进程，靶向HIF-1α/ACLY信号轴可能为ccRCC临床诊疗提供理论依据。

目的:研究白虎加人参汤对2型糖尿病(T2DM)模型大鼠腺苷一磷酸活化蛋白激酶(AMPK)/固醇反应元件结合蛋白-1(SREBP1)信号通路的影响.方法:通过高脂饲料联合链脲佐菌素(STZ)注射建立T2DM模型大鼠,并用不同剂量的白虎加人参汤灌胃.通过检测各组大鼠造模给药后血清中相关生化指标和肝组织病理学变化,评估白虎加人参汤对T2DM模型大鼠的治疗作用;然后,运用定量聚合酶链反应(qPCR)和蛋白质免疫分析法检测白虎加人参汤干预后,各组大鼠肝组织中AMPK/SREBP1信号通路关键因子腺苷一磷酸活化蛋白激酶(AMPK)、乙酰辅酶A羧化酶1(ACC1)、脂肪酸合成酶(FASN)、ATP柠檬酸裂解酶(ACLY)基因及蛋白水平,初步探究白虎加人参汤治疗T2DM模型大鼠的作用机制.结果:白虎加人参汤可明显降低T2DM模型大鼠血清中空腹血糖(FBG)、口服葡萄糖耐量试验(OGTT)、谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)以及低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平,升高高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平,同时改善T2DM模型大鼠肝组织病理学变化.qPCR及蛋白质免疫分析结果显示,白虎加人参汤可显著降低T2DM模型大鼠肝组织中AMPK基因与蛋白水平,上调SREBP1、ACC1、ACLY、FASN基因与蛋白水平.结论:白虎加人参汤对T2DM模型大鼠具有治疗作用,其作用机制可能与调节肝组织中AMPK/SREBP1信号通路,改善脂代谢有关.

目的:明确康莱特注射液(KLTi)通过调控胆固醇代谢对肺腺癌A549细胞恶性生物学行为的抑制作用.方法:构建A549细胞体外培养模型,设置空白对照组(CON组)、KLTi组、顺铂(DDP)组及KLTi+DDP组,分别给予对应药物干预,采用CCK-8法检测不同分组的药物干预对A549细胞增殖的影响,并确定IC50值用于后续实验;使用细胞划痕实验、平板克隆形成实验、Transwell侵袭实验观察不同分组药物对A549细胞恶性生物学行为的影响;流式细胞术检测不同分组药物对A549细胞晚期凋亡水平的影响;WB法检测各组细胞上皮间质转化(EMT)相关蛋白表达,ELISA法检测促炎因子释放水平.采用比色法检测细胞胆固醇含量水平的组间差异,借助WB法检测胆固醇代谢相关膜通道蛋白ATP结合盒转运蛋白A1(ABCA1)及功能蛋白ATP柠檬酸裂解酶(ACLY)、肽基脯氨酰异构酶B(PPIB)表达水平差异.结果:KLTi及DDP对A549细胞抑制作用具有时间及剂量依赖性(均P<0.05),最终选择2 mg/mL KLTi、3 μg/mL DDP作为干预剂量,按分组加药干预48 h后显示,KLTi单用或联合DDP均可抑制A549细胞克隆形成、迁移、侵袭能力且促进其晚期凋亡,KLTi+DDP组的效果更加明显(P<0.05或P<0.01);KLTi单用或联合DDP可通过调控E-cadherin、vimentin、snail蛋白表达从而影响A549细胞EMT进程(P<0.05或P<0.01),同时下调IL-6及IL-8的释放水平(P<0.05或P<0.01).KLTi单用及联合DDP均可以明显降低A549细胞胆固醇含量(P<0.05或P<0.01),并且对ABCA1、ACLY、PPIB表达具有调控作用,联合组的效果更加明显(P<0.05或P<0.01).结论:KLTi可能通过调控胆固醇代谢水平及相关通道蛋白抑制肺腺癌A549细胞增殖、迁移、侵袭等恶性生物学行为及EMT进程.

为了分析当归四逆汤(Danggui Sini Decoction,DSD)改善寒凝血瘀证(blood stasis syndrome,BSS)导致大鼠肾损伤的作用机制.首先,将32只SD雌鼠随机分为4组,正常组和寒凝血瘀组大鼠灌胃等量的蒸馏水,正常+当归四逆汤组以及寒凝血瘀+当归四逆汤组灌胃5.103 g·kg-1当归四逆汤,共计14 d.同时每日给予大鼠冰水浴建立寒凝血瘀模型,并于第 14 天对寒凝血瘀大鼠皮下注射0.8 mg·kg-1肾上腺素.正常大鼠在37℃下水浴和注射等量的蒸馏水.接着,实验结束后收集大鼠的 24 h尿、血清和肾脏,分别进行代谢组学分析、生化指标检测和苏木精-伊红(HE)染色.然后,该研究利用1 H-NMR代谢组学技术揭示DSD改善BSS导致大鼠肾损伤调控的代谢网络,结合网络药理学初步阐明DSD起效作用的关键靶点.病理及生化检测结果显示,在DSD干预后肾脏的炎症浸润,血肌酐、血尿素氮和尿蛋白的含量异常得到了显著回调;代谢组学分析发现,DSD降低BSS导致大鼠的肾损伤主要通过回调10个差异代谢物和3条主要代谢通路(牛磺酸与低牛磺酸代谢、柠檬酸循环、乙醛酸和二羧酸代谢)的异常发挥作用;网络药理学分析提示DSD减轻BSS导致大鼠的肾损伤可能与ATP 柠檬酸裂解酶(ACLY)和一氧化氮合酶 2(NOS2)2个关键基因以及精氨酸生物合成与精氨酸和脯氨酸代谢2条主要代谢通路有关.该研究基于网络调控视角初步揭示了DSD改善BSS导致大鼠肾损伤的作用机制,为进一步深入研究起效过程的分子机制提供了线索和依据.

目的 探究ATP柠檬酸裂合酶(ACLY)在肝细胞癌(HCC)发生发展中的作用及其对HCC免疫微环境的影响.方法 采用美国阿拉巴马大学伯明翰分校癌症数据分析网站和肿瘤基因表达谱交互分析数据库在线检索ACLY在癌症基因组图谱数据库收录的不同肿瘤中的表达情况和预后改变,选取HCC为疾病模型,分析ACLY在基因表达数据库HCC标本中的表达情况,并采集HCC患者临床标本在mRNA、蛋白水平进行表达验证;同时在细胞水平敲减ACLY,并利用转录组测序分析差异表达基因,进行细胞增殖实验等功能验证;探讨ACLY与肿瘤微环境中免疫细胞及免疫浸润的相关性,以及与免疫新抗原、免疫检查点基因的相关性.结果 ACLY基因在包括HCC在内的多种实体瘤中高表达(P均<0.05),且ACLY高表达与HCC的总体存活率具有显著相关性(P =0.005).ACLY的高表达可影响包括肿瘤相关成纤维细胞在内的多种免疫细胞的数量以及脂代谢基因的表达(P均<0.05).结论 ACLY与HCC的发生发展及脂代谢异常密切相关,并对HCC的免疫微环境造成一定程度的影响.

bempedoic acid是首个每日口服1次的ATP-柠檬酸裂解酶抑制剂,通过上调低密度脂蛋白(LDL)受体来降低胆固醇生物合成和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平.bempedoic acid适用于需要额外降低LDL-C的患者,特别是他汀类药物不耐受的患者.临床试验已经证实bempedoic acid有良好的安全性和耐受性,可单独使用,也可以联合他汀类药物,具有良好的临床实用前景.

目的:了解代谢组学技术应用于结核分枝杆菌(MTB)代谢物及代谢途径检测的研究情况,为开发治疗耐药MTB感染的安全新药提供参考.方法:以"结核分枝杆菌""代谢组学""药物靶点""药物研发"等的中英文为关键词,在PubMed、中国知网、维普等数据库中组合检索2012年-2018年6月发表的相关文献,并从抗结核药物的新靶点(包括MTB脂代谢、能量代谢、氨基酸代谢、miRNA等途径)、新抗菌化合物的筛选(主要是抑制MTB呼吸链的抗菌化合物)及抗结核新药的临床前评价等3个方面总结代谢组学技术应用于抗结核新药研发的研究进展.结果与结论:共获得相关文献948篇,其中有效文献40篇.应用代谢组学技术研究发现,干扰脂代谢途径的相关酶或基因等(如分枝菌酸、乙酰辅酶A羧化酶、脂酰辅酶A合成酶、泛酸等),干扰能量代谢的异柠檬酸裂解酶,抑制氨基酸代谢途径中的色氨酸合成代谢途径、β-碳酸酐酶合成途径、丙酮酸激酶相关途径,抑制miRNA调控途径等均可作为抗结核药物研发的新作用靶点.通过代谢组学技术已经发现细胞色素bc1复合物QcrB的抑制剂Q203、QOAS,腺苷三磷酸合酶FoF1-ATP抑制剂,细胞色素AtpE抑制剂BDQ,二芳基喹啉(DARQS)等呼吸链抑制化合物,以及腺苷酸合成酶MbtA抑制剂、还原型辅酶Ⅰ脱氢酶Ⅱ抑制剂、蛋白酶ClpP和膜蛋白复合体3的抑制剂、脂肪酰基-腺苷一磷酸(AMP)连接酶FadD32和聚酮合成酶的抑制剂等抗菌化合物.应用代谢组学技术分析药物作用后机体的代谢变化,可为抗结核药物的毒性、安全性、疗效等评价提供技术手段.但目前对于代谢组学技术所获数据的处理方法尚不完善,数据分析模型尚需进一步完善与优化;此外,国内对代谢组学技术应用于抗结核药物研发的研究范围较窄,且易漏掉对不稳定的小分子和大分子代谢物的分析,因此需结合蛋白质组学或转录组学以更高效、准确地为抗结核新药研发提供支持.

目的:探讨沉默ATP柠檬酸裂解酶(ATP citrate lyase,ACLY)基因表达对结肠癌HCT116细胞增殖和迁移的抑制作用.方法:采用成簇规律间隔的短回文重复序列(clustered regulatory interspaced short palindromic repeats,CRISPR)/CRISPR相关蛋白9(CRISPR-associated protein 9,Cas9)技术特异性靶向ACLY基因,构建2株稳定沉默ACLY表达的结肠癌HCT116细胞(即ACLY-knockout-1和ACLY-knockout-2,简称KO-1和KO-2).应用蛋白质印迹法检测KO-1和KO-2组及未敲除ACLY的对照组(Ctrl) HCT116细胞中ACLY蛋白的表达,应用CCK-8法和软琼脂克隆形成实验分别检测Ctrl、KO-1和KO-2组HCT116细胞的增殖能力,划痕愈合实验和Transwell小室法分别检测Ctrl、KO-1和KO-2组HCT116细胞的迁移和侵袭能力,应用实时荧光定量PCR法检测Ctrl、KO-1和KO-2组HCT116细胞中上皮-间质转化标志分子E-cadhrein、N-cadherin和波形蛋白(vimentin,VIM)以及相关转录因子Snail和锌指E盒增强子结合蛋白1(zinc-finger E-box binding homeobox1,ZEB1) mRNA的表达水平.结果:KO-1和KO-2组HCT116细胞中ACLY蛋白不能正常表达,而Ctrl组HCT116细胞中可见ACLY蛋白表达.细胞培养72和96 h,KO-1和KO-2组HCT116细胞的增殖能力明显低于Ctrl组(P值均＜0.01);KO-1组HCT116细胞形成的克隆数显著少于Ctrl组(P＜0.01).KO-1和KO-2组单克隆HCT116细胞的迁移(P值均＜0.05)和侵袭(P值均＜0.01)能力均低于Ctrl组.KO-1和KO-2组单克隆HCT116细胞中上皮-间质转化标志分子N-cadherin和VIM以及相关转录因子Snail和ZEB1 mRNA的表达水平均明显低于Ctrl组(P值均＜0.01),E-cadherin mRNA的表达水平均明显高于Ctrl组(P值均＜0.01).结论:沉默ACLY基因可能逆转结肠癌HCT116细胞的上皮-间质转化,显著抑制结肠癌HCT116细胞的增殖和迁移.

目的:探讨肝癌衍生生长因子 (HDGF) 对HepG2细胞增殖和脂质代谢的影响.方法:用脂质体包裹si RNA的方法沉默HDGF基因, 用实时荧光定量PCR法和蛋白质免疫印迹法检测HDGF在mRNA和蛋白水平的变化, 检测细胞总甘油三酯、胆固醇含量并用油红O染色, CCK-8检测及琼脂糖凝胶克隆形成, 实时荧光定量PCR法检测脂质代谢相关酶的mRNA表达.结果:将靶向HDGF小干扰 (si RNA-HDGF) 转染到HepG2细胞后, 可明显抑制HDGF的mRNA表达 (P＜0.001) 和蛋白表达.HDGF蛋白抑制后, 细胞增殖在48 h (P＜0.01) 、72 h (P＜0.001) 和96 h (P＜0.001) 均明显降低;细胞内总甘油三酯及胆固醇水平也明显降低 (P＜0.05, P＜0.01).此外, 油红O染色显示细胞内脂滴有明显的减少.脂质代谢相关酶脂肪酸合成酶 (FASN) 、羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶 (HMGCR) 、硬脂酰辅酶A去饱和酶 (SCD) 及ATP-柠檬酸裂解酶 (ACLY) 的mRNA表达均明显降低 (P＜0.001, P＜0.001, P＜0.001, P＜0.01).结论:抑制HDGF的表达可明显降低HepG2细胞内脂质代谢水平并抑制其增殖.