目的:探讨第三代测序技术在染色体微重复相关ATR-X综合征家系胚胎植入前遗传学检测中的临床应用价值。方法:2022年10月就诊于江西省妇幼保健院辅助生殖中心的1例生育过疑似ATR-X综合征患儿的家系为研究对象。染色体拷贝数变异测序（copy number variation sequencing，CNV-Seq）检测女方携带Xq21.1区域550 kb临床意义不明确的杂合微重复，该重复累及 ATRX基因部分序列。采用第三代长读长测序技术对女方基因组序列进行检测，确定上述重复插入基因组的物理位置，明确该重复的致病性，并获得与上述微重复连锁遗传的单核苷酸多态性位点（single nucleotide polymorphism，SNP）单倍型。夫妻双方签署知情同意书后行胚胎植入前遗传学检测（preimplantation genetic testing，PGT）助孕。挑选1枚不携带致病性微重复的整倍体胚胎移植，于孕中期羊水穿刺后进行产前诊断，验证是否与PGT结果一致，跟踪随访胎儿出生后情况。 结果:第三代长读长测序及Sanger测序验证结果显示，女方携带的Xq21.1微重复插入至基因组chrX：76804463-76804464（GRCh37/hg19），为 ATRX基因内串联重复，预测可能导致ATRX蛋白正常功能受损。该家系经PGT治疗，获得27枚卵子，卵胞质内单精子注射（intracytoplasmic sperm injection，ICSI）受精后成功养成13枚囊胚。囊胚活检细胞经遗传学检测显示，2枚胚胎为不携带上述致病微重复的整倍体胚胎。冻融胚胎移植1枚正常胚胎，成功妊娠，孕17周羊水穿刺检测结果未见异常，2023年11月孕39 +5周顺产娩一女活婴，体健。 结论:第三代测序技术凭借其长读长的特点，对临床意义不明确微重复进行PGT检测时有显著优势，不仅能够明确微重复插入基因组的位置，判断其致病性，还能够获得与目标变异连锁遗传的SNP单倍型，为后续胚胎检测做准备。

目的:对1例表现为发育迟缓、特殊面容且具有阳性家族史的患儿进行临床和遗传学分析。方法:以1例因"竖头不稳、不会翻身"于2020年就诊于山东大学附属儿童医院的患儿及其家庭作为研究对象。提取患儿及其父母及两个哥哥的基因组DNA，采用外显子区域捕获及高通量测序技术对其进行变异分析，对候选变异进行Sanger测序验证及家系分析。结果:基因测序显示患儿及症状相似的哥哥均携带X染色体上的 ATRX基因的c.5275C>A半合子变异，既往未见报道。经验证，其母亲为变异的杂合子携带者。患儿的父亲及未患病的哥哥均未携带上述变异。 结论:患儿及其患病的哥哥被确诊为罕见的X连锁α-地中海贫血精神发育迟滞综合征。c.5275C>A变异的发现丰富了 ATRX基因的变异谱。

目的 探讨TAS102对α地中海贫血伴智力低下综合征X连锁基因(α-thalassemia mental retardation X-linked,ATRX)缺失U87胶质瘤细胞体外增殖的影响及机制.方法 选择ATRX野生型U87细胞和ATRX敲除的U87ATRX-/-胶质瘤细胞为研究对象,设立U87对照组、U87药物组、U87ATRX-/-对照组、U87ATRX-/-药物组,采用CCK-8法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞周期的变化,β-半乳糖苷酶染色检测细胞老化情况,采用免疫荧光和Western blot检测DNA损伤识别反应通路活化及相关蛋白的表达情况.结果 CCK-8检测结果显示,经不同浓度的TAS102培养72h,U87ATRX-/-药物组细胞存活率低于U87药物组,U87组细胞IC50值为(10.50±1.52)mg/L,U87ATRX-/-细胞IC50为(4.72±0.48)mg/L,与U87组细胞相比,U87ATRX-/-组IC50更低(P＜0.01).细胞周期检测示:U87对照组G2期细胞百分比为(17.86±2.12)％,药物组G2期细胞百分比为(23.04±3.57)％;U87ATRX-/-对照组G2期细胞百分比为(18.94±3.05)％,药物组为(61.67±1.13)％,与U87药物组相比,U87ATRX-/-药物组G2期细胞明显增多(P＜0.01).β-半乳糖苷酶染色结果示:U87对照组染色阳性细胞百分比为(7.73±0.71)％,药物组为(29.55±4.12)％,U87ATRX-1-对照组为(8.70±2.55)％,药物组为(53.64±7.03)％,与U87药物组相比,U87ATRX-/-药物组染色阳性细胞增多(P＜0.01).免疫荧光检测53BP1的表达显示,U87对照组染色阳性细胞百分比为(14.5±7.39)％,药物组为(21.19±3.68)％,U87ATRX-/-对照组为(16.75±2.97)％,药物组为(54.27±8.38)％,U87ATRX-/-药物组53BPl表达较U87药物组明显增多(P＜0.05).Western blot检测不同时间点ATR、CHK1、ATM、CHK2的磷酸化水平,U87ATRX-/-药物组ATM/CHK2的磷酸化水平增高.结论 TAS102能够选择性抑制U87ATRX-/-胶质瘤细胞增殖,通过诱导细胞衰老和活化ATM-CHK2损伤反应通路,引起细胞周期阻滞于G2期,抑制细胞增殖.

ATR-X综合征也称X连锁的α地中海贫血智力障碍综合征(Alpha-thalassemia X-linked intellectual disability,ATR-X;OMIM:301040),是由X染色体上的ATRX基因突变引起的罕见遗传病[1].ATR-X综合征的致病基因位于Xq21.1,编码了2492个氨基酸,所编码的蛋白质是染色质重塑因子SNF2(SWI/SNF)家族成员,在体外具有一定的染色质重塑活性[2].ATRX基因包含约300 kb的基因组DNA,由35个外显子组成[3.4].ATR-X综合征的临床表现多为面部畸形、严重智力低下、轻度(或无)α-地中海贫血、生殖器不同程度的异常、骨骼异常和自闭症行为[5].该综合征具有较广的基因突变谱和临床表型谱,但基因型与临床表型的对应关系尚不清楚.本研究通过全外显子组测序对一个核心家系中临床表现为智力低下、异常面容伴阵发性抽搐的患者进行致病基因突变筛查,发现了ATRX基因上一个单碱基致病基因突变,现报道如下.

ATR-X综合征是一种X连锁合并α地中海贫血的智力低下综合征。其临床特征为：面部、生殖器异常及严重智力障碍，忠者为轻型HbH病，血红蛋白电泳及血液学指标无明显改变。1%BCB温育的红细胞可见HbH包涵体；携带者也可检出少量HbH包涵体。此综合征的候选基因定位于Xq13.1-21.31，编码的蛋白质其复杂的生物学功能。