目的:探讨二十碳五烯酸（EPA）对HER2阳性乳腺癌细胞焦亡的影响。方法:用EPA处理HER2阳性乳腺癌细胞，检测EPA对HER2阳性乳腺癌细胞的细胞毒性作用。Annexin V/PI分析EPA诱导的细胞存活率下降是否因细胞死亡增加而发生。EPA处理后检测细胞焦亡通路中关键分子标志物的表达状态。结果:EPA处理HER2阳性乳腺癌细胞后，HER2阳性乳腺癌细胞AU-565，SK-BR-3，MDA-MD-435的细胞活力减少（ P<0.05）；但是对正常乳腺细胞MCF 10A，Hs 578Bst的细胞活力无显著影响（ P>0.05）。EPA处理24 h后，AU-565，SK-BR-3，MDA-MD-435细胞中膜联蛋白+/PI+细胞均呈增加（ P<0.05）；MCF 10A，Hs 578Bst中膜联蛋白+/PI-细胞增加（ P<0.05）。EPA处理后，在AU-565，SK-BR-3，MDA-MD-435中，NF-κB通路关键蛋白p65、IKKα/β、IκBα的磷酸化水平上升；而在MCF 10A，Hs 578Bst中，p65、IKKα/β、IκBα的磷酸化水平无显著改变。此外，分子对接发现EPA可能与NF-κB通路上游蛋白NEMO的K381位点存在相互作用，最低结合能为-7.33 kcal/mol。EPA处理后，NEMO敲除的MDA-MD-435细胞中膜联蛋白+/PI+细胞显著减少（ P<0.05）；在NEMO敲除细胞中过表达NEMO野生型或NEMO K381R突变型，发现过表达NEMO野生型的MDA-MD-435细胞中膜联蛋白+/PI+细胞显著增加（ P< 0.05），表达NEMO K381R突变型的MDA-MD-435细胞中膜联蛋白+/PI+细胞显著减少（ P<0.05）。EPA处理后，在AU-565，SK-BR-3，MDA-MD-435中，Pro-IL-1β和ASC的表达水平下降，而cleaved caspase1、cleaved Gasdermin D的表达水平上升，IL-1β的分泌水平上升（ P<0.05），HMGB1发生了细胞质转移；而在MCF 10A，Hs 578Bst中，Pro-IL-1β、ASC、cleaved caspase1、cleaved Gasdermin D的表达水平改变无统计学意义，IL-1β的分泌水平变化无统计学意义（ P>0.05），HMGB1未发生细胞质转移。 结论:EPA与NEMO的K381位点相互作用，激活了NF-κB通路，促进了caspase1、IL-1β和Gasdermin D的切割，增加了IL-1β的分泌水平和HMGB1的细胞质转移水平，最终诱发了HER2阳性乳腺癌细胞焦亡。

目的 探讨上游移码蛋白1(UPF1)对人乳腺癌细胞AU565侵袭、迁移及上皮间充质转化(EMT)的影响及机制研究.方法 收集2021年9月—2022年3月于我院接受乳腺切除术43例乳腺癌患者新鲜癌组织及正常乳腺组织,制备石蜡块,免疫组织化学法检测UPF1表达情况.购置人乳腺癌细胞系AU565及人乳腺上皮细胞系DU4475,激光共聚焦扫描显微镜法测定UPF1水平.采用小干扰RNA(siRNA)技术构建UPF1低表达的重组细胞,分析转染siR-NA-UPF1对AU565细胞侵袭、迁移能力以及EMT相关蛋白表达和蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(Akt/mTOR)信号通路的影响.结果 乳腺癌组织UPF1的吸光度值显著高于正常乳腺组织(P＜0.05).AU565细胞UPF1荧光强度显著大于DU4475细胞(P＜0.05).与siRNA-NC组比较,转染siRNA-UPF1后AU565细胞中UPF1蛋白及mRNA表达水平均显著降低(P＜0.05).与siRNA-NC组比较,转染siRNA-UPF1后AU565细胞穿膜率和细胞迁移率均显著增加(P＜0.05).转染siRNA-UPF1后AU565细胞E-candherin蛋白表达水平显著降低,Vimentin和N-cadherin蛋白表达水平显著升高(P＜0.05).转染siRNA-UPF1后AU565细胞p-Akt和p-mTOR水平显著升高(P＜0.05).结论 UPF1在乳腺癌中表达上调,但沉默UPF1可能通过激活Akt/mTOR通路传导,促进乳腺癌细胞AU565的侵袭和迁移,并诱导EMT发生.

目的 探讨阿司匹林对人表皮生长因子受体2(HER2)阳性乳腺癌AU-565细胞和三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡及自噬的影响.方法 采用MTT法检测阿司匹林对细胞增殖的影响,流式细胞术检测阿司匹林对细胞凋亡的影响,Westernblot法检测Bcl2、裂解型胱天蛋白酶3(c-caspase-3)、裂解型多腺苷二磷酸核糖聚合酶(c-PARP)及自噬相关基因3(ATG3)、微管相关蛋白1轻链3A(LC3A)、LC3B的蛋白水平.结果 阿司匹林可抑制AU-565细胞和MDA-MB-231细胞增殖,使细胞凋亡率明显增加,促凋亡蛋白c-caspase-3、c-PARP表达上调,凋亡抑制蛋白Bcl2表达降低,细胞自噬相关蛋白ATG3、LC3A、LC3B表达显著上调.结论 阿司匹林可通过诱导AU-565细胞和MDA-MB-231细胞凋亡及自噬,抑制细胞增殖.

目的 探讨七氟醚对乳腺癌细胞NF-κB活性及基质金属蛋白酶(MMPs)表达的影响,为乳腺癌治疗提供新的参考数据.方法 体外培养乳腺癌细胞AU565,分别用1.7％、3.4％、5.1％七氟醚作用4h,分别设为低剂量组、中剂量组、高剂量组,将未经七氟醚作用培养的细胞设为对照组.利用MTT检测各组细胞增殖情况,实时荧光定量分别检测MMP-2、MMP-9 mRNA相对表达量,蛋白免疫印迹检测IKKβ Ser180、NF-κB p65、MMP-2、MMP-9蛋白表达情况,EMSA检测NF-κB活性.蛋白免疫印迹检测IL-1β预处理细胞经3.4％七氟醚作用后,IKKβ Ser180、NF-κB p65、MMP-2、MMP-9蛋白表达变化.结果 与对照组相比,低剂量组、中剂量组、高剂量组细胞增殖率均显著下降,差异有统计学意义(P＜0.05);与对照组相比,低剂量组、中剂量组、高剂量组中MMP-2、MMP-9 mRNA相对表达量显著下调,差异有统计学意义(P＜0.05),IKKβ Ser180、NF-κB p65、MMP-2、MMP-9蛋白表达量显著下降,差异有统计学意义(P＜0.05),NF-κB活性显著降低,差异有统计学意义(P＜0.05).IL-1β预处理后,3.4％七氟醚对乳腺癌细胞中MMP-2、MMP-9蛋白表达量的抑制作用显著减弱.结论 七氟醚是一种潜在的治疗乳腺癌的分子靶向药物,可通过抑制NF-κB活性来降低MMPs表达.

目的:探讨人表皮生长因子受体-3(human epidermal growth factor receptor-3,HER-3)表达对HER-2阳性型乳腺癌细胞放射敏感性的影响.方法:使用慢病毒颗粒感染HER-2阳性型乳腺癌细胞系(AU-565、SKBR-3)构建HER-3基因敲低细胞系模型,蛋白质印迹法(Western blot)及实时定量PCR(RT-qPCR)技术检测感染的效率.克隆形成实验测定不同组别乳腺癌细胞放射增敏效果.将HER-3敲低组与对照组细胞分别给予X线照射(6 Gy,6 MV,源皮距100 cm),流式细胞术测定不同组别细胞凋亡率以及细胞周期分布的变化.免疫荧光法检测细胞辐射后不同时间段的γH2AX焦点数,评估辐射后DNA损伤情况,蛋白质印迹法检测细胞周期调控相关蛋白CyclinB1的表达.结果:克隆形成实验结果显示,HER-3敲低组乳腺癌细胞放射敏感性增强.流式细胞术结果显示,HER-3敲低后,HER-2阳性型乳腺癌细胞辐射后凋亡率明显增加,细胞周期G2期分布比例提高.免疫荧光结果显示,HER-3敲低后,HER-2阳性型乳腺癌细胞γH2AX焦点数目在辐射后先增加后降低,较对照组峰值更高,降低时趋势更慢,提示HER-3敲低可增强辐射诱导的DNA损伤,减少DNA修复.蛋白质印迹法结果显示,细胞周期相关驱动蛋白CyclinB1表达降低.结论:HER-3基因敲低后一方面增加了 HER-2阳性型乳腺癌细胞辐射后DNA的损伤并减缓其修复能力,促进细胞凋亡;另一方面通过下调细胞周期蛋白CyclinB1的表达,增加G2期细胞分布,提升了放射敏感性.

目的 研究miR-129对乳腺癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其作用机制.方法 选取乳腺癌SKBR3、AU565细胞系,建立过表达与敲低miR-129细胞系,将细胞分为Control-mimic组、miR-129-mimic组和miR-129-mimic+miR-mimic-shRNA组.采用RT-PCR检测SKBR3、AU565细胞系中miR-129的表达水平,CCK-8法检测SKBR3、AU565细胞系的增殖能力,通过划痕实验及Transwell实验测定SKBR3、AU565细胞系的迁移及侵袭能力.采用生物信息学和双荧光素酶报告系统检测miR-129与Twist1的互补结合位点,采用Western blot对miR-129是否是Twist1的转录靶点进行分析验证.结果 miR-129-mimic组SKBR3和AU565细胞中miR-129的表达水平显著高于Control-mimic组(P<0.05).miR-129-mimic组SKBR3和AU565细胞的增殖能力明显低于Control-mimic组(P<0.01),而miR-129-mimic+miR-mimic-shRNA组逆转了miR-129过表达导致的细胞增殖能力降低.与Control-mimic组比较,miR-129-mimic组中SKBR3和AU565细胞的迁移及侵袭能力明显下降(P<0.01).生物信息学软件分析显示,miR-129与Twist1的3'-UTR端有互补结合位点,且双荧光素酶试验结果显示,miR-129-mimic组中WT-3'Twist-UTR的荧光素酶活性明显低于Control-mimic组(P<0.01);而miR-129-mimic组中Mut-3'Twist-UTR的荧光素酶活性与Control-mimic组比较,差异无统计学意义(P>0.05);Western blot结果显示,与Control-mimic组比较,miR-129-mimic组SKBR3和AU565细胞中Twist1蛋白水平明显下降(P<0.01).结论 miR-129可通过靶向调节Twist1抑制乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭,是乳腺癌诊断及治疗的潜在靶点.