目的:探讨烧伤患者感染肺炎克雷伯菌后对碳青霉烯类抗生素耐药的分子机制。方法:选择2018年5月至2019年10月就诊于浙江省台州市中心医院的感染肺炎克雷伯菌的烧伤患者，并分离10株耐碳青霉烯类抗生素肺炎克雷伯菌（CR-KP），然后分析CR-KP的耐药程度，采用聚合酶链反应（PCR）法检测常见的耐药基因，并通过质粒接合试验验证耐药基因的存在，同时分析膜孔OmpK36蛋白的表达量。结果:10株菌种均呈现了不同程度的耐药现象。PCR的结果显示全部耐药菌携带NDM基因，4株携带KPC基因，此外，仅有少部分的耐药菌携带产超广谱β-内酰胺酶基因和AmpC基因。质粒接合试验显示大部分接合菌对碳青霉烯类抗生素存在耐药，免疫蛋白印迹结果提示接合菌的膜孔OmpK36蛋白表达量减少。结论:烧伤患者感染肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗生素耐药的主要原因是质粒介导的NDM基因插入以及膜孔OmpK36蛋白表达量减少。

目的:用全基因组测序技术分析深圳市人民医院2008—2016年碳青霉烯类耐药大肠埃希菌（CR-ECO）的耐药基因构成情况及相关分子流行病学特征。方法:收集深圳市人民医院2008年1月1日至2016年12月31日的CR-ECO菌株，采用改良碳青霉烯类失活法和EDTA碳青霉烯类失活法进行表型确证，并采用llumina HiSeq进行二代测序，分析其耐药基因及相关分子生物学特征。结果:共收集CR-ECO非重复菌株16株，经过全基因组测序发现携带IMP-4基因5株，IMP-26基因1株，NDM-1基因1株，NDM-5基因4株，NDM-13基因2株。16株菌株中检测出AmpC酶和（或）超广谱β内酰胺酶（ESBL）基因及各类外排泵基因，11株CR-ECO出现OmpC膜孔蛋白基因缺失；多位点序列分型、血清学分型呈多样化。结论:深圳市人民医院2008—2016年CR-ECO的耐药机制主要以产IMP型或NDM型碳青霉烯酶同时合并AmpC酶和（或）ESBL为主。利用全基因组测序可快速了解菌株在基因水平上的分子生物学信息。

目的:分析重症监护病房（ICU）建立人工气道机械通气患者肺部感染碳青霉烯类抗菌药物耐药肺炎克雷伯菌（CRKP）的临床特征及相关影响因素，为临床防止肺炎克雷伯菌感染提供理论依据。方法:收集2016年1月至2019年12月首都医科大学附属北京世纪坛医院ICU收治的肺部感染肺炎克雷伯菌的建立人工气道患者的临床资料，分析CRKP肺炎患者（研究组）及碳青霉烯类抗菌药物敏感肺炎克雷伯菌（CSKP）肺炎患者（对照组）的临床特征〔包括性别、年龄、急性生理学与慢性健康状况评分Ⅱ（APACHEⅡ）、机械通气时间、机械通气>10 d患者比例、肺炎克雷伯菌检出前抗菌药物使用情况、白细胞计数（WBC）、C-反应蛋白（CRP）、降钙素原（PCT）、白蛋白、入院前卧床>1个月患者比例、28 d病死率〕、基础疾病及器官功能衰竭情况等；比较两组菌株对常见抗菌药物的耐药率和2016至2019年4年间肺炎克雷伯菌对不同抗菌药物耐药率的差异；采用多因素Logistic回归分析影响肺部感染CRKP的危险因素，并检测相关耐药基因。结果:与对照组比较，研究组年龄更大〔岁：81.5（72.0，86.0）比78.0（71.0，80.5）〕，APACHEⅡ〔分：25.00（20.00，34.00）比19.00（14.00，23.25）〕和机械通气>10 d〔63.2%（182/288）比12.8%（10/78）〕、肺炎克雷伯菌检出前使用β-内酰胺酶抑制剂类抗菌药物〔75.69%（218/288）比30.77%（24/78）〕、使用碳青霉烯类抗菌药物〔79.86%（230/288）比41.03%（32/78）〕、使用≥2种抗菌药物〔80.90%（233/288）比29.49%（23/78）〕、入院前卧床>1个月〔40.97%（118/288）比11.54%（9/78）〕的比例及WBC 〔×10 9/L：9.72（6.41，14.69）比7.57（5.84，12.61）〕、CRP 〔mg/L：74.45（36.30，158.88）比39.22（13.68，92.51）〕、PCT〔μg/L：3.87（0.82，19.24）比0.51（0.25，5.71）〕和28 d病死率〔21.5%（62/288）比10.3%（8/78）〕更高，白蛋白〔g/L：24.1（18.3，28.6）比30.1（23.8，35.1）〕水平更低，机械通气时间更长〔d：16.5（9.0，19.0）比7.0（5.0，10.0）〕，合并慢性阻塞性肺疾病〔COPD：35.76%（103/288）比11.54%（9/78）〕、恶性肿瘤〔18.06%（52/288）比5.13%（4/78）〕及伴有肾衰竭〔31.94%（92/288）比11.54%（9/78）〕、休克〔51.74%（149/288）比19.23%（15/78）〕的比例更高，差异均有统计学意义（均 P<0.05）。2016至2019年4年间肺炎克雷伯菌对氨曲南、哌拉西林/他唑巴坦、亚胺培南、环丙沙星的耐药率比较差异均有统计学意义（均 P<0.05）；对氨曲南、哌拉西林/他唑巴坦的耐药率以2019年最高（分别为88.17%、86.02%），均以2016年最低（分别为70.65%、57.61%）；对亚胺培南的耐药率以2018年最高（86.32%），以2016年最低（59.78%）；对环丙沙星的耐药率以2016年最高（76.09%），以2018年最低（53.68%）。研究组耐药株对头孢替坦、阿米卡星、哌拉西林/他唑巴坦、头孢他啶、头孢曲松、庆大霉素的耐药率均明显高于对照组（82.99%比62.82%、49.31%比17.95%、75.69%比60.26%、81.25%比64.10%、80.21%比58.97%、91.32%比60.26%，均 P<0.05）。Logistic回归分析显示，合并COPD、严重低蛋白血症、机械通气时间>10 d及肺炎克雷伯菌检出前使用碳青霉烯类抗菌药物是CRKP感染的独立危险因素。基因检测显示：CRKP中含有TEM、KPC、AmpC、aac（3）-Ⅱ、ant（3＂）-Ⅰ、qnrS等多种耐药基因。TEM的检出率最高（为74.00%），qnrA检出率最低（为6.67%）。 结论:ICU建立人工气道机械通气患者出现CRKP与多种因素相关，应缩短机械通气时间，避免碳青霉烯类抗菌药物不规范的使用，提高血白蛋白水平，以减少CRKP肺炎的发生，改善患者预后。

目的:探究高压氧(HBO)逆转肺炎克雷伯菌对三、四代头孢菌素的耐药性及其机制。方法:选取2017年1月至2017年12月济宁市第一人民医院呼吸与危重症医学科收集的肺炎克雷伯菌3株，均表现为AmpC(头孢菌素酶)和ESBLs(超广谱β-内酰胺酶)阳性，采用VITEK微生物分析系统对菌株进行鉴定。随后将3个菌株均分为对照组和HBO组，随后将其培养于不同浓度的三、四代头孢菌素中，采用琼脂二倍稀释法测定菌株对三、四代头孢菌素的最低抑制浓度(MIC)，平板计数法检测菌株活性。此外，提取菌株中的总蛋白，采用Western blotting检测缺氧诱导因子1α(HIF-1α)的表达水平；采用头孢他啶、头孢匹罗三维实验法和纸片确证扩散法分别对菌株中的AmpC和ESBLs进行检测。结果:与对照组相比，HBO处理后，3个菌株对三、四代头孢菌素的MIC值降低，活性降低，HIF-1α的表达降低( P<0.05)；此外，HBO处理明显降低了AmpC和ESBLs的检出率。 结论:HBO处理能够明显逆转肺炎克雷伯菌对三、四代头孢菌素的耐药性，其机制可能与HIF-1α通路被抑制及AmpC、ESBLs检出率的降低有关。

目的 建立一种AmpC酶抑制剂的快速筛选方法,为治疗由耐药菌传播引起的感染提供筛选依据.方法 以阿维巴坦钠为阳性对照,采用紫外分光光度法检测反应体系的吸光度变化,通过6种不同底物的筛选比较及反应条件的优化,并对136种中药提取物进行筛选评价.结果 最佳体系为波长489 nm、底物质量浓度0.1 mg/mL、酶浓度400 U/mL、温度30℃、反应时间300 s.136种中药水提物中有12种中药水提物对AmpC酶的抑制率大于70％,其中桑寄生、赤芍、红景天、千斤拔、石见穿5种中药水提物的抑制率大于80％;添加桑寄生可明显提高青霉素的协同抗菌效应,最低抑菌浓度(minimal inhibit concentration,MIC)由2 mg/mL降低至0.8 mg/mL.结论 建立的AmpC酶抑制剂筛选方法快速、高效、可信度高,中药是抗耐药菌感染治疗的重要资源.

目的 评估迪尔碳青霉烯酶抑制剂检测碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌(CRE)产不同基因型碳青霉烯酶的效能.方法 收集 2018-2020 年广东省中医院临床分离的 73 株非重复 CRE.采用改良碳青霉烯灭活试验(mCIM)联合乙二胺四乙酸(EDTA)碳青霉烯灭活试验(eCIM)以及碳青霉烯酶抑制剂检测碳青霉烯酶,采用聚合酶链式反应(PCR)检测 10 种常见β-内酰胺酶基因.以PCR为金标法,评估两种表型试验的临床效能.结果 mCIM试验阳性 54 株,产丝氨酸碳青霉烯酶 20 株,产金属β-内酰胺酶 34 株,符合率为 98.63%(72/73).碳青霉烯酶抑制剂检出 56 株产碳青霉烯酶,产A类酶 22 株,产B类酶 34 株.1 株产OXA-181 的摩根摩根菌为假阴性,2 株不产碳青霉烯酶、高产头孢菌素酶 DHA 的 CRE 为假阳性.碳青霉烯酶抑制剂灵敏度和特异度分别为 98.18%(54/55)和 88.89%(16/18),符合率为 95.89%(70/73).结论 mCIM联合eCIM无法区分A类和D类丝氨酸碳青霉烯酶.碳青霉烯酶抑制剂符合率较 mCIM联合 eCIM试验稍低,能有效鉴别 A类和 B类酶,但在 D类酶和高产 AmpC酶的CRE检测上仍存在不足.碳青霉烯酶抑制剂与 mCIM/eCIM联合能更全面地实现碳青霉烯酶分型,精准指导临床合理用药.

目的 调查某医院儿科分离的6株对碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌的耐药基因型和相互间的同源性,为控制医院感染提供依据.方法 采用梅里埃Vitek-2 Compact对6株肺炎克雷伯菌进行鉴定及药敏试验.改良Hodge试验和金属酶E条检测菌株是否产碳青霉烯酶.聚合酶链式反应扩增菌株是否携带碳青霉烯酶、超广谱β-内酰胺酶和Ampc等耐药基因,并测序确定其基因型.多位点序列(MLST)和脉冲场凝胶电泳(PFGE)验证菌株之间的同源性.结果 6株肺炎克雷伯菌表现为多重耐药性,对临床常用的抗生素耐药.所有菌株改良Hodge和金属酶E条试验均阳性,且携带多个耐药基因.其中5株菌,分别携带NDM-1、SHV-11、DHA-1、oqxA和fosA3基因.另外1株ST11型肺炎克雷伯菌携带KPC-2、CTX-M-65、TEM-1和OXA-1基因.5株携带NDM-1基因的肺炎克雷伯菌中,有4株的PFGE带型相同,且都为ST571型,另一株为ST76型,带型与前4株不同.结论 新生儿病房中存在携带NDM-1、SHV-11、DHA-1、oqxA和fosA3基因的ST571型肺炎克雷伯菌引起的医院感染暴发.

肠杆菌科细菌是临床细菌感染性疾病中最重要的致病菌.近年来,广谱抗生素的广泛应用,使肠杆菌科细菌对头孢菌素的耐药性不断上升.产超广谱β-内酰胺酶(extended spectrum beta-1actamases,ESBLs)和/或AmpC酶是肠杆菌科细菌耐药最重要的机制[1,2].临床上产ESBLs和AmpC酶的肠杆菌科细菌流行,增加了治疗的难度,以及患者的住院日和诊疗费用,导致高发病率和高死亡率[3,4].表型和基因型检测都可用于检出ESBLs和AmpC 酶,本研究同时进行ESBLs和AmpC酶表型和基因型检测,为临床治疗及院内感染的防控提供依据.

目的 回顾性分析我院住院患者医院感染分离的铜绿假单胞菌产AmpC酶基因型.方法 细菌鉴定采用VITEK 2 Compact全自动微生物分析仪;产AmpC酶菌株筛选采用头孢西丁纸片扩散法;细菌基因组提取采用细菌基因组提取试剂盒提取细菌DNA;AmpC酶基因型检测采用聚合酶链反应(PCR)和DNA测序分析.结果 经PCR检测有15株铜绿假单胞菌在405 bp处出现阳性条带,并经DNA测序分析证实与基因库DHA-1型同源性为99.0％,属DHA-1型.结论 我院住院患者医院感染铜绿假单胞菌有较高检出率,其产AmpC酶基因型以DHA 1型为主要流行株.

目的 了解医院产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)和头孢菌素(AmpC)酶肺炎克雷伯菌的分布及耐药性,为临床合理使用抗菌药物提供依据.方法 对医院2011年1月-2016年12月临床送检各类标本进行培养,分析产ESBLs与AmpC酶肺炎克雷伯菌的检出率,药敏试验采用K-B扩散法;双纸片增效法检测ESBLs;头孢西丁三维实验法检测AmpC酶;采用法国生物梅里埃公司VITEK-2-compact GN卡进行细菌鉴定.结果 共分离肺炎克雷伯菌2 124株,主要来自下呼吸道及气管抽吸物,占60.64％;六年间共检出952株产酶菌,检出率为44.82％,其中单产ESBLs750株,占78.78％,单产AmpC酶123株,占12.92％,同产ESBLs+ AmpC酶79株,占8.30％;产酶株主要集中在ICU及康复科,检出率分别为56.07％及55.77％;＞60岁年龄组产酶检出率最高,为55.52％,与其他年龄组比较,差异有统计学意义(x 2=174.468,P＜0.01);产酶株与非产酶株对相同抗菌药物的耐药率,存在差异(P＜0.01);产酶株中出现了对碳青霉烯类抗菌药物耐药菌;除外头孢唑林、头孢呋辛、头孢吡肟、左氧氟沙星、环丙沙星、磺胺甲噁唑/甲氧苄啶及米诺环素等7种抗菌药物,单产AmpC酶肺炎克雷伯菌对其余15种抗菌药物的耐药率相比于单产ESBLs要高;除头孢唑林、头孢呋辛及阿莫西林/克拉维酸外,同产ESBLs+ AmpC酶的肺炎克雷伯菌对其余19种抗菌药物的耐药率相比于单产AmpC酶及单产ESBLs更高.结论 产酶的肺炎克雷伯菌耐药严重,临床应合理使用抗菌药物以降低耐药率.