目的:探讨单份非血缘脐血移植(UCBT)治疗成人阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)的可行性及疗效。方法:回顾性分析2014年5月至2019年12月安徽省立医院血液科7例应用单份UCBT治疗成人PNH受者的临床资料。7例受者中6例重度PNH，1例极重度PNH。原发性PNH 4例，PNH-再生障碍性贫血(AA)综合征3例。男性5例，女性2例，中位年龄29岁(20～47岁)，中位体重60 kg(50～71 kg)，诊断至移植中位时间为62.5个月(7.7～171个月)，全部受者均伴输血依赖。预处理方案：清髓性6例，减低强度1例。预防移植物抗宿主病(GVHD)方案均为环孢素A联合短程吗替麦考酚酯，均未使用抗胸腺细胞免疫球蛋白(ATG)。输入脐血有核细胞的中位数为2.4×10 7/kg(1.71～4.28×10 7/kg)，其中输入CD34+细胞中位数为1.58×10 5/kg(0.88～3.02×10 5/kg)。 结果:所有受者均获得髓系及红系植入，中性粒细胞绝对计数≥0.5×10 9/L的中位时间17 d(15～21 d)，网织红细胞计数≥1%的中位时间27 d(22～45 d)。6例受者获得血小板植入，血小板≥20×10 9/L中位时间37 d(25～101 d)，血小板≥50×10 9/L中位时间62 d(27～157 d)。100 d急性GVHD发生率28.6%(95%CI 0～55.3%)，其中2例Ⅱ度急性GVHD，仅1例受者发生局限慢性GVHD。全部受者中位随访时间13.5个月(3～71.4个月)，6例受者存活，1例PNH-AA综合征伴铁过载受者死于消化道出血。2年总存活率为83.3%(95%CI 27.3～97.5%)。 结论:单份UCBT治疗PNH，可获得很好的植入率及存活率，PNH-AA综合征伴铁过载可能是影响患者预后的重要因素之一。

目的:了解替代供者（AD）移植一线治疗儿童再生障碍性贫血（AA）的疗效及安全性。方法:回顾性分析2010年4月1日至2016年12月31日在上海儿童医学中心一线接受AD移植治疗的AA患儿临床资料，统计分析总生存（OS）率、植入成功率、移植物抗宿主病（GVHD）发生率等指标。结果:共纳入109例患者，极重型AA（VSAA）32例，重型AA（SAA）64例，非重型AA（NSAA）伴输血依赖13例，中位年龄6（0.8~18）岁，其中44例患者接受全相合无关供者（MUD）移植，44例接受8-9/10位点不全相合无关供者（MMUD）移植，21例接受不全相合亲缘供者（MMRD）移植，所有患者均接受以外周血干细胞（PBSC）为主的移植，≥3个位点不合的单倍型移植加第三方脐血（UCB）一份。所有患者移植前均未接受过抗胸腺细胞球蛋白（ATG）治疗，并排除活动性感染。106例（97.2%）获造血重建，中性粒细胞中位重建时间为13（9~19）d，血小板中位重建时间为16（10~81）d。死亡13例，5年OS率为88.1%（95% CI 81.1%~91.4%），MUD、MMUD及MMRD三组患者OS率差异无统计学意义（ P=0.361）。总体急性GVHD（aGVHD）及Ⅱ~Ⅳ度aGVHD发生率分别为74.3%和39.4%，总体慢性GVHD（cGVHD）和中度cGVHD发生率分别为30.7%和9.9%，无一例患者发生重度cGVHD。 结论:对于无同胞全相合供者的SAA/VSAA患儿，早期一线接受AD移植可能是一个选择，但需要进一步探索更有效的预防及治疗GVHD的措施。

目的:初步探究自噬核心蛋白Atg101对白色脂肪细胞衰老的影响。方法:构建Atg101敲减的3T3-L1成熟脂肪细胞模型，验证Atg101对自噬相关蛋白LC3和p62蛋白的影响。构建并分析人类皮下脂肪组织的RNA-seq数据库，基于Atg101与其他基因FPKM值的 Pearson相关系数( R2>0.4, P<0.050)预测共表达基因集并进行KEGG和Reactome富集分析。构建年轻小鼠(8周龄)和老龄小鼠(18个月龄)模型，实时定量PCR(RT-qPCR)和Western印迹法检测Atg101在腹股沟皮下脂肪和内脏脂肪中的表达水平。进一步通过RNA-seq、Western印迹和RT-qPCR检测白色脂肪细胞衰老相关分泌表型(senescence-associated secretory phenotype, SASP)、细胞周期及线粒体稳态相关基因的表达差异，分析Atg101敲减对脂肪细胞衰老的影响。 结果:在3T3-L1脂肪细胞敲减Atg101后自噬相关蛋白LC3-Ⅱ显著降低，p62蛋白明显上调，提示细胞自噬受损。KEGG富集分析发现Atg101共表达基因集主要富集于自噬和衰老相关通路；Reactome富集分析发现该基因集与多个细胞周期信号通路相关。RT-qPCR和Western印迹证实Atg101在老龄小鼠皮下脂肪组织中mRNA和蛋白表达水平均下调，内脏脂肪组织蛋白水平也显著降低。最后，白色脂肪细胞模型中Atg101敲减后SASP相关基因表达上调，细胞周期特异性基因表达受限并且细胞周期素依赖性蛋白激酶抑制因子p16、p21表达显著增高，线粒体稳态调节基因表达也受到抑制。结论:Atg101可能通过影响自噬活动调控白色脂肪细胞衰老，从而破坏线粒体稳态。

目的:探索自噬早期阶段在原发性痛风性关节炎（GA）患者PBMCs中的表达及临床意义。方法:收集30例急性期痛风（AG）患者、30例间歇期痛风（IG）患者和50名健康对照组（HC）的外周血、临床资料及实验室检查指标；采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测自噬基因（Beclin1、mTOR、ATG14、ULK1、ATG13、ATG101、ATG17、ATG2、ATG9A、ATG18）mRNA表达水平。计量资料符合正态分布采用 t检验或方差分析，非正态分布用Mann-Whitney检验或Kruskal-Wallis H检验，3组间两两比较采用SNK；变量间的相关关系采用Spearman相关分析。 结果:① Beclin1 mRNA、ATG17 mRNA、ATG9A mRNA在AG组的表达水平低于IG组及健康对照组[（15.08×10 -3）、（21.45×10 -3）和（19.9×10 -3）， H=6.124， P=0.047；（14.88×10 -3）、（21.42×10 -3）和（24.35×10 -3）， H=15.619， P<0.01；（22.64×10 -3）、（36.96×10 -3）和（50.09×10 -3）， H=9.47， P=0.009]，其中Beclin1 mRNA在AG组与IG组差异有统计学意义（ Z=-2.159， P<0.05）；ATG17 mRNA在AG组与IG组、AG组与健康对照组差异有统计学意义（ Z=-3.090，-3.667， P均<0.05）；ATG9A mRNA在AG组与IG组、AG组与健康对照组，差异有统计学意义（ Z=-2.102，-3.667， P均<0.05）。mTOR、ATG14、ULK1、ATG13、ATG101、ATG2、ATG18 mRNA在各组间差异无统计学意义（ H=3.663， P=0.160； H=0.073， P=0.964； H=0.618， P=0.734； H=3.619， P=0.164； H=1.710， P=0.425； H=4.157， P=0.125； H=1.430， P=0.489）。② Spearman相关性分析发现：AG患者ATG2与血小板分布宽度（PDW）、血小板体积呈负相关（ r=-0.429 2， P=0.022 7； r=-0.391 7， P=0.039 3）；ATG13与hs-CRP、ALT、PDW呈负相关（ r=-0.385 6， P=0.038 9； r=-0.382 3， P=0.037 1； r=-0.498 2， P<0.01）。IG患者Beclin1与肾小球滤过率呈正相关（ r=0.561 6， P<0.01），与载脂蛋白（apo）B100、LDL-C、TC呈负相关（ r=-0.594 8， P=0.005 7； r=-0.560 6， P=0.010 1； r=-0.499 6， P=0.024 9）；ATG17和mTOR均与apoB100呈负相关（ r=-0.526 8， P=0.017 0； r=-0.480 8， P=0.031 9）。 结论:自噬早期阶段参与了痛风的发生发展，提示自噬是GA发病机制中的一个重要特征。

目的 分析桥本甲状腺炎(HT)患者尿碘水平的差异,探讨不同碘营养状况下尿碘水平与HT可能存在的关系,为HT患者合理摄碘提供参考.方法 选取入院就诊的HT患者101例为HT组,依据甲状腺功能分为3组:HT合并甲状腺功能亢进组41例;HT合并甲状腺功能正常组25例;HT合并甲状腺功能减退组35例.另外,选取健康体检者30例为对照组.采用化学发光法检测血清促甲状腺激素(TSH)、三碘甲状腺原氨酸(T3)、甲状腺素(T4)、甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)及甲状腺球蛋白抗体(ATG)水平;超声诊断仪检查甲状腺器官的大小及形态结构;砷铈催化分光光度法检测尿碘水平.根据尿碘水平将人群碘营养状况分为碘缺乏(<100μg/L)、碘适宜(100～199μg/L)、碘足量(200～299μg/L)、碘过量(≥300μg/L).采用非参数检验比较HT组与对照组尿碘水平差异,单因素方差分析、t检验比较HT分组与对照组尿碘水平差异及Spearman相关分析不同碘营养状况下尿碘水平与T3、T4、TSH、ATG、TPOAb的相关性.结果 与对照组比较,HT组ATG、TPOAb水平升高(P<0.001),尿碘水平升高(P<0.05),差异有统计学意义;不同甲状腺功能状态下HT分组与对照组尿碘水平比较,仅HT合并甲状腺功能减退组升高(P<0.01),差异有统计学意义;Spearman相关分析显示总纳入对象中碘过量状况下尿碘水平与ATG、TPOAb水平呈正相关(P<0.05),HT患者中碘足量、碘过量状况下尿碘水平与TSH水平呈正相关(P<0.05).结论 HT患者尿碘水平较正常人偏高.居民尿碘水平≥300μg/L时,摄碘易发生HT;HT患者尿碘水平≥200μg/L时,摄碘易发生甲状腺功能减退,需限制碘摄入.

目的 研究汉族人群中自噬相关基因7(Atg7) rs14016 (19 +31C/T)位点的单核苷酸多态性(SNP)与帕金森病(PD)的关系. 方法 采用病例-对照研究,选择2013年1月至2016年7月在浙江大学医学院附属二院建德分院及广东医科大学附属医院神经内科门诊及住院的PD患者123例(病例组)和同期101例健康体检者(对照组),两组对象均为中国汉族人.应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)及对部分标本基因测序的方法检测Atg7基因rs14016位点的SNP,并分析其基因型及等位基因频率在PD患者及健康人群中的分布特点. 结果 病例组TT基因型频率是17.9％ (22/123),C等位基因携带者为82.1％(101/123),对照组分别是5.9％(6/101)和94.1％(95/101),两组比较,基因型频率差异有统计学意义(x2=7.236,P=0.007),OR值为3.01(95％CI:1.27～7.14);病例组T和C等位基因频率分别是41.1％ (101/246)和58.9％ (145/246),对照组分别是31.2％(63/202)和68.8％ (139/202),两组比较差异亦有统计学意义(x2=4.655,P=0.031),OR值为1.32(95％CI:1.02～1.70).Logistic回归分析发现,Atg7基因rs14016位点TT基因型在两组中差异有统计学意义(P=0.012),OR值为3.40(95％CI:1.32～8.80). 结论 Atg7基因rs14016位点TT基因型及T等位基因可能与PD发病相关,增加PD患病风险,值得进一步研究.

目的 鉴定人不育-α-基序结构域和组氨酸/天冬氨酸残基双联体结构域包涵蛋白1 (SAMHD1)基因的核心启动子区域,研究SAMHD1的转录调控机制.方法 从HepG2细胞中提取基因组DNA,PCR扩增SAMHD1基因翻译起始位点上游937、667、553、399 bp片段.将扩增出的4个片段连入pMD19-T载体,双酶切鉴定后将DNA条带切胶回收,再连入pGL3-Basic载体中,双酶切及DNA测序鉴定.将包含有4个片段的荧光素酶表达载体与pRL-TK共转染HepG2细胞,荧光素酶报告基因活性检测并分析4个片段的启动子活性.5'RACE鉴定SAMHD1在HepG2细胞中的转录起始位点.结果 电泳结果显示已经从HepG细胞中提取出基因组DNA.PCR扩增后电泳结果显示已经扩增出937、667、553、399 bp片段.双酶切后电泳结果显示成功将扩增出的4个片段连入pMD19-T载体.双酶切及DNA测序鉴定已成功构建荧光素酶表达载体pGL3-937、pGL3-667、pGL3-553和pGL3-399.荧光素酶报告基因活性检测显示SAMHD1核心启动子区域位于0～-399区域(ATG前一个碱基为-1).5'RACE结果显示SAMHD1在HepG2细胞中转录起始位点位于-101.结论 SAMHD1的核心启动子位于翻译起始位点上游-101～-399区域,为深入研究肝细胞中SAMHD1转录调控机制奠定了基础.

自噬是真核细胞特有的生命现象,它控制着细胞内蛋白质和细胞器的降解,并在机体的生长发育和维持能量平衡中起重要的作用.目前在酵母中已被鉴定的自噬相关基因有40余种.Atg101是一种全新的自噬相关蛋白,近年来,其分子结构及功能逐步被阐明,其在疾病发展中的作用也引起了广泛关注.该综述总结了近年来Atg101在分子生物学和病理生理领域的相关研究进展.

目的:探究自噬相关蛋白101(autophagyrelated 101,ATG101)对米色脂肪细胞增殖、分化和产热过程的影响.方法:将小鼠血管基质细胞(stromal vascular fraction,SVF)向米色脂肪细胞诱导分化,运用实时定量PCR及蛋白质印迹法检测诱导分化过程中(0、2、4、6和8 d)Atg101 mRNA和蛋白表达.使用慢病毒介导的shRNA在分化前敲减Atg101并诱导分化成米色脂肪细胞后,运用实时定量PCR检测成熟脂肪细胞(6 d)标志基因表达,油红O染色观察脂滴形态;同时检测分化过程中(0、2、4和6 d)产热相关基因的表达.结果:ATG101在米色脂肪细胞自然分化过程中表达量逐渐增加;Atg101敲减后,成熟米色脂肪细胞标志基因脂肪酸结合蛋白4(fatty acid binding pro-tein 4,Fabp4),诱导细胞死亡DNA片断化因子 α样效应因子(cell death-inducing DNA fragmentation factor-α-like ef-fector A,Cidea)和葡萄糖转运体4(glucose transporter 4,Glut4)的表达较对照组明显降低(均P<0.05),脂滴生成受损.同时,Atg101的敲减使米色脂肪细胞中产热相关基因PR结构域蛋白16(PR domain-containing 16,Prdm16),Cidea和解偶联蛋白1(uncoupling protein 1,Ucp1)的表达也明显减少(均P<0.05).结论:ATG101参与米色脂肪细胞分化过程;下调ATG101表达影响产热功能发挥.

目的 探究ATG5介导人脐静脉内皮细胞外泌体对小鼠胸主动脉平滑肌细胞增殖的影响.方法 利用0.1％Ⅱ型胶原酶灌注消化法获得原代人脐静脉内皮细胞;利用组织块贴壁法分离原代小鼠胸主动脉平滑肌细胞;利用超速离心法提取内皮细胞外泌体;利用共聚焦高内涵成像分析仪示踪平滑肌细胞摄取内皮细胞外泌体;利用siRNA干扰内皮细胞ATG5蛋白表达;利用高内涵DPC成像模式分析平滑肌细胞增殖能力.结果 成功得到活性好、纯度高的人脐静脉内皮细胞和小鼠胸主动脉平滑肌细胞.超速离心法获得的内皮细胞外泌体经免疫印迹鉴定,呈Hsp70、TSG101、CD9和CD63阳性.高内涵示踪结果显示平滑肌细胞在共培养30min后开始摄取内皮细胞外泌体,共培养4h后,平滑肌细胞摄取的外泌体明显增多.高内涵监测结果显示,与对照组比较,ATG5干扰组内皮细胞分泌的外泌体在浓度为200μg/ml时能够明显抑制平滑肌细胞的增殖.结论 ATG5可通过介导内皮细胞外泌体调控平滑肌细胞增殖.