目的:骨肉瘤是儿童和青少年最常见的骨恶性肿瘤,具有极强的增殖和转移潜能.伴有远处转移的骨肉瘤患者的生存预后极差,且骨肉瘤患者在治疗过程中易出现病灶切除不彻底、化学治疗耐药等难题,目前尚缺乏有效的根治手段.近年来,越来越多的证据表明β-1,4-N-乙酰半乳糖氨基转移酶1(β-1,4-N-acetyl-galactosaminyltransferase 1,B4GALNT1)能够影响多种恶性肿瘤的进展.然而,B4GALNT1在骨肉瘤细胞中的功能却未见报道.本研究拟探讨骨肉瘤组织与正常组织中B4GALNT1的表达以及B4G4LNT1对骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响,以期为骨肉瘤患者的治疗提供新的理论依据和方向.方法:收集在中南大学湘雅二医院行骨肉瘤瘤段切除的16例患者的肿瘤组织及相对应的正常组织样本,骨肉瘤患者的年龄为8～17(中位数12)岁.利用实时反转录聚合酶链反应(real-time reverse transcription PCR,real-time RT-PCR)检测B4GALNT1 mRNA在骨肉瘤组织、相对应的正常组织、3种骨肉瘤细胞系(MG63、Saos-2、U2OS)及人成骨细胞(human fetal osteoblastic,hFOB)中的表达情况;通过细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)及克隆形成实验分析敲减B4GALNT1对骨肉瘤细胞Saos-2及U2OS增殖能力的影响;利用Transwell迁移和侵袭实验分析敲减B4GALNT1对骨肉瘤细胞Saos-2及U2OS迁移和侵袭能力的影响;使用蛋白质印迹法分析敲减B4GALNT1对Saos-2及U2OS细胞上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)及侵袭相关蛋白质表达的影响.结果:Real-time RT-PCR结果表明:与正常组织及hFOB相比,骨肉瘤组织和3种骨肉瘤细胞系中B4GALNT1 mRNA的表达水平较高(均P＜0.01).CCK-8及克隆形成实验结果表明:与对照组相比,敲减B4GALNT1降低了骨肉瘤细胞的增殖速率(均P＜0.05).Transwell迁移和侵袭实验结果表明:与对照组相比,敲减B4GALNT1减少了骨肉瘤细胞的迁移和侵袭细胞数(均P＜0.01).蛋白质印迹结果表明:与对照组相比,敲减B4GALNT1 抑制 了 N-cadherin、Snail、Vimentin 和基质金属蛋白酶 9(matrix metallopreteinase 9,MMP9)的表达(均P＜0.01).结论:B4GALNT1在骨肉瘤组织及细胞系中表达上调;敲减B4GALNT1抑制了骨肉瘤的恶性表型;B4GALNT1可能作为一个癌基因在骨肉瘤细胞增殖和转移中发挥重要作用.

目的:探讨1个2次妊娠均出现胎儿脑积水的家系的遗传学病因。方法:收集2021年3月8日就诊于莆田学院附属医院1名孕妇的流产胎儿组织及其孕妇夫妇的外周血样，对其进行家系全外显子组测序(WES)，对候选变异进行Sanger测序验证。结果:胎儿携带 B3GALNT2基因c.261-2A>G和c.536T>C(p.Leu179Pro)复合杂合变异，分别遗传自父母，经检索相关数据库国内既往未见报道，该变异可导致α-抗肌萎缩相关糖蛋白病引起胎儿脑积水。根据美国医学遗传学与基因组学学会变异相关指南，c.261-2A>G与c.536T>C均评级为可能致病性变异(PVS1+PM2_Supporting；PM3+PM2_Supporting+PP3+PP4)。 结论:B3GALNT2基因存在c.261-2A>G和c.536T>C(p.Leu179Pro)复合杂合变异为该家系胎儿出现α-抗肌萎缩相关糖蛋白病的致病原因，为家系的遗传咨询和再生育指导提供依据。

目的 探讨五指山小型猪近交系不同世代及其 GGTA1/b4GalNT2 基因敲除猪繁育后个体外周血红细胞 aGal表达水平,为开发应用提供科学依据.方法 利用异硫氰酸荧光素(FITC)分离技术,对五指山小型猪近交系不同世代及其 GGTA1/b4GalNT2 基因敲除猪繁育后代外周红细胞 aGal表达水平进行了测定研究.结果 组 1 近交系F27-2826 头小型猪红细胞 aGal免疫荧光反应百分数平均值为 56.17%(16.2%～86.2%);组 2 F248 头小型猪平均值为 65.39%(35.5%～99.2%);组 3 F19-2121 头小型猪平均值为 82.15%(38.8%～89.4%).组 1 与组 3 之间平均值差异有统计学意义(P<0.05);进一步分析发现组 1 与组 2、组 2 与组 3 相比,个体红细胞 aGal免疫荧光反应百分数代间分别下降 3.07%和 4.19%.组 4 中有 8 头 GGTA1/b4GalNT2 基因敲除猪繁殖后代和 1 头已知为 GGTA1/b4GalNT2+hCD46+hCD55+hTBM 五基因修饰纯合子猪的红细胞 aGal免疫荧光反应测定值均为 0.1%,与对照组结果一致.参与测定的 8 头 GGTA1/b4GalNT2 基因敲除猪繁育后代为纯合子个体.同胞兄妹 F27 两头 aGal低表达量为 16.2%和 19.5%,均低于 GGTA1/b4GalNT2 基因敲除杂合子后代猪平均值 31.03%.结论 随近交系推进其个体红细胞 aGal表达量逐步降低;8 头 GGTA1/b4GalNT2 基因敲除猪繁育后代为纯合子个体;近交系 F27 两头为 aGal低表达个体.

目的 探讨B3GALNT2基因突变致先天性肌营养不良的临床特点.方法 收集2019年1—6月河北省儿童医院收治的B3GALNT2基因突变致先天性肌营养不良亚型α-抗肌萎缩相关糖蛋白病(α-dystroglycanopathy,α-DGP)患儿的临床资料,并检索相关文献对其致病特点进行临床分析.结果 共有2例B3GALNT基因突变致α-DGP患儿,均为复合杂合突变.1例等位基因突变位点为c.1068dup T(p.D357_D358delinsX)和c.40G>C(p.G14R),另1例等位基因突变位点为c.261-2A>G(Splicing)和c.979G>A(p.D327N).文献检索到19例B3GALNT2基因突变致α-DGP患者.总结分析其特点:①神经系统均受累,常见临床症状为认知、运动发育障碍(100％),癫痫发作(52.6％),肌张力低(64.3％);②头颅MRI异常可表现为脑室周围白质病变(81.3％),神经元移行障碍(68.8％),脑干和/或小脑发育不良(56.3％),小脑皮层囊肿(50％),重度脑积水(31.25％)等;③肌受累患者可达63.2％,肌酶升高多为300～1740U/L,重症者可更高;④眼受累患者占28.6％,常见症状为视神经萎缩、眼裂畸形,严重者可见青光眼、白内障,甚者失明;⑤推测该基因截短突变且突变位置靠前者症状较重,错义突变往往症状较轻,突变位点c.979G>A(p.D327N)及c.822_823dup(p.I276Lfs*26)可能为热点突变;⑥该基因突变部分症状有自愈倾向.结论 B3GALNT2基因应作为婴幼儿期α-DGP、智力运动发育落后、癫痫及多种脑发育畸形等表现的候选筛查基因之一.

目的 构建靶向抑制β-1,4-N-乙酰氨基半乳糖转移酶1(B4GALNT1)基因表达的shR-NA慢病毒载体,稳定转染至人肾癌细胞株786-O中,观察转染后抑制效率及对786-O细胞增殖活性的影响. 方法 构建特异性靶向抑制B4GALNT1基因表达的shRNA慢病毒载体(shB4GALNT1),通过琼脂糖凝胶电泳和阳性克隆测序鉴定载体的构建;慢病毒包装并稳定转染至肾癌786-O细胞中,通过荧光显微镜观察shRNA转染细胞;实验分为3组:空白对照(NC)组、转染空载体(VC)组和转染shB4GALNT1(KD)组,分别通过Western blot和实时荧光定量聚合酶链反应来证实转染shB4GALNT1在蛋白与mRNA表达水平的抑制效率;通过Celigo全视野细胞扫描分析抑制B4GALNT1表达对786-O细胞增殖活性的影响.结果 琼脂糖凝胶电泳证实阳性克隆为341 bp,阳性克隆测序证实B4GALNT1 shRNA慢病毒表达载体构建成功;绿色荧光蛋白表达证实B4GALNT1 shRNA慢病毒表达载体转染至肾癌786-O细胞中;NC组、VC组和KD组B4GALNT1蛋白的相对表达量分别为1.013±0.057、0.916±0.055、0.340±0.030,KD组与VC组比较差异有统计学意义(P<0.01),B4GALNT1蛋白表达抑制率达63％,NC组与VC组比较差异无统计学意义(P>0.05);NC组、VC组和KD组B4GALNT1 mRNA的相对表达量分别为1.021±0.078、1.002±0.074、0.078±0.027,KD组与VC组比较差异有统计学意义(P<0.01),表达抑制率达92％,NC组与VC组比较差异无统计学意义(P>0.05);转染后第2～5天,抑制B4GALNT1表达可显著降低786-O细胞增殖活性(P<0.01).结论 本实验成功构建RNA干扰靶向抑制B4GALNT1基因的慢病毒表达载体,并稳定转染人肾癌786-O细胞,抑制B4GALNT1表达可显著降低细胞增殖活性.

目的 应用基因芯片技术对类风湿关节炎(RA)DNA甲基化特征进行研究,探讨DNA甲基化在RA发病机制中的作用.方法 随机选取本院门诊确诊为RA的12例女性患者作为RA组,体检的12名健康女性作为对照组,采用Infinium公司的基因芯片对两组受试者进行全基因组CpG岛DNA甲基化检测,筛选差异甲基化位点,采用Gene Ontology(GO)分析和Pathway分析对筛选基因进行功能分类和通路分析.结果 RA组与对照组相比,共有24183个CpG位点甲基化水平发生改变(P<0.05),其中有13672个高甲基化位点,10511个低甲基化位点.RA组显著差异甲基化位点共191个,共对应着115个基因,其中高甲基化基因如IL-26、PCSK6、MICB、NCF4、GALNT9、PHF19、ADAMTS4、ACTN1等,低甲基化基因如CYP2E1、SMAD3、SLC1A1、CD44、AGPAT1、KCNQ1、AHRR等.GO生物学过程分析显示,差异甲基化基因参与生物学过程富集于:细胞因子介导的信号通路、炎症反应、核转录因子-κB(NF-κB)信号通路、免疫反应调节、T细胞活化、透明质酸的代谢等;Pathway分析显示,RA组特异的差异甲基化基因与沙门菌感染、Toll样受体信号通路、炎性肠病、NF-κB信号通路、TRP通道的炎性介质调节、趋化因子信号通路、TNF信号通路、破骨细胞分化、系统性红斑狼疮等信号通路有关.结论 DNA异常甲基化可能参与了RA的发生发展,异常甲基化的基因可能成为RA评估发病、疾病进展和疾病严重程度的生物标记物或预测因子,也有望成为RA治疗的潜在靶点.

目的:探究心肌梗死与不稳定型心绞痛的生物学机制,为后期临床研究提供航向.方法:基于GEO数据库对基因芯片GSE29111进行挖掘,再利用GWAS数据库对差异靶基因进行二次筛选,最后进行生物信息学分析.结果:运用GEO数据库GEO2R鉴定到的差异靶基因,有188个蛋白点表达有统计学差异(P＜0.05);经GWAS数据库基因位点(gene/region)P值设定:-log10P≥3筛选与心肌梗死与不稳定型心绞痛相关的差异靶基因共7个,分别是MACF1、TANC2、PSMF1、CD59、MYO18B、GALNT10、TFPI.运用Metascape基因注释工具,发现这7个差异靶基因主要与蛋白水解的负调节、创伤愈合有关.运用David工具对这7个差异靶基因在线进行GO分析及KEGG分析发现,这些差异靶基因与内肽酶活性的负调控、凝血、肽链内切酶抑制剂活性、肌动蛋白结合和补体系统有关.结论:心肌梗死与不稳定型心绞痛差异靶基因主要与肽链内切酶抑制剂活性及补体系统相关联,主要调控的差异靶基因是CD59、TFPI.

目的 研究一个彝族家系P1Pk血型系统中罕见p表型的分子遗传机制.方法 对34例家系成员样本进行血型血清学鉴定;红细胞稀有血型基因分型采用荧光定量PCR法;同时采用Sanger测序法分析α1,4-半乳糖基转移酶(α-1,4-galactosyltransferase,A4GALT)基因和β1,3-N乙酰半乳糖胺转移酶(β-1,3-N-acetylgalactosyltransferase,B3GALNT1)基因的多态性.结果 先证者及其哥哥均为罕见的p表型,血清中均含有能与所有非p表型红细胞凝集并致其溶血的抗-PP1PK抗体,其他家系成员为正常的P1或P2表型.基因测序发现,34例彝族家系成员中有2例A4GALT基因编码区存在456-457insACACCCC(Bank IT:MG812384)纯合突变,6例456-457insACACCCC杂合突变,7例109A>G和987G>A杂合突变,3例IVS+228C>T杂合突变;所有家系成员B3GALNT1序列均与参考序列一致.456-457insACACCCC突变导致开放阅读框移码,并提前形成终止密码子,产生无效等位基因.结论 在一个彝族家系中发现2例p表型,并首次鉴定A4GALT新等位基因456-457insACACCCC,是p表型的分子遗传基础.

目的:探讨"通督调神"电针对血管性认知障碍(VCI)模型大鼠海马功能活动及其海马全基因组表达谱的影响.方法:将24只健康雄性SD大鼠采用随机数字表法分为假手术组、模型组和电针组,每组8只.模型组、电针组采用双侧颈总动脉结扎法制备血管性认知障碍大鼠模型,假手术组仅分离双侧颈总动脉但不结扎.电针组大鼠取百会、神庭穴进行干预,电针频率1/20 Hz,30 min/次,1次/d,疏密波,共干预28 d,其他2组大鼠采取同等条件抓取,但不进行任何干预.采用Barnes迷宫测试评价大鼠空间学习记忆能力;采用Y迷宫测试评价大鼠空间工作记忆能力;采用小动物7.0 T磁共振静息态脑功能成像分析海马功能活动局部一致性(ReHo)变化;采用Agilent mRNA表达谱芯片分析海马全基因组差异表达情况.结果:①行为学分析结果:与假手术组比较,模型组Barnes迷宫逃避潜伏期明显上升(P<0.05),目标象限持续时间百分比明显下降(P<0.05),Y迷宫交替率明显下降(P<0.05).与模型组比较,电针组Barnes迷宫逃避潜伏期明显下降(P<0.05),目标象限持续时间百分比明显上升(P<0.05),Y迷宫交替率明显增加(P<0.05).②ReHo变化结果:与假手术组比较,模型组双侧前额叶、海马等脑区功能活动局部一致性明显下降(P<0.005);与模型组比较,电针组双侧海马、前额叶及梨状皮层等脑区功能活动局部一致性明显增强(P<0.005).③基因组学结果:模型组与假手术组海马mRNA差异表达>2倍的基因共705个(P<0.05),其中195个基因(Sytl1、Trpv6、Klhl14、Npsr1、Myh3、Galnt3、Nr4a1、Bmp3、Egr2等)表达下调,510个基因(Insl6、Efcab1、Akr1b1、Tagln、Glrb、Akr1c13、Kcne1L、Ubap1等)表达上调.电针组与模型组海马mRNA差异表达>2倍的基因共399个(P<0.05),其中166个基因(Klhl14、Bmp3、Npsr1、Cacna1e等)表达上调,233个基因(Insl6、Ube2k、Cd?kn1c、Camp、Upk1b等)表达下调.结论:"通督调神"电针百会、神庭穴可以改善血管性认知障碍大鼠认知功能,其机制可能与增强海马、前额叶等脑区功能以及调控钙离子、能量代谢相关分子的表达参与调节神经活动等有关.

目的 探讨肌酸激酶(CK)升高水平结合不同基因检测技术,对进行性肌营养不良(PMD)的诊断价值.方法 收集2019-1-1至2021-7-1在我院确诊的55例PMD患儿一般情况、心肌酶、基因检测等资料,分析其CK值和基因检测结果对PMD的诊断价值,并对基因结果进行分析.结果 A组(CK＞8000 U/L)大片段缺失/重复占89.7％,点突变占10.3％;B组(CK:3000～8000 U/L)大片段缺失/重复占86.7％,点突变占13.3％;C组(CK＜3000 U/L)大片段缺失/重复占54.5％,点突变占45.5％,三组比较差异有统计学意义(P＜0.005).并总结了6例未被报道过点突变[c.9564-1G＞C(N/A)、c.2699_2703del(p.K900Tfs*18)、B3GALNT2:c.261-2A＞G(N/A)、c.3257dupA(p.K1086Afs*11)、c.10588C＞T(p.Q3530X)、c.5577delT(p.N1859Kfs*6)],其中有2例为自身新突变.结论 所有PMD患儿的CK均有升高,但有部分患儿的CK升高不显著(CK＜1000U/L).对于疑诊PMD的患儿CK＞3000U/L首选MLPA技术,MLPA检测阴性再选用二代测序检测;对于患儿CK＜3000U/L首选二代测序技术.