目的 探讨一种新型溴结构域和超末端结构域(BET)小分子抑制剂ABBV-744在干预心力衰竭小鼠心脏纤维化中的作用.方法 将24只8～10周龄雄性C57BL/6J小鼠随机分为假手术组、模型组、JQ1干预组和ABBV-744干预组,每组6只.假手术组不建立心力衰竭模型,其余3组小鼠行主动脉缩窄术(TAC)构建心力衰竭模型,通过检测主动脉弓流速确定造模成功.在TAC术后18 d开始2个干预组小鼠分别进行JQ1腹腔注射和ABBV-744灌胃,1次/d,连续给药30 d.给药结束后,采用超声心动图检测小鼠心功能情况;心脏相关指数分析小鼠心脏肥大情况;苏木精-伊红(HE)染色分析小鼠心脏以及肾脏组织炎症细胞浸润情况;天狼星红染色评估小鼠心脏组织纤维化程度;蛋白质印迹法和荧光定量聚合酶链反应验证小鼠心脏组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、α1-Ⅰ型胶原(COL1A1)、α1-Ⅲ型胶原(COL3A1)表达情况;取血浆检测天冬氨酸转氨酶(AST)、总胆红素、血肌酐、血尿素氮指标评估药物对肝肾功能的影响.结果 超声心动图显示与模型组比较,ABBV-744干预组小鼠的左心室射血分数和左心室短轴缩短率均显著升高[(55±4)％比(45±4)％、(28.0±2.6)％比(22.4±2.4)％],左心室收缩末期内径和左心室舒张末期内径均显著降低(P＜0.05或P＜0.01).与模型组比较,ABBV-744干预组小鼠心脏重量与体重比值、心脏重量与胫骨长度比值均明显减小(P＜0.05或P＜0.001).HE染色表明ABBV-744减轻了心脏微血管的炎症细胞浸润;天狼星红染色表明ABBV-744能够减轻TAC后心力衰竭的胶原沉积,减轻心脏纤维化.与模型组比较,ABBV-744干预组α-SMA蛋白和COL1 A1、COL3A1 mRNA表达均明显下调(P＜0.05或P＜0.01).小鼠肾脏HE染色和血浆生化检测提示与JQ1相比,ABBV-744对小鼠肝肾损伤更轻.结论 ABBV-744能有效改善TAC小鼠心力衰竭并减轻心脏纤维化,可能与抑制成纤维细胞激活蛋白相关,与JQ1相比对肝肾功能影响更小.

目的:探讨溴结构域和超末端结构域(BET)抑制剂JQ1联合程序性细胞死亡配体1(PD-L1)的小干扰RNA(siPD-L1)对口腔鳞状细胞癌Scc-25细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法:体外培养人Scc-25细胞株，使用不同浓度JQ1(0、0.2、1、5 μmol/L)处理Scc-25细胞，CCK-8实验检测细胞增殖能力，蛋白免疫印迹法(Western blot)检测PD-L1和叉头框蛋白M1(FoxM1)的表达水平，选择合适浓度的JQ1进行后续实验。将Scc-25细胞分为4组，对照组(不做任何处理)，siPD-L1组(siPD-L1转染Scc-25细胞)，JQ1组(用非特异性siRNA转染Scc-25细胞后加入JQ1)，联合处理组(用siPD-L1转染Scc-25细胞后加入JQ1)。CCK-8实验检测各组Scc-25细胞的增殖能力，Western blot检测各组细胞中cleaved caspase-3、PD-L1和FoxM1的表达水平，流式细胞术检测各组细胞的凋亡率。结果:随着JQ1浓度的增高，Scc-25细胞增殖能力以及PD-L1和FoxM1的表达水平逐渐降低(均 P<0.01)；JQ1浓度为1 μmol/L对Scc-25细胞增殖能力以及PD-L1和FoxM1的表达水平抑制作用较明显，选择1 μmol/L的JQ1进行后续实验。JQ1组、siPD-L1组以及联合处理组Scc-25细胞增殖能力、PD-L1和FoxM1的蛋白表达明显低于对照组(均 P<0.01)，cleaved caspase-3蛋白表达和细胞凋亡率明显高于对照组(均 P<0.01)；联合处理组的作用较siPD-L1组、JQ1组更为显著(均 P<0.01)。 结论:JQ1联合siPD-L1可有效抑制口腔鳞状细胞癌Scc-25细胞增殖，促进细胞凋亡，其机制可能与抑制PD-L1和FoxM1信号通路有关。

目的:探讨雷公藤甲素（TPL）联合BET蛋白抑制剂JQ1对MLL基因重排阳性急性髓系白血病（AML）细胞株MV4-11的增殖抑制及凋亡诱导作用，并探讨其协同作用机制。方法:取对数生长期MV4-11细胞，分别接受不同浓度（100、200、300、400 nmol/L）JQ1单药、4 nmol/L TPL单药或4 nmol/L TPL联合上述不同浓度JQ1处理48 h后，采用CCK-8法检测细胞增殖情况，流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡情况，JC-1法检测线粒体膜电位变化，蛋白质印迹法检测线粒体凋亡通路相关蛋白表达变化。结果:JQ1单药作用MV4-11细胞48 h半数抑制浓度（ IC50）值为（283.9±10.7）nmol/L，而4 nmol/L TPL能增强JQ1对MV4-11细胞的增殖抑制作用，联合用药 IC50值降低至（148.1±2.6）nmol/L，差异有统计学意义（ t=25.31， P=0.029）。FCM检测细胞凋亡结果显示，4 nmol/L TPL联合不同浓度（100、200、300、400 nmol/L）JQ1作用MV4-11细胞48 h后，细胞凋亡率分别为（16.4±1.9）%、（27.5±2.1）%、（32.9±3.6）%、（35.5±3.0）%，与JQ1单药组[（9.6±2.3）%、（12.6±1.4）%、（19.5±3.3）%、（22.7±2.1）%]相比，差异有统计学意义（ F=9.25， P<0.01）。4 nmol/L TPL联合JQ1作用MV4-11细胞12 h后，细胞膜电位水平低于JQ1单药组，差异有统计学意义（ P<0.05）。4 nmol/L TPL联合JQ1作用MV4-11细胞24 h后，抗凋亡蛋白bcl-2、Mcl-1水平下降，而促凋亡蛋白bax水平上升。 结论:TPL可增强BET蛋白抑制剂JQ1对MLL基因重排阳性AML细胞的增殖抑制及凋亡诱导作用，其机制可能与增强线粒体凋亡途径相关。

目的:探讨BET蛋白抑制剂JQ1对MRL/lpr狼疮小鼠外周B细胞分化的影响及其治疗作用.方法:12周龄MRL/lpr小鼠分别腹腔注射JQ150 mg/(kg·d)或10％DMSO;每2周检测24 h尿蛋白定量;6周后检测血清中尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、补体C3、补体C4、抗ds-DNA抗体、ANA及IgG、IgG1、IgG2a、IgM等免疫球蛋白水平;PAS染色观察肾脏组织病理学改变,免疫荧光染色观察IgG和C3免疫复合物沉积情况.利用流式细胞术检测小鼠B细胞各亚群细胞的比例;RT-qPCR检测脾脏prdm1 mRNA表达水平.结果:与DMSO组相比,JQ1治疗组小鼠24 h尿蛋白定量显著减少,血清BUN、Cr水平明显降低,补体C3、C4水平明显升高,抗ds-DNA抗体、ANA以及IgG、IgG1、IgG2a和IgM等免疫球蛋白水平明显降低;此外,JQ1治疗组小鼠肾小球、肾血管的病理损害程度均明显减轻,肾脏IgG和C3免疫复合物沉积显著减少.同时,JQ1治疗组小鼠脾脏、淋巴结、外周血B细胞中浆细胞和记忆B细胞亚群的比例显著下降;JQ1治疗亦显著抑制狼疮小鼠B细胞内调节浆细胞分化的关键转录因子prdm1 mRNA表达.结论:BET蛋白抑制剂JQ1对MRL/lpr狼疮小鼠具有显著的治疗作用,通过抑制Blimp1表达进而调节浆细胞分化可能是其发挥治疗作用的机制之一.BET蛋白可能是SLE治疗的新靶标.

目的 探讨表观遗传学信号分子BET蛋白的抑制剂JQ1对脑缺血再灌注损伤的保护作用和机制.方法 选择成年雄性Wistar大鼠55只,并随机分为对照组、模型组和实验组,利用线栓法制造大鼠脑缺血再灌注损伤模型.实验组在造模的同时给予JQ1干预.24 h后处死所有实验动物,并通过Zea-Longa神经行为学评分、TTC染色、HE染色、ELISA法等方法,检测大鼠的神经功能、脑梗死体积、脑组织病理学改变、变性细胞指数(DCI)以及脑组织炎症因子[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-6(IL-6)]的水平.结果 模型组和实验组大鼠的神经行为学评分较对照组均明显增高(P<0.05),但实验组大鼠的神经行为学评分较模型组明显下降(P<0.05);模型组大鼠的脑梗死体积、DCI明显高于对照组(P<0.05);当给予JQ1干预后,虽然实验组大鼠脑梗死体积、DCI仍然高于对照组(P<0.05),但是较模型组已明显下降(P<0.05);模型组大鼠脑组织的炎症因子IL-6、IL-1β、TNF-α的水平明显高于对照组(P<0.05);当给予JQ1干预后,虽然实验组大鼠脑组织的炎症因子IL-6、IL-1β、TNF-α的水平仍然高于对照组(P<0.05),但较模型组已明显下降(P<0.05).结论 BET蛋白的抑制剂JQ1对大鼠脑缺血再灌注损伤具有保护作用,其机制可能与JQ1具有抑制炎症因子表达的作用有关.

目的:探讨溴结构域(bromodomain and extra-terminal,BET)蛋白抑制剂JQ1对系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)外周血CD4+T细胞中自身免疫相关基因表达的作用.方法:利用磁珠分选获得SLE患者CD4+T细胞,采用流式细胞检测CD4+T细胞纯度.用JQ1 (100 nm/L)处理CD4+T细胞6,24,48 h后收集细胞.采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)检测不同辅助性T细胞亚类特异性基因的mRNA表达.采用ELISA法检测细胞培养上清中细胞因子的蛋白水平.结果:磁珠分选所得CD4+T细胞百分比为97.2％.与对照组相比,JQ1处理组IFNG,IL-17F,IL-21,CXCR5和FOXP3 mRNA表达水平在6,24,48 h均显著降低(P＜0.05),IL-17A mRNA表达在6,24h显著下降(P＜0.01),IL-4 mRN表达在24,48 h显著升高(P＜0.01),TGF-β1 mRNA表达在6,48 h显著升高(P＜0.05).JQ1处理48 h细胞培养上清中IFN-γ,IL-21和IL-17蛋白水平明显下降(P＜0.05),IL-4和TGF-β蛋白水平明显升高(P＜0.05).结论:BET蛋白抑制剂JQ1可纠正SLE患者CD4+T细胞中的免疫调节失衡,促进免疫稳态恢复.

研究探讨B细胞淋巴瘤中组蛋白去乙酰化酶抑制剂(histone deacetylase inhibitor,HDACi)调控CD47表达及相关分子机制.课题组对小鼠B淋巴瘤细胞系A20进行不同剂量和不同时间长度的广谱HDACi(Vorinostat,SAHA)处理后,流式细胞术检测细胞表面CD47分子表达水平.随后用TRIzol法提取经SAHA处理的小鼠和人源B淋巴瘤细胞系样本中总mRNA,检测CD47转录水平.为进一步研究HDACi调控CD47表达的分子机制,课题组采用染色质免疫共沉淀法检测H3K4ac、H3K9ac和H3K27ac与CD47 DNA启动子区域的结合情况.最后在SAHA和BRD4特异性抑制剂JQ1的联合处理下,通过流式细胞术检测淋巴瘤细胞中CD47表达水平变化.研究发现CD47的蛋白质水平及mRNA水平均与SAHA处理时间和作用剂量呈正相关性.而在CD47启动子区域,H3K4、H3K9和H3K27的乙酰化水平在SAHA处理后都有显著提高.此外,SAHA和JQ1的联合使用能够显著抑制SAHA单独作用时对CD47的上调.以上结果说明SAHA通过增强CD47启动子区域所结合组蛋白的乙酰化水平,促进基因的转录表达,上调了CD47的mRNA和蛋白质水平,而抑制BRD4可以逆转SAHA对CD47的上调作用.

目的 探讨BET家族小分子抑制剂JQ1联合索拉非尼对肝癌细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制.方法 采用MTr法检测索拉非尼、JQ1以及JQ1联合索拉非尼作用于人肝癌细胞HepG2和Bel-7402的增殖抑制率,采用流式细胞术检测细胞凋亡率的变化,Western blot方法检测c-MYC、Bcl-2、BIM蛋白表达水平的变化.结果 与索拉非尼、JQ1单独用药比较,JQ1联合索拉非尼作用于肝癌细胞的增殖抑制率增加,凋亡率也增加,JQ1联合索拉非尼作用于肝癌细胞后可以下调c-MYC、Bcl-2蛋白表达水平并且上调BIM蛋白表达水平.结论 一定浓度JQ1能增强索拉非尼对肝癌细胞的增殖抑制及凋亡作用,其作用机制可能与降低c-MYC、Bcl-2表达,上调BIM表达相关.

目的 探讨溴结构域和额外末端结构域(BET)抑制剂(+)-JQ1对脂多糖/D-氨基半乳糖(LPS/D-Gal)诱导的小鼠急性肝衰竭(ALF)的保护作用及其作用机制.方法 将47只C57BL/6小鼠随机分为对照组(n=15)、模型组(n=17)和(+)-JQ1干预组(n=15),采用腹腔注射LPS/D-Gal联合诱导ALF模型,其中在干预组造模前2 h腹腔注射(+)-JQ1.在造模4 h后每组处死5只小鼠,其余小鼠继续喂养至72 h,观察存活率.采用ELISA法检测血清TNF-α,采用RT-qPCR法和Western bloting法分别检测mRNA和蛋白表达.结果 模型组72 h小鼠存活率为16.7％(2/12),(+)-JQ1干预组为60.0％(6/10,P>0.05);ALF组血清ALT水平为(2779.0±200.6)U/L,显著高于对照组[(44.9±2.5)U/L,P<0.05],血清AST水平为(2885.0±143.6)U/L,显著高于对照组[76.0±5.7)U/L,P<0.05],而(+)-JQ1干预组血清ALT和AST水平较模型组显著降低[分别为(948.7±46.3)U/L和(1704.0±42.1)U/L,P<0.05];ALF组肝组织TNF-αmRNA水平为(103.7±23.0),显著高于对照组[(1.2±0.2),P<0.05],IL-6 mRNA水平为(73.4±15.8),显著高于对照组[(1.1±0.1),P<0.05],IL-1B mRNA水平为(13.5±2.7),显著高于对照组[(1.0±0.1),P<0.05],而经(+)-JQ1干预后,三种细胞因子mRNA水平均较模型组显著降低[分别为(12.8±1.2)、(11.7±0.7)和(1.5±0.3),P<0.05];ALF组血清TNF-α水平(631.6±57.5)U/L,显著高于对照组[(2.5±0.5)U/L,P<0.05],而(+)-JQ1干预组血清TNF-α水平为(139.8±8.1)U/L,显著低于ALF组(P<0.05);ALF组肝组织P65和IKB蛋白表达显著增强,而(+)-JQ1干预后显著减弱.结论 (+)-JQ1对ALI小鼠肝脏具有保护作用,可能通过调节NF-KB信号通路下调促炎细胞因子的表达,从而减轻肝组织炎症反应.

目的:探讨溴结构域和超末端结构域(BET)蛋白抑制剂JQ-1对小鼠遥远线索性恐惧消退过程中前扣带回皮质(ACC)区神经结构可塑性的影响.方法:将小鼠分为两组:JQ-1组和溶媒组.对小鼠进行5次声音和足底电击配对训练,建立线索性恐惧条件化模型.恐惧条件化前连续5 d进行JQ-1或溶媒的注射,每天1次,共5次.恐惧条件化后14 d进行消退训练,消退训练后3 h取材,通过高尔基染色方法观察树突分支数和树突棘密度,通过透射电镜技术观察ACC区突触变化.结果:在行为训练阶段,JQ-1组和溶媒组小鼠获得同等程度的恐惧条件化,且在遥远恐惧消退训练阶段无明显行为学差异.遥远恐惧消退训练后3 h取材,高尔基染色结果显示,JQ-1组小鼠ACC区锥体神经元顶树突分支数明显少于溶媒组(P＜0.05);顶树突树突棘密度明显低于溶媒组(P＜0.05).透射电镜方法结果显示,与溶媒组相比,JQ-1组小鼠ACC区突触密度显著降低(P＜0.05).结论:恐惧条件化前注射JQ-1使ACC区参与遥远恐惧消退的神经元结构可塑性降低.