目的:应用网络药理学分析方法，从整体水平观察牛黄－靶点－角膜炎的复杂网络关系，探讨牛黄治疗角膜炎的分子作用机制。方法:首先通过DisGeNET在线数据库收集角膜炎相关的基因，构建角膜炎相关蛋白质的互作网络，然后经中药系统药理学分析(TCMSP)平台、中国科学院化学数据库查询，结合文献报道，收集牛黄中分离鉴定的组成成分，导出各成分SMILES结构式信息，利用在线软件SwissTargetPrediction预测作用靶点，进而构建牛黄活性成分－预测靶点网络图，最后将角膜炎相关蛋白质的互作网络与牛黄活性成分－预测靶点网络进行合并，得到牛黄活性成分－潜在靶点网络，系统分析牛黄治疗角膜炎的潜在作用靶点及其在信号通路中的作用，构建成分－靶点－通路网络图，分析牛黄治疗角膜炎的作用机制。结果:共搜索到39个已分离鉴定的牛黄组成成分，角膜炎相关靶点65个，牛黄治疗角膜炎的潜在靶点28个；28个潜在靶点中包含7个直接作用靶点，即肿瘤坏死因子、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-1、Toll样受体9、C-X-C基序趋化因子配体8、白细胞介素(IL)6、丝裂原活化蛋白激酶8和神经营养受体酪氨酸激酶1。28个潜在靶点可被注释入12项生物过程、18项细胞组分、13个分子功能，经京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析，共纳入10条KEGG信号通路，主要涉及人巨细胞病毒感染、阿米巴病、抗叶酸耐受性、PI3K-Akt信号通路、类风湿性关节炎、凋亡、细胞因子－细胞因子受体相互作用、疟疾、非酒精性脂肪肝、IL-17信号通路。结论:牛黄可能通过抗炎、抗菌、抗病毒、免疫调节和炎症调控等作用发挥对角膜炎的辅助治疗作用。

目的:研究不同剂量X射线照射对肝癌细胞免疫微环境及cGAS-STING信号通路的影响。方法:C57BL/C小鼠右侧腋部皮下注射Hepa 1－6肝癌细胞，建立皮下成瘤肝癌模型，按顺序随机分为0、4、8、12 Gy照射组，每组10只，监测小鼠体重和肿瘤体积。照射后28 d收集标本，采用ELISA法和流式细胞术，比较各组肿瘤组织内巨噬细胞肿瘤坏死因子α(TNF-α)、干扰素γ(IFN-γ)、白介素6(IL-6)、趋化因子配体5(CCL5)、IL-10、IL-13、转化生长因子β(TGF-β)、IL-4和巨噬细胞M1、M2表型比例(M1/M2)的变化。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)和免疫印迹实验检测肝癌细胞cGAS-STING信号通路相关基因与蛋白表达情况。结果:随着照射剂量的增加，肿瘤体积明显减小( F＝8.42， P<0.05)，细胞坏死比例增加( F＝3.89， P<0.05)，除IL-4之外的巨噬细胞相关细胞因子含量增加( F＝6.32～15.50， P<0.05)，肝癌肿瘤免疫微环境中的M1、M2型巨噬细胞的比例升高( F＝5.46、5.14， P<0.05)。肝癌细胞内的cGAS-STING信号通路基因表达与蛋白表达水平升高(mRNA： F＝6.35、16.10， P<0.05；蛋白： F＝71.31、37.15， P<0.05)。 结论:X射线照射可激活肝癌细胞的cGAS-STING信号通路，促使肿瘤免疫微环境重塑。

目的:分析重型再生障碍性贫血（SAA）患者C-X-C趋化因子受体5（CXCR5） +CD8 + T细胞比例和血浆C-X-C基序趋化因子13（CXCL13）的表达水平，及其与血液学指标的相关性。 方法:回顾性分析2018年1月至2021年9月天津医科大学总医院35例SAA患者的临床资料，根据患者是否接受过药物治疗，将患者分为2组：（1）初治SAA组：18例，患者未接受过药物治疗；其中男9例，女9例，年龄51（18~76）岁；（2）缓解期SAA组：17例，指经抗胸腺细胞球蛋白（ATG）联合环孢素A（CsA）免疫抑制治疗后，脱离成分血输注的患者；其中男7例，女10例，年龄46（16~70）岁。另外选取20名健康对照者，其中男8名，女12名，年龄45（15~72）岁。收集SAA患者外周血及骨髓标本，同时收集健康对照者外周血标本。采用流式细胞术检测外周血及骨髓标本中CXCR5 +CD8 + T细胞比例，采用酶联免疫吸附试验检测血浆中CXCL13表达水平。CXCR5 +CD8 + T细胞比例与CXCL13表达水平的相关性以及二者与血液学指标的相关性采用Spearman相关性分析。 结果:初治SAA组骨髓CXCR5 +CD8 + T细胞比例为（4.9±2.9）%，高于缓解期SAA组的（2.7±1.5）%（ t=2.34， P=0.027）。初治SAA组、缓解期SAA组和健康对照组外周血CXCR5 +CD8 + T细胞比例分别为（8.4±4.2）%、（3.8±2.3）%、（2.6±2.0）%，初治SAA组外周血CXCR5 +CD8 + T细胞比例高于缓解期SAA组和健康对照组（均 P<0.05）。初治SAA组血浆CXCL13表达水平为（97.2±46.8）ng/L，高于缓解期SAA组的（54.9±20.9）ng/L和健康对照组的（47.6±17.3）ng/L（均 P<0.05）。SAA患者外周血CXCR5 +CD8 + T细胞比例与CXCL13表达水平呈正相关（ r=0.545， P<0.001）。SAA患者外周血CXCR5 +CD8 + T细胞比例与白细胞、血小板、中性粒细胞百分比、中性粒细胞绝对值、网织红细胞百分比、网织红细胞绝对值、骨髓粒系百分比、骨髓红系百分比、骨髓巨核细胞数量均呈负相关（ r=-0.556、-0.392、-0.617、-0.615、-0.395、-0.543、-0.432、-0.484、-0.523，均 P<0.05），与外周血淋巴细胞百分比和骨髓淋系百分比均呈正相关（ r=0.593、0.556，均 P<0.05）。SAA患者外周血中CXCL13表达水平与白细胞、中性粒细胞绝对值、网织红细胞百分比、网织红细胞绝对值、骨髓红系百分比呈负相关（ r=-0.447、-0.446、-0.498、-0.407、-0.456，均 P<0.05），与骨髓淋系百分比呈正相关（ r=0.384， P<0.05）。 结论:SAA患者CXCR5?CD8? T细胞比例及血浆CXCL13表达水平增高。外周血CXCR5 +CD8 + T细胞比例与CXCL13表达水平呈正相关，二者均与多项血液学指标具有相关性，可能在SAA免疫发病机制中具有重要作用。

目的:研究及分析动脉粥样硬化患者外周血单核细胞差异表达基因，筛选动脉粥样硬化潜在的分子标志物。方法:通过GEO数据库获取GSE23746和GSE9820基因芯片数据集。GSE23746包含了76例就诊于华盛顿大学附属医院的颈动脉粥样硬化患者及19例对照者的单核细胞样本。GSE9820包含了18例就诊于荷兰阿姆斯特丹自由大学医学中心的重度病变的冠心病患者及13例对照者的单核细胞样本。分别筛选颈动脉粥样硬化患者及冠状动脉粥样硬化患者相对于对照组的差异表达基因，并确定两个数据集的共同差异表达基因。然后对差异表达基因进行基因本体（GO）及京都基因与基因组百科全书（KEGG）信号通路富集分析。再对差异表达基因进行蛋白相互作用网络（PPI）分析，并选出关键基因。结果:在颈动脉粥样硬化和冠状动脉粥样硬化患者的外周血单核细胞中分别筛选出16个和153个下调的差异表达基因。颈动脉粥样硬化的差异表达基因主要参与炎症反应、中性粒细胞趋化、免疫应答等生物过程；富集到的KEGG通路包括Toll样受体信号通路、NF-κB信号通路、NOD样受体信号通路。冠状动脉粥样硬化的差异表达基因主要参与的生物过程包括核小体装配、凝血、基因表达的调控；富集到的KEGG通路包括系统性红斑狼疮以及细胞因子趋化通路。通过构建PPI网络，在颈动脉粥样硬化患者中识别出5个枢纽基因TNF、IL1B、趋化因子（C-X-C基序）配体8（CXCL8）、趋化因子（C-C基序）配体4（CCL4）、B细胞κ轻肽基因增强子核因子抑制因子（NFKBIA），在冠状动脉粥样硬化患者中识别出5个枢纽基因（组蛋白HIST1H2AC、HIST1H2BJ、HIST1H2BH、HIST2H2AC、HIST2H2BE），这些基因主要参与炎症反应及炎症信号分子的转录和表达。同时还筛选出两个数据集的共同差异表达基因早期生长反应基因1（EGR1）和趋化性细胞因子配体CCL3样蛋白1（CCL3L1）。结论:基于GEO数据库的生物信息学分析，动脉粥样硬化患者外周血单核细胞的炎症信号被抑制；共同差异表达基因EGR1和CCL3L1可作为潜在的生物标志物用于动脉粥样硬化的筛查。这为动脉粥样硬化的机制研究和临床诊疗提供新的思路。

多发性硬化(multiple sclerosis,MS)是一种中枢神经系统自身免疫性疾病,其病理变化主要包括淋巴细胞浸润、胶质细胞活化、髓鞘脱失和神经退行变等.随着MS进展,外周浸润的免疫细胞通过释放C-X-C基序趋化因子配体(CXCL)13、CXCL12和肿瘤坏死因子α(TNF-α)等,诱导淋巴细胞集聚在脑脊膜或其覆盖的脑脊髓实质中,形成三级淋巴结构(TLS).TLS可不依赖外周免疫系统发生强烈的免疫应答,产生致病性淋巴细胞,并持续活化其周围的小胶质细胞和星形胶质细胞,通过释放促炎性细胞因子和趋化因子,导致神经炎症加剧并导致MS症状持续和加重,甚至产生不可逆性的神经损伤,这些均与MS的慢性进展密切相关.我们就TLS在不同类型MS中的发生、分布以及组织结构等方面的研究进展进行综述,为慢性进展期MS的治疗提供新思路.

[目的]评估益气活血化浊法治疗Wilson病(也称肝豆状核变性,Wilson's disease,WD)肝纤维化的临床效果.[方法]采用回顾性研究方法,根据治疗方法的不同,将52例气虚血瘀型WD肝纤维化患者分为对照组24例和治疗组28例.对照组采用西药常规驱铜治疗,治疗组在对照组的基础上联合益气活血化浊法中药汤剂治疗,共治疗4周.观察2组患者治疗前后中医证候积分、统一肝豆状核变性评分量表(UWDRS)肝脏症状评分、血清肝纤维化指标[Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、透明质酸(HA)、Ⅳ型胶原(CⅣ)、层粘连蛋白(LN)]和CXC基序趋化因子配体10(CXCL10)水平以及基于声脉冲辐射力成像技术(ARFI)的肝脏超声点剪波弹性成像(pSWE)值的变化情况,并评价2组患者的临床疗效.[结果](1)疗效方面:治疗4周后,治疗组的总有效率为85.71%(24/28),对照组为54.17%(13/24),组间比较(χ2检验),治疗组的疗效明显优于对照组(P＜0.05).(2)中医证候积分方面:治疗后,2组患者的中医证候积分均较治疗前降低(P＜0.01),且治疗组对中医证候积分的降低幅度明显优于对照组(P＜0.05).(3)肝脏症状评分方面:治疗后,2组患者的UWDRS肝脏症状评分均较治疗前降低(P＜0.01),但治疗后组间比较,差异无统计学意义(P＞0.05).(4)肝纤维化指标方面:治疗后,治疗组的血清HA、LN、CⅣ、PCⅢ水平均较治疗前降低(P＜0.01),而对照组仅血清LN、PCⅢ水平较治疗前降低(P＜0.05);组间比较,治疗组对血清HA、LN、PCⅢ水平的降低幅度均明显优于对照组(P＜0.05或P＜0.01),而对血清CⅣ水平的降低幅度有优于对照组趋势,但差异无统计学意义(P＞0.05).(5)趋化因子方面:治疗后,治疗组的血清CXCL10水平较治疗前明显降低(P＜0.01),而对照组较治疗前有降低趋势,但差异无统计意义(P＞0.05);组间比较,治疗组对血清CXCL10水平的降低幅度明显优于对照组(P＜0.05).(6)影像学方面:治疗后,2组患者的肝脏超声pSWE值均较治疗前降低(P＜0.01),且治疗组对肝脏超声pSWE值的降低幅度明显优于对照组(P＜0.01).[结论]益气活血化浊法可以有效降低WD患者的中医证候积分,改善UWDRS肝脏症状评分,下调肝纤维化指标和血清CXCL10表达水平,降低肝脏pSWE值,提高临床疗效.

目的 基于机器学习筛选类风湿关节炎(RA)的诊断标志基因,并分析可能的免疫浸润机制,为RA的临床治疗提供参考.方法 从基因表达综合(GEO)数据库下载 RA 基因表达谱芯片数据集,将GSE55235 和GSE77298 作为联合芯片训练集,GSE55457 作为独立验证数据集.使用R软件进行差异表达基因(DEGs)的筛选,并对这些DEGs进行基因本体论(GO)富集分析及京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析.进一步应用三种机器学习算法筛选诊断基因,并进行外部验证和受试者工作特征(ROC)曲线分析.通过xCell算法分析免疫细胞在RA中的浸润情况.结果 筛选出RA的DEGs共 704 个.富集分析发现这些DEGs主要涉及白细胞介导的免疫、免疫应答的激活、白细胞迁移等相关免疫功能,以及趋化因子信号通路、利什曼病、类风湿关节炎等相关炎症通路.通过机器学习筛选出4 个诊断基因,包括趋化因子CXC配体13(CXCL13)、富含亮氨酸重复序列结构域15(LRRC15)、多配体蛋白聚糖-1(SDC-1)和核酸结合蛋白3(YBX3).免疫浸润分析结果显示,在RA中B细胞、CD4+T细胞、树突状细胞和单核细胞的水平显著上调(P＜0.05).结论 RA的发生发展是多基因、多通路共同参与的结果,CXCL13、LRRC15、SDC-1 和YBX3 可能是诊断RA的潜在生物标志物.B细胞、CD4+T细胞、树突状细胞和单核细胞可能在RA的发生中具有重要意义.

目的 分析巴西日圆线虫虫体蛋白体外诱导人单核细胞白血病THP-1细胞来源巨噬细胞的极化方向,探索机体对巴西日圆线虫感染的免疫应答机制.方法 建立并维持巴西日圆线虫培养的实验室循环,无菌条件下收集L3和L5虫体,分别制备虫体蛋白;建立THP-1细胞体外培养体系,经500 ng/mL佛波酯(PMA)刺激培养后呈贴壁状态的M0型细胞分别采用500 ng/mL脂多糖(LPS)+ 100 ng/mL γ-干扰素(IFN-γ)、白细胞介素4(IL-4)+IL-13(浓度均为100 ng/mL)、L3及L5虫体蛋白(浓度均为5 mg/mL)进行刺激,同时设不加任何刺激的阴性对照组.通过显微镜镜检观察刺激后细胞形态、实时荧光定量PCR(qPCR)检测M1/M2型巨噬细胞特异性基因mRNA表达水平、流式细胞术检测巨噬细胞表面标志物及酶联免疫吸附试验(ELISA)检测M1/M2型巨噬细胞分泌的细胞因子含量,观察巴西日圆线虫虫体蛋白体外诱导THP-1来源巨噬细胞的极化方向.结果 THP-1细胞经PMA刺激培养呈贴壁的M0型细胞后,经LPS+ IFN-γ刺激培养后呈特征性M1型极化;经IL-4+ IL-13刺激培养后呈特征性M2型极化;经L3和L5蛋白刺激培养后均呈特征性M2型极化.阴性对照组、LPS+ IFN-γ刺激组、IL-4+ IL-13刺激组、L3蛋白刺激组、L5蛋白刺激组间M1型巨噬细胞比例差异有统计学意义(x2=3 721.00,P＜ 0.001),其中LPS+ IFN-γ刺激组M1型巨噬细胞比例最高;各组间M2型巨噬细胞比例差异有统计学意义(x2=105.43,P＜0.001).各组间C-C基序趋化因子配体2(CCL2)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-12b、过氧化物酶体增殖物激活受体γ (PPARγ)、IL-10、甘露糖受体C型1(Mrc1)基因mRNA表达水平差异均有统计学意义(F=191.95、129.95、82.89、11.30、9.51、12.35,P均＜0.001),各组间CD86、CD206阳性率差异均有统计学意义(x2=24 004.33、832.50,P均＜0.001).LPS+ IFN-γ刺激组IL-1β、TNF-α表达水平均显著高于IL-4+ IL-13刺激组、L3蛋白刺激组及L5蛋白刺激组(P均＜ 0.001);IL-4+ IL-13刺激组、L3蛋白刺激组和L5蛋白刺激组TGF-β1、IL-10表达水平均显著高于阴性对照组和LPS+ IFN-γ刺激组(P均＜0.05).结论 巴西日圆线虫L3和L5虫体蛋白体外均可诱导THP-1来源巨噬细胞向M2型极化.

目的 研究血管紧张素转换酶2(ACE2)在臭氧暴露致小鼠肺部炎症及气道重塑中的作用.方法 16只野生型(WT)C57BL/6J小鼠和16只ACE2敲除(KO)小鼠分别暴露于空气和臭氧(0.8 ppm)中,每天暴露3 h,连续暴露5 d.分别设置Air WT组,Air KO组,Ozone WT组和Ozone KO组.Masson染色观察小鼠肺组织胶原沉积情况,HE染色观察小鼠肺部病理学改变,并进行评分;收集小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF),并进行细胞计数;分别采用BCA法和酶联免疫吸附法(ELISA)测定BALF总蛋白和细胞因子浓度;荧光定量PCR检测肺组织中气道重塑相关指标的mRNA表达;小鼠的气道阻力采用小动物呼吸机测量(乙酰甲胆碱激发).结果 臭氧暴露ACE2 KO小鼠肺组织炎症病理学变化总分显著高于臭氧暴露WT小鼠(P<0.05).Masson染色结果显示,臭氧暴露小鼠肺组织支气管和肺泡周围有大量的胶原沉积,臭氧暴露ACE2 KO小鼠肺组织的支气管和肺泡的胶原沉积阳性区域面积为(19.62±3.16)％、(21.63±3.78)％,高于臭氧暴露WT小鼠肺组织的(6.49±1.34)％、(4.44±0.99)％,两者差异具有统计学意义(P<0.05).臭氧暴露ACE2 KO小鼠BALF中总细胞数与总蛋白含量均高于臭氧暴露WT小鼠,差异无统计学意义(P>0.05).臭氧暴露ACE2 KO小鼠BALF中IL-6、IL-1β、TNF-α、趋化因子(C-X-C基序)配体1(CXCL1/KC)和单核细胞趋化蛋白(MCP-1)水平均高于臭氧暴露WT小鼠,其中IL-1β水平的变化差异具有统计学意义(P<0.05).臭氧暴露ACE2 KO小鼠的肺组织中的基质金属蛋白酶9(MMP-9)、MMP-13、金属蛋白酶组织抑制剂(TIMP4)、Ⅰ型胶原α1(COL1A1)、TGF-β的mRNA水平均明显高于WT组小鼠,两组的MMP-9、TIMP4、COL1A1、TGF-β的mRNA水平差异具有统计学意义(P<0.01).两组小鼠在0、10、25、100 mg/mL的乙酰甲胆碱浓度下的气道阻力的差异无统计学意义(P>0.05).结论 ACE2参与臭氧暴露导致的小鼠肺部炎症及气道重塑.