目的:探讨长链非编码RNA（lncRNA） DIO3OS对氯胺酮诱导的小鼠海马神经元细胞毒性的影响及其作用机制。方法:（1）分离并培养原代小鼠海马神经元，应用CCK-8法检测不同浓度（0、25、50、100、200 μmol/L）氯胺酮对细胞活力的影响，qPCR法检测 DIO3OS mRNA的表达。（2）将海马神经元分为对照组、氯胺酮组（50 μmol/L氯胺酮培养24 h）、氯胺酮+pc组（转染pcDNA3.1质粒48 h后加50 μmol/L氯胺酮培养24 h）、氯胺酮+DIO3OS组（转染pcDNA3.1-DIO3OS质粒48 h后加50 μmol/L氯胺酮培养24 h），应用CCK-8法检测各组细胞活力，乳酸脱氢酶（LDH）细胞毒性检测试剂盒检测LDH释放量，流式细胞术检测细胞凋亡情况，qPCR法检测 DIO3OS、脑源性神经营养因子（ BDNF） mRNA的表达，Western blotting实验检测多聚嘧啶区结合蛋白1（PTBP1）、BDNF蛋白的表达。（3）提取正常海马神经元的总蛋白，应用RNA沉降实验检测 DIO3OS mRNA及 BDNF mRNA与PTBP1蛋白的结合能力。（4）将海马神经元分为氯胺酮+DIO3OS+si-NC组（同时转染pcDNA3.1-DIO3OS和si-NC质粒48 h后加50 μmol/L氯胺酮培养24 h）、氯胺酮+DIO3OS+si-PTBP1组（同时转染pcDNA3.1-DIO3OS和si-PTBP1质粒48 h后加50 μmol/L氯胺酮培养24 h），应用qPCR法检测DIO3OS、 BDNF mRNA的表达，Western blotting实验检测PTBP1、BDNF蛋白的表达。（5）将海马神经元分为氯胺酮组（50 μmol/L氯胺酮培养24 h）、氯胺酮+si-DIO3OS组（转染si-DIO3OS质粒48 h后加50 μmol/L氯胺酮培养24 h）、氯胺酮+si-PTBP1组（转染si-PTBP1质粒48 h后加50 μmol/L氯胺酮培养24 h）、氯胺酮+si-DIO3OS+si-PTBP1组（同时转染si-DIO3OS和si-PTBP1质粒48 h后加50 μmol/L氯胺酮培养24 h），应用qPCR法检测 DIO3OS、 BDNF mRNA的表达，Western blotting实验检测BDNF蛋白的表达。（6）将海马神经元分为氯胺酮+DIO3OS+si-NC组（同时转染pcDNA3.1-DIO3OS和si-NC质粒48 h后加50 μmol/L氯胺酮培养24 h）、氯胺酮+DIO3OS+si-BDNF组（同时转染pcDNA3.1-DIO3OS和si-BDNF质粒48 h后加50 μmol/L氯胺酮培养24 h），应用CCK-8法检测细胞活力，LDH细胞毒性检测试剂盒检测LDH释放量，流式细胞术检测细胞凋亡情况。 结果:（1）25、50、100、200 μmol/L氯胺酮组海马神经元细胞活力、 DIO3OS mRNA表达均较0 μmol/L氯胺酮组明显降低，差异均有统计学意义（ P<0.05）。（2）与对照组相比，氯胺酮组海马神经元中 DIO3OS mRNA表达、细胞活力明显降低，LDH释放量明显增加，凋亡率明显增加，BDNF mRNA和蛋白表达明显降低，PTBP1蛋白表达明显降低，差异均有统计学意义（ P<0.05）；与氯胺酮+pc组相比，氯胺酮+DIO3OS组海马神经元中 DIO3OS mRNA表达、细胞活力明显增加，LDH释放量明显降低，凋亡率明显降低，BDNF mRNA和蛋白表达明显增加，差异均有统计学意义（ P<0.05）。（3）RNA沉降实验显示生物素化标记的DIO3OS、BDNF均可吸附PTBP1蛋白，但生物素化标记的DIO3OS、BDNF反义链均不能吸附PTBP1蛋白。（4）与氯胺酮+DIO3OS+si-NC组相比，氯胺酮+DIO3OS+si-PTBP1组海马神经元中BDNF mRNA和蛋白表达均明显降低，PTBP1蛋白表达明显降低，差异均有统计学意义（ P<0.05）；2组间 DIO3OS mRNA表达的差异无统计学意义（ P>0.05）。（5）与氯胺酮组相比，氯胺酮+si-DIO3OS组、氯胺酮+si-DIO3OS+si-PTBP1组海马神经元中 DIO3OS mRNA表达均明显降低，差异均有统计学意义（ P<0.05）；与氯胺酮组相比，氯胺酮+si-DIO3OS组、氯胺酮+si-PTBP1组海马神经元中BDNF mRNA和蛋白表达均明显降低，差异均有统计学意义（ P<0.05）；与氯胺酮+si-DIO3OS组、氯胺酮+si-PTBP1组相比，氯胺酮+si-DIO3OS+si-PTBP1组海马神经元中BDNF mRNA和蛋白表达均明显增加，差异均有统计学意义（ P<0.05）。（6）与氯胺酮+DIO3OS+si-NC组相比，氯胺酮+DIO3OS+si-BDNF组海马神经元的细胞活力明显降低，LDH释放量明显增加，凋亡率明显增加，差异均有统计学意义（ P<0.05）。 结论:LncRNA DIO3OS在氯胺酮诱导的原代小鼠海马神经元中表达降低，而过表达DIO3OS可通过结合PTBP1调控BDNF的表达来缓解氯胺酮诱导的神经元细胞毒性。

目的 探讨骨碎补(rhizoma drynariae,Rhd)对骨髓腔内脂肪异常积累引起的脂毒性介导成骨细胞焦亡的影响及其机制.方法 体内构建卵巢摘除(ovariectomy,OVX)骨质疏松小鼠模型,用Rhd进行灌胃,给药 8 周后称重,取股骨组织和血清.HE染色观察髓腔内脂肪堆积状态.体外构建成脂-成骨细胞共培养系统,茜素红S(alizarin red S,ARS)染色观察钙化结节的数量,碱性磷酸酶(alkaline phosphatease,ALP)染色检测碱性磷酸酶活性水平,乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)检测和Hoechst33342/PI染色检测共培养下成骨细胞(osteoblasts,OBs)焦亡水平,酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测细胞培养上清液中白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和白细胞介素-18(interleukin-18,IL-18)的释放量,Western blot检测成骨能力相关蛋白Runt相关转录因子 2(runt-related transcription factor 2,RUNX2)、骨形态发生蛋白 2(bone morphogenetic protein,BMP2)和 1 型胶原蛋白(collagen-1,COL-1).选择NLRP3 特异性抑制剂MCC950 作为阳性对照检测焦亡相关蛋白NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白 3(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3,NLRP3)、半胱天冬酶-1(cysteinyl aspartate specific proteinase-1,CASP-1)、效应蛋白消皮素D(gasdermin D,GSDMD)、IL-1β和IL-18 的表达.结果 OVX小鼠髓腔内发生骨质流失伴大量脂肪堆积,Rhd灌胃可以有效缓解这一趋势.在成脂-成骨共培养系统中,共培养环境抑制了OBs活性和OBs中ALP 活性及矿化结节,抑制了RUNX2、BMP2、COL-1 蛋白表达,并且诱导焦亡发生,提高了LDH释放量和PI染色细胞阳性率,以及上调NLRP3、CASP-1、GSDMD、IL-1β和IL-18 蛋白表达水平.而这一趋势在Rhd干预后得到逆转.结论 大量脂肪堆积引起的脂毒性可以抑制OBs活性并通过激活NLRP3 炎症小体诱导OBs焦亡,而Rhd可能通过抑制NLRP3 炎症小体的激活以抑制OBs焦亡和炎性反应,从而起到抗骨质疏松的作用.

微塑料因在土壤环境中广泛存在及其潜在的生态风险而受到越来越多的关注.微塑料的赋存会改变土壤理化性质,并对土壤微生物群落及其驱动的生物地球化学过程产生影响,而相关研究尚处于起步阶段.可生物降解塑料作为传统塑料的替代品,越来越多地应用于农业活动,并释放到土壤中.然而,可生物降解微塑料对土壤微生物特性产生影响的研究鲜有报道.基于此,本试验以我国三江平原水稻田土壤为研究对象,选取了 2种常见的微塑料为试验材料,分别为传统型微塑料聚丙烯(Polypropylene,PP)和可降解微塑料聚乳酸(Polylactic acid,PLA),进行了为期41d的微宇宙培养实验,旨在分析不同浓度与类型的微塑料对土壤可溶性有机碳(Dissolved Organic Carbon,DOC)含量及官能团特征、温室气体排放以及微生物群落结构的差异性影响.结果表明,传统型微塑料PP与可降解微塑料PLA添加均对土壤理化性质与微生物群落产生显著影响.其中,微塑料添加大体上增加了土壤DOC含量,PLA的促进作用较为明显,且增加含量与微塑料添加量呈正相关;PP和PLA均影响土壤DOC分子结构,削弱了土壤团聚化程度并促进了大分子量DOC化合物的生成;微塑料的添加促进土壤CH4排放,而有效抑制了土壤CO2排放;微塑料显著改变了土壤细菌和真菌群落的丰富度与多样性.相关分析结果表明,土壤CO2累计排放量与芳香族化合物结构及疏水性等官能团特征、变形菌门(Proteobacteria)与放线菌门(Actinobacteria)均呈显著正相关关系.以上结果表明,微塑料添加改变了土壤DOC含量及官能团特征与微生物环境,进而影响土壤温室气体排放.本研究为今后微塑料对土壤地球化学和微生物特性的影响研究提供了科学的思路,同时也有助于评估微塑料对土壤生态系统的生态风险.

目的 制备血小板膜仿生纳米靶向探针(PLT-RAP@NPs),探讨其在体外的免疫逃逸、靶向和黏附能力,以及联合超声靶向微泡释放技术(UTMD)后的载药释放情况.方法 采用单乳化-溶剂挥发法合成纳米探针RAP@NPs,梯度离心-反复冻融法提取血小板膜囊泡,超声震荡法制备PLT-RAP@NPs,检测其粒径、表面电位及稳定性,观察其微观形态,计算其包封率和载药率,确定雷帕霉素(RAP)负载的最佳方案.DiI荧光染料分别标记聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA,DiI@PLGA组)和PLT@PLGA(PLT-DiI@PLGA组),用于模拟RAP@NPs、PLT-RAP@NPs进行体外寻靶实验的荧光强度检测;将其分别与巨噬细胞、泡沫细胞和内皮细胞共孵育2h,观察DiI@PLGA组与PLT-DiI@PLGA组橙红色荧光强度,分析各细胞对DiI@PLGA和PLT-DiI@PLGA的吞噬、摄取和黏附能力.细胞增殖-毒性实验观察不同浓度RAP(3.00 μg/ml、6.25 μg/ml、12.50 μg/ml、25.00 μg/ml、50.00 μg/ml、100.00 μg/ml)的游离RAP、RAP@NPs和PLT-RAP@NPs对细胞增殖活性的影响.体外药物控释实验观察PLT-RAP@NPs联合UTMD后载药释放效果.结果 本实验制备的PLT-RAP@NPs呈球形,大小均匀,表面覆盖薄膜,"核-壳"结构清晰,平均粒径(286.83±5.25)nm,平均表面电位-(15.60±5.04)mV.当100 mg PLGA负载3 mg RAP时,包封率为60.35%,载药率为2.18%.体外寻靶实验结果显示,巨噬细胞与纳米靶向探针共孵育2h后,DiI@PLGA组橙红色荧光强度约为PLT-DiI@PLGA组3倍;泡沫细胞与靶向纳米探针共孵育2h后,PLT-DiI@PLGA组橙红色荧光强度约为DiI@PLGA组4倍;内皮细胞与纳米靶向探针共孵育2h后,PLT-DiI@PLGA组橙红色荧光强度较DiI@PLGA组增强.细胞增殖-毒性实验结果显示,随着RAP浓度增高,游离RAP中细胞增殖活性下降,而RAP@NPs和PLT-RAP@NPs中细胞增殖活性变化较小.体外药物控释实验结果显示,RAP@NPs和PLT-RAP@NPs中RAP均缓慢释放,72 h积累药物释放量分别为42.12%和33.74%,联合UTMD后积累药物释放量分别提升至75.57%和67.54%.结论 成功制备PLT-RAP@NPs,其可抑制巨噬细胞吞噬、增强泡沫细胞摄取和提高内皮细胞黏附,从而实现免疫逃逸及靶向能力,联合UTMD可进行RAP靶向控释.

目的:制备一种含沸石咪唑类骨架材料8(ZIF-8)的复合光交联水凝胶,评价其体外细胞毒性、药物释放能力和抗菌性能.方法:采用水热法合成 ZIF-8 颗粒,扫描电子显微镜(SEM)观察 ZIF-8 颗粒微观形态表现.将 ZIF-8 颗粒以质量分数 0.2%的比例与甲基丙烯酸酐化明胶(GelMA)混合获得复合水凝胶 GelMA-Z.采用原子吸收光谱法检测各时间点 GelMA-Z 中锌离子(Zn2+)累计释放量.NIH-3T3 细胞分为对照组、GelMA 组和GelMA-Z组,将GelMA和GelMA-Z与 NIH-3T3 细胞共培养 1、3和 7 d,采用 CCK-8 法检测各组细胞存活率.大肠杆菌(E.coli)和金黄色葡萄球菌(S.aureus)分为对照组、GelMA 组和GelMA-Z组,将 GelMA 和 GelMA-Z 分别与E.coli 和S.aureus 共培养6、12和 24 h,采用酶标仪检测不同时间点各组细菌活性,采用平板抑菌实验和活/死细菌染色实验检测各组细菌菌落形成情况和活/死细菌染色情况.结果:SEM 观察,采用水热法合成的 ZIF-8 颗粒具有均匀的粒径.原子吸收光谱法检测,GelMA-Z 中 Zn2+在 1 d 内呈突释阶段后缓慢释放,7 d 左右达到平衡.与对照组比较,1、3和 7 d 时GelMA 组和 GelMA-Z 组细胞存活率均大于 90%,差异无统计学意义(P>0.05).酶标仪检测菌液活性,与细菌共培养 6、12和 24 h时,与对照组和 GelMA 组比较,GelMA-Z 组 E.coli 和 S.aureus 活性明显降低(P<0.05).平板抑菌实验,GelMA-Z 组中菌液涂布后形成的菌落数明显少于对照组和 GelMA 组.活/死细菌染色实验,GelMA-Z 组存在大量红色荧光染色的死细菌,对照组和 GelMA 组中则为大量绿色荧光染色的活细菌.结论:负载 ZIF-8的 GelMA水凝胶可实现原位光交联,具有良好的 Zn2+释放能力和抗菌性,是一种可用于感染伤口治疗的新型水凝胶敷料.

背景:细胞外基质合成与降解的失衡是髓核退变的主要原因,小分子药物Kartogenin(KGN)可恢复基质合成和降解的平衡.利用合适的载药系统实现KGN的缓释对KGN发挥长期有效的治疗至关重要.目的:用甲基丙烯酰化明胶(gelatin methacryloyl,GelMA)包裹KGN,通过微流控技术制备成可注射的水凝胶微球,探究其生物相容性和对髓核细胞生物学功能的影响.方法:将β-环糊精(β-cyclodextrins,β-CD)与KGN混合成包合物,与10%GelMA按1∶9的体积混合,利用微流控技术制备可注射水凝胶微球GelMA@β-CD@KGN,扫描电镜表征微球的微观形貌,检测水凝胶微球浸泡于PBS中1个月的药物释放情况.提取SD大鼠髓核细胞,将第1代细胞分3组培养:对照组单独培养髓核细胞,另外两组分别将GelMA@β-CD微球、GelMA@β-CD@KGN微球与髓核细胞共培养,利用CCK-8法检测细胞增殖,活死细胞染色检测细胞存活.分别用含有白细胞介素1β和不含白细胞介素1β的完全培养基将髓核细胞与两种微球共培养,采用RT-PCR法检测髓核细胞基质合成蛋白和分解蛋白的mRNA表达.结果与结论:①扫描电镜下可见,冻干后的GelMA@β-CD@KGN微球为规则的球形,保持高度分散且大小均一,形状饱满;GelMA@β-CD@KGN微球体外可持续释放药物,至30 d时药物释放量达到总量的62%;②活死细胞染色显示,GelMA@β-CD@KGN可保持髓核细胞的活性;CCK-8检测显示,GelMA@β-CD@KGN可促进髓核细胞的增殖;③在含或不含白细胞介素1β的完全培养基中,GelMA@β-CD@KGN微球组聚集蛋白聚糖、Ⅱ型胶原的mRNA表达均高于GelMA@β-CD微球组(P<0.05,P<0.01),基质金属蛋白酶13、血小板反应蛋白解整合素金属肽酶5的mRNA表达均低于GelMA@β-CD微球组(P<0.01);④结果表明,GelMA@β-CD@KGN微球具有良好的生物相容性和药物缓释能力,作为载药系统是一种具有广阔应用前景的生物材料.

背景:软骨退行性变和软骨下骨损伤是骨性关节炎的主要病理特征,根据这一病理特征进行局部调控将是骨性关节炎治疗的有前景改进方案.目的:设计并研究一种可注射载雷奈酸锶药物递送系统,观察其在骨性关节炎局部促进软骨修复并改善软骨下骨结构的治疗效果.方法:①体外实验:将雷奈酸锶搭载于海藻酸钠/胶原水凝胶基质中构建原位药物递送系统,表征该系统的体外缓释性能.将载雷奈酸锶海藻酸钠/胶原水凝胶(实验组)、海藻酸钠/胶原水凝胶(对照组)分别与骨髓间充质干细胞共培养,以单独培养的细胞为空白对照组,检测细胞增殖活性;在成软骨诱导分化后,分别进行番红O染色、阿利新蓝染色及RT-qPCR检测.将两种水凝胶分别与成骨细胞共培养,以单独培养的细胞为空白对照组,进行免疫荧光染色及RT-qPCR检测.②体内实验:取18只成年SD大鼠,通过内侧半月板切除的方法建立右后侧膝骨性关节炎模型,造模后1周,采用随机数字表法分3组处理:空白组不进行任何处理,对照组膝关节腔内注射海藻酸钠/胶原水凝胶,实验组右膝关节腔内注射载雷奈酸锶海藻酸钠/胶原水凝胶,每组6只.造模后第6周取材,分别进行Micro-CT扫描、苏木精-伊红染色、番红O染色及免疫荧光染色.结果与结论:①体外实验:载雷奈酸锶海藻酸钠/胶原水凝胶具有疏松多孔的微观结构,可持续释放雷奈酸锶,至21 d时累计释放量(60.89±0.58)%.骨髓间充质干细胞活死染色显示,两种水凝胶均具有良好的细胞相容性.CCK-8检测显示,载雷奈酸锶海藻酸钠/胶原水凝胶可促进骨髓间充质干细胞的增殖;番红O染色、阿利新蓝染色、免疫荧光染色及RT-qPCR检测显示,载雷奈酸锶海藻酸钠/胶原水凝胶可促进骨髓间充质干细胞的成软骨分化.免疫荧光染色及RT-qPCR检测显示,载雷奈酸锶海藻酸钠/胶原水凝胶可通过增加骨保护素/核因子κB受体活化因子配体比值而降低骨吸收活性.②体内实验:Micro-CT扫描显示,与空白组、对照组比较,实验组大鼠膝关节软骨下骨骨体积分数与骨密度升高(P<0.05,P<0.01).组织学染色显示,与空白组、对照组比较,实验组大鼠膝关节软骨损伤明显减轻,促进Ⅱ型胶原蛋白的表达、抑制基质金属蛋白酶2蛋白的表达(P<0.05,P<0.01).③结果表明:载雷奈酸锶海藻酸钠/胶原水凝胶能促进骨性关节炎软骨缺损的修复、重建软骨和软骨下骨之间的复杂界面.

背景:生长分化因子5作为骨形态发生蛋白的一员在软骨及骨组织修复领域表现出良好的应用潜力,增强生长分化因子5与骨组织的亲和力是提高蛋白使用效率的关键,因而开发具有骨靶向性的生长分化因子5蛋白具有重要意义.目的:利用双膦酸盐修饰生长分化因子5并探讨改性后蛋白对小鼠成骨前体细胞生长分化的影响.方法:采用化学交联法将生长分化因子5与帕米膦酸钠偶联,得到偶联帕米膦酸钠的生长分化因子5,采用傅里叶变换红外光谱、圆二色谱对其基团及结构进行表征,利用ELISA试剂盒测定生长分化因子5与磷酸钙的结合量以及生长分化因子5的体外释放量,用于表征其体外骨靶向性.将生长分化因子5(对照组)、偶联帕米膦酸钠的生长分化因子5(实验组)分别与成骨前体细胞MC3T3-E1共培养,以单独培养的细胞为空白对照,评价复合物对细胞增殖及分化等的影响.结果与结论:①红外光谱及圆二色谱结果表明,实验成功制备了双膦酸盐/生长分化因子5复合物且蛋白二级结构无显著变化;体外磷酸钙吸附结果表明,偶联帕米膦酸钠后,生长分化因子5与磷酸钙的吸附率增加了约1倍;在半胱氨酸存在条件下,偶联帕米膦酸钠的生长分化因子5的蛋白可释放出来;②CCK-8实验结果显示,实验组培养4,7 d的吸光度值高于对照组、空白对照组(P<0.000 1);培养7 d后,实验组碱性磷酸酶表达明显高于对照组、空白对照组(P<0.000 1);培养13 d后,实验组钙结节含量明显高于对照组、空白对照组(P<0.000 1);qRT-PCR结果检测结果显示,培养7 d后,实验组碱性磷酸酶、骨钙素及Runx2的mRNA表达高于对照组、空白对照组(P<0.01,P<0.001,P<0.000 1);③结果表明,双膦酸盐修饰有利于增强生长分化因子5与磷酸钙的结合能力,同时有利于增强其生物活性.

碰碰香(Plectranthus hadiensis var.tomentosus)的芳香气味具有改善身心健康的作用,但其挥发物的释放易受到室内环境影响而降低效果.为探究碰碰香挥发物对常见室内环境变化的响应,并为其高效稳定地应用于构建舒适的亲生物环境提供科学依据,该研究采用混合正交设计,使用动态顶空和气相色谱质谱联用技术测定了碰碰香挥发物对温度、湿度、CO2浓度及光照这 4 种常见室内环境因素的响应.结果表明:(1)在温度、湿度、CO2浓度和光照 4 个环境因素中,CO2 浓度和温度对碰碰香植株挥发物释放量的影响较大,而湿度和光照的影响较弱.(2)正常光周期下培养的碰碰香,在夜晚无光照时,CO2 浓度 500 μmol.mol-1、温度 25℃和湿度 60%的环境条件最适于碰碰香植株释放挥发物.此环境条件下碰碰香挥发物的释放总量为 86.23 μg.L-1.kg-1,具有改善身心健康的活性成分含量为 78.03 μg.L-1.kg-1.综上所述,应用碰碰香构建室内亲生物环境,维持或改善人员身心健康时,应主要注意控制CO2 浓度和温度相关的环境条件,从而充分高效地发挥碰碰香的园艺效益.

背景 15-羟基硬脂酸聚乙二醇酯(HS15)是一种低毒性的新型非离子型表面活性剂,广泛用于难溶性药物的增溶,载药量高并能够促进上皮组织对药物的吸收,有助于难溶性抗真菌药物眼部局部用药后的角膜传递,但目前其对抗真菌药物盐酸特比萘芬(TH)眼部应用后的促吸收作用及其对眼组织有无刺激性尚不清楚. 目的 研究HS15胶束(HNMs)对TH的促角膜吸收作用及局部刺激性.方法 采用共溶剂法制备质量分数0.5％ TH-HNMs,用光散射粒度分析仪测定胶束的粒径及Zeta电位,采用透射电子显微镜(TEM)观察胶束的形态,采用高效液相色谱法(HPLC)测定TH包封率及不同pH条件下胶束中TH的累积释放量.取普通级健康雄性新西兰白兔5只,用0.5％ TH-HNMs点眼后行兔眼刺激性试验.另取新西兰白兔90只,采用随机数字表法随机分为对照组和实验组,均以右眼作为用药眼.实验组用50 μl TH-HNMs点右眼,对照组用50μl0.5％ TH油剂点右眼.分别于点眼后5、15、30、60、90、120、180、240和360 min经兔耳缘静脉注射过量质量分数4％戊巴比妥钠溶液处死实验兔,剖取角膜组织后采用HPLC法测定角膜组织中TH质量分数. 结果 制备的TH-HNMs平均粒径为13.32 nm,多分散系数为0.046,Zeta电位为-0.133 mV.TH-HNMs药物包封率为100％.TH体外释放速度呈pH依赖性,6h后在pH5.0的磷酸盐缓冲液中累积释放量达(95.20±3.20)％,在pH 7.4的缓冲液中累积释放量仅为(0.17±0.01)％.0.5％ TH-HNMs点眼后兔眼组织刺激性评分均低于2分,眼部组织未发现任何损伤.0.5％ TH-HNMs点眼后角膜中药物达峰时间均为5 min,达峰质量分数为(20.26±2.26) μg/g,显著高于对照组的(1.40±0.44) μg/g,差异有统计学意义(t=18.926,P=0.000).实验组兔眼给药后药-时曲线下面积(AUC) 0-360 min为1 292.25 μg/(g·min),是对照组的15.6倍.结论 TH-HNMs的制备工艺简单,包封率高,粒径小,无眼部刺激性,与TH油剂相比,点眼后能够显著促进TH在兔眼角膜的吸收.