目的 应用胃肠超声评价急性胃肠道损伤(AGI)病人的胃肠功能,并确定开始肠内营养(EN)治疗的时机.方法 前瞻性选择2022年3月～2023年5月我院重症医学科(ICU)AGI水平为2级(AGI Ⅱ)的危重病人103例,记录了以下数据,包括超声胃窦横截面积(CSA)、降结肠或升结肠直径(CD)、蠕动频率(CPF)、EN开始时间、前白蛋白(PA)、EN剂量和EN并发症.经EN治疗后胃肠功能恢复判定为成功,如有EN治疗并发症,则判定失败.分析EN治疗后胃肠功能的变化,以确定EN时机.结果 成功组68例,失败组35例.两组年龄、腹内压(IAP)、急性生理与慢性健康状况评分Ⅱ(APACHE-Ⅱ)、PA及疾病构成比较差异无统计学意义(P＞0.05).EN成功组的 EN 启动时间为(14.71±8.89)小时、CSA 为(9.24±1.30)cm2,CD 为(2.86±0.41)cm,EN失败组分别为(19.52±13.53)小时、(10.82±1.96)cm2和(3.38±0.46)cm,两组比较差异有统计学意义(P＜0.05),而前者的CPF[(2.84±0.96)次/分钟]较后者[(2.32±0.98)次/分钟]更快,差异有统计学意义(P＜0.05).ROC分析显示,CSA、CD和CPF预测EN成功具有较大的价值,阈值分别为 CSA≤9 cm2(AUC=0.892),CD≤2.8 cm(AUC=0.858)和 CPF＞3 次/分钟(AUC=0.744);当CSA、CD和CPF联合预测生成PRE_1时,AUC最大(0.968),预测价值最高,可确定启动EN的最佳时机.结论 超声监测CSA、CD、CPF可预测AGI Ⅱ级危重症病人EN治疗的疗效,并指导EN治疗的最佳启动时机.

Targeting key enzymes that generate oxalate precursors or substrates is an alternative strategy to eliminate primary hyperoxaluria type Ⅰ(PH1),the most common and life-threatening type of primary hyperoxaluria.The compact Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats(CRISPR)from the Prevotella and Francisella 1(Cpf1)protein simplifies multiplex gene editing and allows for all-in-one adeno-associated virus(AAV)delivery.We hypothesized that the multiplex capabilities of the Cpf1 system could help minimize oxalate formation in PH1 by simultaneously targeting the hepatic hydroxyacid oxidase 1(Hao1)and lactate dehydrogenase A(Ldha)genes.Study cohorts included treated PH1 rats(AgxtQ84X rats injected with AAV-AsCpf1 at 7 days of age),phosphate-buffered saline(PBS)-injected PH1 rats,untreated PH1 rats,and age-matched wild-type(WT)rats.The most efficient and specific CRISPR RNA(crRNA)pairs targeting the rat Hao1 and Ldha genes were initially screened ex vivo.In vivo experiments demonstrated efficient genome editing of the Hao1 and Ldha genes,primarily resulting in small deletions.This resulted in decreased transcription and translational expression of Hao1 and Ldha.Treatment significantly reduced urine oxalate levels,reduced kidney damage,and alleviated nephrocalcinosis in rats with PH1.No liver toxicity,ex-liver genome editing,or obvious off-target effects were detected.We demonstrated the AAV-AsCpf1 system can target multiple genes and rescue the pathogenic phenotype in PH1,serving as a proof-of-concept for the development of multiplex genome editing-based gene therapy.

目的 探讨心脏乳头状弹力纤维瘤(CPF)的超声心动图特征、鉴别诊断要点及临床表现,以提高超声医师对CPF的认识.方法 回顾总结自2018年1月至2022年12月在浙江大学医学院附属第一医院手术后经病理证实的15例CPF患者的临床相关资料、超声心动图特征及术后随访情况.结果 15例患者均无特异性临床表现,术前经胸超声心动图及术中经食管超声心动图均发现心脏内占位团块,其中1例为多发(6.67%),分别位于主动脉瓣及右心房内,余肿瘤均为单发(93.33%),其中位于瓣膜10例(71.42%),依次为主动脉瓣5例、二尖瓣4例、肺动脉瓣1例;位于心腔4例(28.58%),依次左心室3例、右心室1例,其中最大者长径19 mm,最小者长径5 mm.15例患者均行心脏肿瘤手术切除,手术过程顺利,术后病理证实均为CPF.结论 CPF多数患者无典型临床症状,经胸超声心动图是首选检查,必要时可进行经食道超声心动图,最常见的部位为心脏瓣膜,尤其是主动脉瓣,多呈圆形或卵圆形,内部多数呈高回声,边界清晰,半数有蒂,有一定活动度;肿瘤内部彩色多普勒未能显示血流信号.手术切除是治疗首选方法,预后良好.

目的 探讨针刀松解(NKT)与体外冲击波(ESWT)治疗慢性跖筋膜炎型跟痛症(PHS-CPF)的临床疗效.方法 收集2021年6月-2022年6月期间在南京医科大学金陵临床医学院骨科接受PHS-CPF治疗的48例患者,根据医患沟通结果和治疗方式分为NKT组(26例)和ESWT组(22例),NKT组采用针刀松解治疗模式进行操作,ESWT组采用激痛点治疗模式进行操作.分别采用视觉模拟评分法(VAS)和压痛评分对2组治疗前及治疗后1周、1个月、3个月和6个月随访时的晨起足跟痛和足跟压痛进行评估.结果 治疗后各随访时间节点,2组患者的晨起足跟痛和足跟压痛均较治疗前明显改善(P＜0.05);2组治疗后1个月、3个月和6个月的晨起足跟痛和足跟压痛均低于治疗后1周(P＜0.05);2组治疗后3个月和6个月的足跟压痛与治疗后1个月相比,差异不明显(P＞0.05);NKT组治疗后3个月和6个月的晨起足跟痛均较治疗后1个月明显改善(1.88±0.71 vs 2.54±0.65,1.62±0.64 vs 2.54±0.65,P＜0.05);与治疗后1个月相比,ESWT组治疗3个月后,晨起足跟痛无明显改善(P＞0.05),而治疗6个月后,晨起足跟痛增加(4.32±0.78 vs 3.45±1.10,P＜0.05).治疗后1周时,NKT组的晨起足跟痛明显低于ESWT组(4.58±0.90vs5.27±0.98,P＜0.05),而2组的足跟压痛差异不明显(P＞0.05);治疗后1个月、3个月和6个月时,与ESWT组相比,NKT组在缓解晨起足跟痛(2.54±0.65vs3.45±1.10,1.88±0.71 vs 3.64±0.95,1.62±0.64 vs 4.32±0.78)和足跟压痛(0.58±0.58 vs 1.00±0.53,0.54±0.58 vs 1.09±0.61,0.73±0.53 vs 1.14±0.71)上更具优势(P＜0.05).结论 NKT与ESWT治疗PHS-CPF的临床疗效确切,均能有效缓解晨起足跟痛和足跟压痛,并具有较好的维持治疗效果,但NKT的临床疗效更佳.

Dear Editor,Use of the clustered regularly interspaced short palindromic repeat (CRISPR)-associated protein9 (Cas9) and Cpf1 systems in plants (Ma et al.,2016;Wang et al.,2017) involves many steps,including the selection of appropriate specific target site(s) that should have no highly homologous sequences as the potential off-target sites in the genome,the design and synthesis of oligonucleotides involving the target sequences,the preparation of expression cassette(s) for the target single guide RNAs (sgRNAs) that provide target sequence specificity,the construction of plant-transformation/expression vector(s),and the transformation of plants,followed by the detection and determination of the targeted mutations in the transgenic plants.Several software tools have been developed for designing target sites or evaluating the outcome of genome/gene editing;however,to date,the toolkit that could aid a genome editing experiment simultaneously at all the steps is not available.Here we present a web-based software package,CRISPR-GE (Genome Editing) (http://skl.scau.edu.cn/),a convenient,integrated toolkit to expedite all experimental designs and analyses of mutations for CRISPR/Cas9/Cpf1-based genome editing in plants and other organisms.

目的 了解该地区女性泌尿生殖道解脲支原体药敏趋势,为临床针对性的用药提供依据.方法 记录2009-2015年1459例女性泌尿生殖道解脲支原体药敏结果,通过统计学分析规律并分析其变化趋势.结果 2009-2015年,女性泌尿生殖道解脲支原体对强力霉素(DOX)、米诺环素(MIN)药敏无变化(均P>0.05);对环丙沙星(CPF)、司帕沙星(SPA)、交沙霉素(JOS)耐药性变化差异无统计学意义(均P>0.05),但有些药敏变化有趋势;对氧氟沙星(OFL)、罗红霉素(ROX)、阿奇霉素(AZI)、克拉霉素(CLA)、壮观霉素(SPE)、螺旋霉素(ASP)、左旋氧氟(LEV)耐药性变化差异有统计学意义(均P<0.05),有些药敏变化有趋势.结论 女性泌尿生殖道解脲支原体的药敏会产生变化,应根据药敏情况针对性的合理用药.

裸藻(Euglena), 又称为眼虫, 是具有植物和动物双重特性的单细胞真核生物, 其细胞核具有间核性质, 叶绿体起源于二次共生, 具有不稳定性, 在胁迫条件下易丢失.因此, 裸藻是研究生物进化和叶绿体内共生的理想材料, 具有重要的科学价值.而且裸藻细胞富含多不饱和脂肪酸、氨基酸和维生素等多种营养物质, 能够积累很高含量的副淀粉和蜡酯, 既是一种高附加值的保健食品, 也是生产生物能源的优质原材料.目前, 关于裸藻基因功能的研究主要是采用生理生化的方法, 缺少有效的遗传操作技术, 裸藻基因工程改造的研究进展十分缓慢, 文章对裸藻遗传转化方法及其研究进展进行了详细综述, 以期为裸藻功能基因组学的研究和生物技术的开发提供参考.

CRISPR/Cas技术能高效进行基因组定点编辑,但不同细菌来源或人工改造的Cas9以及Cpf1等核酸酶识别的PAM(protospacer adjacent motif)有差异,因此不同的基因编辑核酸酶可能采用不同类型的sgRNAs(small guide RNAs).MicroRNAs(miRNAs)是一类调控性的小分子非编码RNAs,为了研究miRNA前体中是否可能存在特异性高的sgRNAs靶点,本文利用本课题组前期开发的生物信息学软件CRISPR-offinder,对靶向28645条miRNA前体的11种不同类型sgRNA的丰度及特异性进行了分析,并利用CRISPR/Cas9慢病毒技术构建了猪miR-302/367基因簇敲除细胞系,对构建的猪miRNA敲除细胞系的效率进行了检测.结果表明,每个miRNA前体中平均存在约8种不同类型sgRNA的靶点;通过评估靶向猪miRNA前体sgRNA的脱靶效应,发现其中特异性高的sgRNA仅占18.2％;通过CRISPR/Cas9慢病毒技术成功构建了猪miR-302/367基因簇敲除细胞系,发现通过该技术构建miRNA敲除细胞系的效率为40％.本研究为利用CRISPR/Cas技术靶向敲除miRNA提供了重要资源.

冠状动脉-肺动脉瘘(cornory pulmonary fistula,CPF)是指冠状动脉(冠脉)与肺动脉之间的异常通道,较为少见,而双侧CPF更为罕见.患者常诉胸闷、胸痛、活动耐量下降等不典型症状,故常被误诊为冠心病.有资料显示,早期外科手术效果良好,故早期诊断及治疗意义重大.本文回顾性分析1例CPF的各种影像学表现并分析其优劣,以期降低CPF的漏诊及误诊率.

Dear Editor, The CRISPR-associated protein Cas12a (previously known as Cpf1), which is an endonuclease from the type V-A CRISPR system, has been applied in both in vivo genome editing and in vitro DNA assembly.1-3 Cas12a is guided by a single CRISPR RNA (crRNA) with a T-rich protospacer adjacent motif (PAM) sequence to cleave double-stranded DNA (dsDNA) targets, generating sticky ends. Different from Cas9, Cas12a cleaves both the target and non-target strands of a targeted dsDNA by a single active site in the RuvC catalytic pocket4-6 (Supplementary information, Figure S12a). Besides, Cas12a also processes precursor crRNAs to generate mature crRNAs.7 However, the cleavage activity of Cas12a on single-stranded DNA (ssDNA) targets is less understood.