目的:分析8种人胰腺癌细胞株中常见肿瘤相关基因突变，为胰腺癌基础研究中选择合适的细胞株提供依据。方法:体外培养8种人胰腺癌细胞株(AsPC-1、BxPC-3、Capan-1、Capan-2、MIA PaCa-2、PANC-1、Patu8988和T3M4，均购自美国模式培养物集存库)，采用二代测序技术检测113个肿瘤相关基因突变情况，结合京都基因与基因组百科全书(KEGG)数据库对突变基因进行功能分析。结果:二代测序结果显示，8种人胰腺癌细胞株中共确定36个基因、79个位点发生突变。鼠类肉瘤病毒癌基因(KRAS)、肿瘤蛋白P53(TP53)、细胞周期依赖性激酶抑制基因(CDKN2A)和胰腺癌缺失基因(DPC4/SMAD4)在8种胰腺癌细胞株中的突变率分别为87.5%(7/8)、100.0%(8/8)、50.0%(4/8)和37.5%(3/8)。AsPC-1和Capan-1细胞中同时存在上述4个基因的突变，BxPC-3细胞株是KRAS野生型胰腺癌，CDKN2A基因在AsPC-1、Capan-1、Capan-2和Patu8988细胞中检测到突变，而DPC4/SMAD4在AsPC-1、Capan-1和T3M4细胞中发生突变。其他发生率较高的突变基因包括AT丰富结合域1A(ARID1A)基因(AsPC-1、Capan-1、Capan-2、MIA PaCa-2和T3M4发生突变)、环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREBBP)基因(Capan-1、Capan-2、MIA PaCa-2和T3M4发生突变)、NOTCH1(BxPC-3、Capan-2、MIA PaCa-2和T3M4发生突变)、腺瘤性息肉病(APC)基因(AsPC-1、Capan-1和Patu8988发生突变)和E1A结合蛋白P300(EP300)基因(BxPC-3、MIA PaCa-2和T3M4发生突变)。突变基因功能主要涉及Ras/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路、细胞周期调控、Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)通路、NOTCH信号通路、染色质重塑复合物家族、转化生长因子β(TGF-β)信号通路、DNA损伤修复、Hedgehog和磷脂酰肌醇3激酶丝氨酸/苏氨酸激酶(PI3K-Akt)信号通路等。结论:8种胰腺癌细胞株具备人胰腺癌组织的基因学特征，不同细胞株具有不同的基因突变特点，实验研究中应根据不同细胞的基因突变情况合理选择细胞株并分析研究结果。

胶质母细胞瘤(GBM)是中枢神经系统肿瘤中最具侵袭性和致死性的类型，以进展快、易复发和治疗抵抗为特征。腺病毒早期区域1A蛋白结合p300蛋白(简称p300)是一种功能丰富的蛋白，可作为转录辅激活物和赖氨酸乙酰转移酶发挥作用。目前研究表明p300在GBM的发生、增殖、侵袭和放化疗抵抗中具有着重要价值。本文现围绕p300的结构、功能及其参与GBM发生发展的多种途径、转化应用前景等方面的相关研究进展进行综述，以期为GBM研究提供更多的参考借鉴。

目的:基于miRNA-mRNA调控网络进行生物信息学分析，探讨骨关节炎病变的相关分子机制。方法:从GEO数据库下载人血清样本miRNA表达数据集，通过R语言limma包获取差异表达miRNA,采用miRwalk 2.0版数据库预测其对应靶基因(mRNA)，并构建miRNA-mRNA调控网络。对靶基因进行功能GO分析和KEGG信号通路分析，构建靶基因所编码的蛋白质相互作用网络(PPI)，从中筛选出骨关节炎病变的核心基因。结果:共筛选出7个差异表达的miRNA(表达均为下调)和900个mRNA，这些基因主要涉及蛋白结合、DNA结合、转录等生理过程，参与Cell cycle、p53、Neurotrophin、PI3K-Akt等信号通路。蛋白相互作用分析表明MAPK1、TP53、MAPK14、CCND1、EP300、POLR2E、POLR2F、ABL1、RAC1、SKIV2L2为该调控网络的核心靶基因。结论:OA的发生和发展涉及多个的miRNA、靶基因和作用途径，而通过构建骨关节炎相关miRNA-mRNA调控网络，可为找出骨关节炎病的分子机制和今后临床上诊疗提供新的思路。

目的:探讨配对盒基因6 (paired box 6，PAX6)在先天性巨结肠(Hirschsprungs disease，HSCR)患儿结肠组织内低表达的分子机制。方法:选取24例HSCR患儿巨结肠根治术后痉挛段结肠组织为HSCR组，同期18例新生儿坏死性小肠结肠炎(necrotizing enterocolitis，NEC)手术切除坏死肠段两端正常结肠组织为NEC组作为对照。采用实时定量聚合酶链反应及蛋白免疫印迹法检测两组结肠组织内PAX6的表达水平，染色质免疫共沉淀-实时定量聚合酶链反应法检测两组结肠组织中PAX6启动子区组蛋白H3K9乙酰化水平及E1A结合蛋白p300 (EP300)结合水平。结果:HSCR组PAX6 mRNA和蛋白表达水平明显低于NEC组(0.13±0.05比1.08±0.45，0.41±0.12比0.82±0.12)，PAX6启动子区组蛋白H3K9乙酰化水平和EP300结合水平也明显低于NEC组(0.45±0.17比1.38±0.59，0.32±0.15比1.45±0.49 )，差异均有统计学意义( P<0.01)。HSCR组PAX6表达水平与其启动子区组蛋白H3K9乙酰化水平成正相关( r＝0.664， P<0.05)，H3K9乙酰化水平与EP300结合水平成正相关( r＝0.624， P<0.05) 。 结论:HSCR患儿结肠组织中PAX6低表达可能与其启动子区EP300结合减少导致H3K9乙酰化水平下调有关。

目的:探讨轴突导向因子3A（Sema3A）对脂多糖（LPS）诱导的CD4 +CD25 +调节性T细胞（Tregs）稳定性的作用及机制。 方法:采用体外免疫磁珠法分离和培养C57BL/6J小鼠脾脏CD4 +CD25 + Tregs，将分离的细胞按随机数字表法分为对照组（仅给予抗小鼠CD3e和CD28诱导细胞处于激活状态）、LPS组（在对照组的基础上给予LPS 100 μg/L）、LPS+核转录因子-κB（NF-κB）抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸酯（PDTC）组（给予LPS 100 μg/L+PDTC 25 mg/L）、LPS+磷酸盐缓冲液（PBS）组（给予LPS 100 μg/L+PBS 10 μL）、LPS+PDTC+重组Sema3A（rSema3A）组（给予LPS 100 μg/L+PDTC 25 mg/L+rSema3A 300 μg/L）和LPS+PBS+rSema3A组（给予LPS 100 μg/L+PBS 10 μL+rSema3A 300 μg/L）。各组培养24 h后，采用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫荧光法检测CD4 +CD25 + Tregs特异性标志物叉头翼状转录因子-3（Foxp-3）、细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4（CTLA-4）和膜相关转化型生长因子-β1（TGF-β1 m+）的基因及蛋白表达，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞上清液中白细胞介素-10（IL-10）和分泌型转化生长因子-β1（sTGF-β1）的水平，采用免疫荧光法检测细胞凋亡，采用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）检测Foxp-3-Tregs特异性去甲基化区（Foxp-3-TSDR）的去甲基化程度，以反映CD4 +CD25 + Tregs的稳定性，采用电泳迁移率分析（EMSA）检测NF-κB信号通路的DNA结合活性，采用蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测NF-κB信号通路活性。 结果:与对照组比较，LPS能够增加细胞稳定性，表现为Foxp-3、CTLA-4和TGF-β1 m+的基因及蛋白表达上调，IL-10和sTGF-β1分泌增加，细胞凋亡减少，Foxp-3-TSDR去甲基化程度增加；同时LPS可增加细胞内NF-κB信号通路的DNA结合活性，以及主要分子NF-κB抑制蛋白激酶β（IKKβ）和p65的磷酸化水平，说明LPS增加细胞稳定性的机制与NF-κB信号通路有关。与LPS组比较，PBS并未对细胞稳定性和NF-κB信号通路产生影响；但添加rSema3A后能进一步增加细胞稳定性，并激活NF-κB信号通路。而PDTC能够抑制rSema3A增加细胞稳定性的功能，表现为：与LPS+PBS+rSema3A组比较，LPS+PDTC+rSema3A组Foxp-3、CTLA-4和TGF-β1 m+的基因及蛋白表达明显下调〔Foxp-3基因（2 -ΔΔCt）：8.092±1.117比18.509±1.068，Foxp-3蛋白（相对荧光强度）：1.224±0.033比1.826±0.181；CTLA-4基因（2 -ΔΔCt）：3.254±0.760比11.840±0.827，CTLA-4蛋白（相对荧光强度）：1.305±0.058比1.842±0.111；TGF-β1 m+基因（2 -ΔΔCt）：3.589±1.180比8.509±0.472，TGF-β1 m+蛋白（相对荧光强度）：1.319±0.033比1.822±0.063，均 P<0.01〕，IL-10和sTGF-β1分泌减少〔IL-10（ng/L）：445.33±54.08比992.67±83.10，sTGF-β1（ng/L）：1 116.67±65.25比1 494.67±94.45，均 P<0.01〕，细胞凋亡明显增加（荧光强度：0.398±0.031比0.268±0.046， P<0.01），Foxp-3-TSDR去甲基化程度明显降低（灰度值：0.467±0.048比1.780±0.119， P<0.01），NF-κB信号通路的DNA结合活性被明显抑制（灰度值：1.23±0.02比3.95±0.06， P<0.01），IKKβ和p65的磷酸化水平降低〔p-IKKβ表达（p-IKKβ/IKKβ）：0.97±0.07比1.97±0.04，p-p65（p-p65/p65）：0.95±0.08比1.93±0.06，均 P<0.01〕。 结论:LPS能通过NF-κB信号通路增加CD4 +CD25 + Tregs稳定性；Sema3A能够进一步增加CD4 +CD25 + Tregs稳定性，并且与NF-κB信号通路有关。

目的:总结Rubinstein-Taybi综合征（RSTS）的基因变异类型和临床表型特点，探讨其基因型与表型的相关性。方法:病例系列研究，收集2013年1月至2022年7月就诊于首都儿科研究所附属儿童医院，通过全外显子测序或染色体芯片、拷贝数变异测序，检出CREBBP或EP300基因变异的21例RSTS患儿的病例资料。总结其基因变异类型并回访其表型数目。根据变异类型将患儿分别分为点变异或拷贝数缺失组、EP300基因或CREBBP基因变异组、功能丧失或错义变异组。组间表型数目比较采用两独立样本秩和检验。结果:21例患儿中男12例、女9例，年龄范围为1月龄至14岁2月龄，14例（67%）点变异，7例（33%）拷贝数缺失；其中20例（95%）为新生变异。20例患儿随访获得详细表型数目，95%（19/20）在2岁以内出现神经发育迟缓，80%（16/20）具有特殊面容。组间表型数目比较，点变异组（14例）与拷贝数缺失变异组（6例）［5.0（3.0，7.0）比5.0（2.5，5.3）个， Z=0.75， P=0.452］；CREBBP基因组（10例）与EP300基因变异组（4例）［5.0（3.8，7.0）比4.0（2.0，6.0）个， Z=1.14， P=0.253］；功能丧失变异组（9例）与错义变异组（5例）［6.0（4.5，7.0）比3.0（2.5，5.5）个， Z=1.54， P=0.121］，差异均无统计学意义。 结论:RSTS患儿主要临床表型为神经发育迟缓，特定面容为疑似患者寻求基因检测提供依据。基因变异类型和表型数目无关。

目的 探讨李忠教授基于厥阴理论辨证论治恶性肿瘤的核心处方,并进行中药含药血清对肿瘤细胞抑制作用的体外实验验证.方法 收集李忠教授北京中医药大学东直门医院国际部门诊2022年1月至2023年6月恶性肿瘤患者的处方数据,通过古今医案云平台V 2.3.7分析药物频次、性味归经,并进行中药间的聚类分析、关联分析、复杂网络分析,总结核心处方.将8只SPF级6～8周龄SD雄性大鼠按照随机数字表法将其分为实验组、对照组,各4只.分别以2 ml核心处方中药煎剂与同剂量生理盐水灌胃中药组和对照组,连续灌胃7 d,提取含药血清.CCK8法确定含药血清对A549、HepG2细胞的最佳干预浓度与干预时间.设置空白组:完全培养基培养,不加药;中药组:以最佳浓度含药血清进行干预;对照组:以同剂量空白血清进行干预.Transwell实验检测细胞迁移及侵袭能力,流式细胞术进行细胞凋亡及周期检测,Western blot检测细胞凋亡与上皮细胞-间充质转化相关蛋白的表达.结果 共纳入8 166首处方,药物共300种,用药性温、味甘较多,归经以肝、肺经为多.黄芪、鳖甲、乌梅、山萸肉等16味药物使用频率均＞90％.结合聚类分析、复杂网络分析等结果与李忠教授经验,得出平调阴阳法核心处方1首,包括生黄芪、炙黄芪、醋鳖甲、仙鹤草、乌梅、党参、当归、熟地黄、忍冬藤、白芍、穿山龙、浙贝母、僵蚕、生牡蛎、山萸肉.实验研究发现,中药含药血清最佳干预浓度为20％、干预时间为48 h.中药组A549、HepG2细胞的迁移和侵袭能力低于对照组,细胞凋亡率高于对照组,阻滞细胞周期长于对照组,Bcl-2、N-Cadherin、Vimentin表达水平低于对照组,Cleaved-Caspase-3、E-Cadherin表达水平高于对照组(P＜0.05).结论 运用数据挖掘可得出从厥阴论治恶性肿瘤的核心处方,处方含药血清可体外抑制肿瘤细胞的增殖、迁移与侵袭,机制可能与促进细胞凋亡、阻滞细胞周期、抑制上皮细胞间充质转化相关.

目的 探究长链非编码RNA锌指E盒结合同源盒蛋白1反义链1(LncRNA ZEB1-AS1)和长链非编码RNA性别决定相关基因簇2重叠转录本(LncRNA SOX2OT)在糖尿病肾病(DN)患者中的表达及与肾功能的相关性.方法 选取于2021年11月-2023年12月在武汉大学人民医院肾内科收治的DN患者106例为DN组,并根据24 h尿蛋白定量(24 h Upro)水平分为正常蛋白尿亚组43例(＜30 mg)、微量蛋白尿亚组39例(30～＜300 mg)、大量蛋白尿亚组24例(≥300 mg),另选取同期医院单纯糖尿病患者106例作对照组,检测患者血清LncRNA ZEB1-AS1、LncRNA SOX2OT水平;Pearson法分析LncRNA ZEB1-AS1和LncRNA SOX2OT与肾功能指标的相关性;Logistic分析影响DN患者肾功能损伤的因素.结果 DN组血清LncRNA ZEB1-AS1、LncRNA SOX2OT水平低于对照组(t=11.471、10.257,P均＜0.001).血清LncRNA ZEB1-AS 1、LncRNA SOX2OT比较,正常尿蛋白亚组＞微量尿蛋白亚组＞大量尿蛋白亚组(F=58.720、117.722,P均＜0.001),BUN、SCr、UA水平比较,正常尿蛋白亚组＜微量尿蛋白亚组＜大量尿蛋白亚组,差异均有统计学意义(F=122.493、595.589、53.178,P 均＜0.001);LncRNA ZEB1-AS1、LncRNA SOX2OT分别与 BUN、SCr、UA 呈负相关(r=-0.487、-0.498、-0.521,-0.527、-0.515、-0.534,P 均＜0.001);Logistic 回归分析显示,糖尿病病程长及高BUN、SCr、UA水平是影响DN患者肾功能损伤的危险因素[OR(95％CI)=1.672(1.128～2.479)、2.839(1.534～5.253)、2.754(1.512～5.017)、2.693(1.464～4.954)],高 LncRNA ZEB1-AS1、LncRNA SOX2OT 是保护因素[OR(95％CI)=0.875(0.798～0.959)、0.898(0.832～0.969)].结论 血清 LncRNA ZEB1-AS1、LncRNA SOX2OT水平与DN患者肾功能有关,可能是评估DN患者肾功能的潜在指标.

患者男性，37岁，2个月前自行发现阴囊肿物，并逐渐增大伴出血。既往血友病A病史6个月。查体：ECOG评分3级，乏力，皮肤黏膜苍白，右侧阴囊根部见大小约4 cm×5 cm菜花样肿块，质软苍白，表面破溃见活动性出血，无压痛，活动度可，阴阜及右侧大腿根部皮肤增厚，可触及质硬结节。实验室检查：鳞状细胞癌相关抗原27.90 ng/mL（正常值0～1.5 ng/mL）。全身18F-脱氧葡萄糖（fluorodeoxyglucose，FDG）PET/CT显像：右侧阴囊根部后方见大小约4.1 cm×3.4 cm× 4.0 cm软组织肿块，放射性分布不均匀增高，最大标准摄取值（maximum standardized uptake value，SUVmax）为6.9，CT值约36 HU（图1A）；右侧大腿根部前方及阴阜部皮肤轻度不均匀增厚，放射性分布增高，SUVmax为1.7；纵隔（1、4区）、双侧髂血管旁、双侧腹股沟区多发淋巴结FDG摄取不同程度增高，SUVmax为12.8（图1B、1C）；右侧肩胛骨、右侧髂骨、右侧髋臼、右侧坐骨、双侧耻骨呈溶骨性骨质破坏，见多发FDG摄取浓聚，SUVmax为14.6（图1D）；右侧肾上腺结合部和左侧肾上腺外支见软组织密度结节，SUVmax分别为5.6、2.9（图1E）；PET/CT诊断考虑右侧阴囊间叶源性肿瘤或淋巴瘤伴多发淋巴结、骨、肾上腺转移。因患者血友病病史，会诊考虑不予手术处理。取活检病理：镜下纤维组织内低分化肿瘤细胞浸润性生长，核大，不规则，可见病理性核分裂象，部分区域出现细胞间桥和基底细胞样特征（图2）；免疫组化：CK7（＋＋＋），GATA-3（＋＋＋），P16（＋＋＋），P63（＋＋＋），CK5/6（＋＋＋）。病理诊断：（阴囊）浸润性高级别尿路上皮癌（urothelial carcinomas，UC）伴鳞状细胞分化。给予患者输注凝血因子支持后行"白蛋白紫衫醇200/300 mg d1＋顺铂60 mg d1、d2"治疗6周期，目前仍在随访中。

目的 探讨组蛋白乙酰基转移酶家族成员腺病毒E1A结合蛋白P300(EP300)调控肝癌细胞侵袭、迁移的作用及机制.方法 收集我院45例肝癌患者的癌旁组织与癌组织,利用qRT-PCR检测EP300在组织中的表达.在肝细胞癌细胞系HepG2中构建EP300稳定干扰细胞系,细胞划痕实验和Transwell实验观察干扰EP300表达对HepG2细胞侵袭和转移的影响.Western blotting分析EP300对WNT通路的影响.结果 与癌旁组织相比,EP300在肝癌组织中的表达明显增加.与对照组相比,EP300低表达HepG2细胞划痕愈合更慢(P<0.05),穿膜细胞明显减少(P<0.05),SNAIL表达明显减少,E-cadherin表达明显增加.结论 EP300能够通过激活WNT通路促进肝癌细胞侵袭和迁移.