目的:探究小分子化合物AM679在乙型肝炎病毒（HBV）复制及感染细胞模型中的抗病毒活性。方法:通过qPCR及蛋白质免疫印迹法验证AM679对延伸因子结合蛋白?2?（EFTUD2）表达的正向调节作用；用AM679（0.5、1、2?nmol/L）处理HepAD38、HepG2-NTCP细胞，设置阴性对照组、阳性对照组及AM679与恩替卡韦联合用药组。通过qPCR检测细胞内外HBV DNA水平变化，以及细胞内HBV RNAs与3.5kb-RNA的表达水平；通过酶联免疫吸附试验检测细胞上清液中乙型肝炎表面抗原（HBsAg）、乙型肝炎e抗原（HBeAg）水平。组间均数差异采用 t检验方法进行统计学分析。 结果:AM679处理后的HepAD38、HepG2-NTCP细胞中EFTUD2 mRNA及蛋白表达水平均明显升高，差异有统计学意义（ P ?

目的:对1例超声检查表现为小下颌畸形伴双耳低位、小耳畸形、羊水过多、胃无回声的胎儿进行临床和遗传学分析，以明确其遗传学病因。方法:应用全外显子组测序(whole exome sequencing，WES)技术对1例常规染色体核型分析和染色体微阵列分析(chromosome microarray analysis，CMA)未见异常的超声结构异常胎儿行基因变异检测，针对可疑变异进行先证者及其父母Sanger测序验证和生物信息学预测。结果:WES检测发现胎儿 EFTUD2基因第23外显子存在一个无义变异c.2302C>T(p.Q768X)，其父母未检测到该变异。该变异为未报道过的新变异，导致其编码的EFTUD2蛋白在768位氨基酸处翻译提前终止。经生物信息学预测，768位氨基酸在不同物种中高度保守，Q768X变异体改变了EFTUD2蛋白空间结构，可能影响蛋白的功能。 结论:应用WES技术明确 EFTUD2基因c.2302C>T变异是引起胎儿Guion-Almeida型下颌骨颜面发育障碍的遗传学病因。该变异丰富了 EFTUD2基因的变异谱，为家系的遗传咨询和产前诊断提供依据。

孕妇，26岁，孕2产0，丈夫32岁。该夫妇表型及染色体核型分析结果均正常，否认近亲婚配及遗传病家族史。该孕妇于2019年首次妊娠，孕22 w系统超声提示胎儿小下颌，耳廓形态发育异常考虑小耳畸形、低耳位，胃泡未显示，羊水过多，足内翻等，进行介入性产前诊断羊水染色体核型分析及染色体微阵列检查(array comparative genomic hybridization，aCGH)均无明显异常，该孕妇于孕31 w选择终止妊娠。2021年5月该孕妇因孕22 +1 w系统超声提示胎儿小下颌畸性，消化道闭锁，羊水过多，胃泡未显示(见图1)，来西北妇女儿童医院遗传中心就诊。本次妊娠孕12 +1 w NT超声检查显示NT 1.4 mm，顶臀径(crown-rump length，CRL)约54 mm。该孕妇于孕33 w选择终止妊娠，引产胎儿主要表现为面容异常如小下颌、低耳位、环状耳、眼距较宽、鼻头外翻、无明显鼻弓等(见图2)。对该夫妇进行遗传咨询，并签署知情同意书。本研究符合《世界医学会赫尔辛基宣言》。

延伸因子Tu GTP结合域蛋白 2(elongation factor Tu GTP binding domain containing protein,EFTUD2)是剪接体复合物U5小核糖核蛋白的核心组件,通过调节剪接体的剪接功能进而调控相关基因的表达.本文旨在总结EFTUD2在免疫调节、胚胎发育和肿瘤进展等方面的重要作用.

背景 创伤性脑损伤后异常激活的神经炎症是预后不良的主要原因之一,星形胶质细胞在炎症发展中具有促进修复或加重损伤的双重作用.延长因子Tu GTP结合域蛋白2(elongation factor Tu GTP binding domain containing protein,Eftud2)是免疫调节因子,在炎症和肿瘤的发生发展中均具重要作用.目的 观察Eftud2对星形胶质细胞炎症的影响.方法 小鼠随机分为假手术组和创伤性脑损伤组,使用经典控制性皮质撞击装置构建创伤性脑损伤模型.免疫荧光观察损伤前后S100β和Eftud2含量变化.转棒和平衡木实验评估小鼠造模前后运动功能的改变.实时荧光定量PCR检测损伤前后组织中IL-1β、TNF-α、NLRP3转录水平变化.使用小干扰RNA敲低小鼠星形胶质细胞(mouse astrocyte,MA)中的Eftud2,而后使用脂多糖刺激MA细胞系模拟炎性状态,实时荧光定量PCR检测MA细胞中IL-6、IL-1β、TNF-α、GM-CSF、CXCL-10、IL-10、MyD88转录水平变化,蛋白质免疫印迹检测MA细胞中Eftud2和MyD88的蛋白表达变化.结果 动物实验中,与假手术组相比,创伤性脑损伤组小鼠损伤部位Eftud2和S100β荧光强度增加(P＜0.01),损伤组织周围炎性因子IL-1β、TNF-α、NLRP3转录水平升高(P＜0.01).细胞实验中,用脂多糖刺激后,MA细胞中Eftud2蛋白表达水平上调(P＜0.05),同时Eftud2转录水平和单细胞荧光强度也升高(P＜0.01).给予小干扰RNA后,敲低组MA细胞中Eftud2蛋白表达水平、转录水平和单细胞荧光强度均显著下降(P＜0.01).敲低MA细胞中的Eftud2并给予脂多糖刺激后,实时荧光定量PCR结果显示,IL-6转录水平下降(P＜0.05),IL-1β、TNF-α、GM-CSF、MyD88和CXCL-10转录水平也下降(P＜0.01),抗炎因子IL-10转录水平升高(P＜0.05).蛋白免疫印迹结果显示,MyD88蛋白表达水平下降(P＜0.05).结论 Eftud2可能通过MyD88介导的信号通路调控星形胶质细胞的炎症反应,其作用机制有待进一步研究.

Dear Editor,Craniofacial microsomia(CFM,MIM#164210)is a congenital malformation involving the first and second branchial arch derivatives.The phenotype of CFM is highly variable and typically affects the external ear,middle ear,mandible and temporomandibular joint,and facial muscles on the affected side.Accompanied by craniofacial anomalies,cardiac,vertebral,and central nervous system defects may occur.Microtia is considered the minimum diagnostic criterion[1,2].

目的:鉴定并分析EFTUD2 (elongation factor Tu GTP-binding domain-containing 2)基因的启动子区域.方法:应用生物信息学技术对EFTUD2基因结构及潜在启动子区域进行分析,预测4个EFrUD2启动子序列.使用全基因合成技术以及高保真PCR扩增得到目的启动子序列,通过BglⅡ和Nhe Ⅰ双酶切,将目的条带克隆到双荧光素酶报告基因载体psiCHECK-2中,得到4个长度不同并覆盖EFTUD2基因转录起始位点附近约2 kb的EFTUD2基因启动子双荧光素酶报告基因重组体.荧光素酶分析检测启动子活性.结果:经酶切、测序鉴定,成功构建了人EFTUD2启动子荧光素酶报告基因重组质粒.通过荧光素酶活性检测,重组体EFTUD2-0.5的相对荧光素酶活性增加(P＜0.05),提示EFTUD2基因核心启动子序列位于转录起始位点附近约500 bp的区域内.结论:EFTUD2基因转录起始位点上游500 bp具有启动子活性,初步判定其核心启动子位于该区域.

目的 通过生物信息学方法分析含Tu GTP结合结构域延伸因子2(Eftud2)增强小鼠巨噬细胞免疫功能的作用机制.方法 分别收集10例Eftud2髓系细胞特异性敲除(MKO)小鼠及野生型(WT)小鼠骨髓来源巨噬细胞(BMDM),经100 ng/mL脂多糖(LPS)刺激2h.采用生物信息学方法对样本进行基因表达差异以及mRNA水平可变剪接差异的检测.分别利用RNA序列差异表达基因(DEGseq)软件包、复制转录本剪接多变量分析(rMATS)软件对两组小鼠BMDM样本中基因表达及可变剪接差异进行统计;利用京都基因与基因组百科全书(KEGG)分类与富集法统计两组小鼠BMDM样本中基因表达与可变剪接差异所影响的信号通路.结果 与WT小鼠相比,MKO小鼠的BMDM经LPS刺激后白细胞介素6(IL-6)、IL-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)及与免疫反应相关的基因显著下调;KEGG通路分析表明,BMDM基因表达差异及可变剪接差异主要影响信号转导及免疫系统相关代谢通路,且与磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3 K-AKT)信号通路相关性较强.其中可变剪接差异还存在于泛素化及细胞内吞作用中.与WT小鼠相比,MKO小鼠BMDM可变剪接差异共232处,其中跳过外显子的可变剪接共有125处,占比最多.此外,对可变剪接差异的分析也证实了前期实验结果,即Eftud2可通过影响Toll样受体4/核因子κB (TLR4/NF-κB)信号通路中髓样分化因子88(MyD88)等关键分子的可变剪接,调控相关炎性信号通路的激活,增强巨噬细胞的功能.结论 Eftud2通过影响基因的表达及可变剪接促进巨噬细胞释放炎性细胞因子,从而增强巨噬细胞免疫功能.

目的 体外建立一个以荧光素酶为报告基因,靶向人EFTUD2基因的化合物筛选细胞模型.方法 应用限制性内切酶双酶切LV6载体,将人EFTUD2pro-0.5kb启动子和荧光素酶报告基因的融合片段重组入LV6慢病毒载体.以重组慢病毒感染HepG2细胞,采用嘌呤霉素筛选和有限稀释法获得Epro-LUC-HepG2细胞株.利用荧光素酶报告基因系统挑选最佳单克隆细胞株并扩大培养.结果 准确构建了LV6-Epro0.5-LUC慢病毒载体,并成功筛选出可稳定表达荧光素酶的Epro-LUC-HepG2单克隆细胞株.根据荧光素酶报告基因检测结果,挑选了最佳克隆株细胞,被命名为Epro-LUC-HepG2细胞.结论 我们成功构建了以人EFTUD2基因为靶点的Epro-LUC-HepG2细胞化合物筛选模型,有助于后续筛选新型靶向免疫调节药物.