目的:评价Ras同源家族成员A(RhoA)在氢减轻脂多糖(LPS)致小鼠肺微血管内皮细胞屏障功能损伤中的作用。方法:小鼠肺微血管内皮细胞培养于含10%胎牛血清和1%青链双抗的DMEM/F12培养基中，传代至第4～6代的细胞用于实验，采用随机数字表法分为6组( n＝36)：对照组(A组)、富氢液组(B组)、LPS组(C组)、LPS＋富氢液组(D组)、LPS＋RhoA抑制剂C3酶组(E组)和LPS＋富氢液＋RhoA激活剂U-46619组(F组)。A组、C组和E组采用正常培养基培养，B组、D组和F组采用含饱和氢气培养基培养，C组、D组、E组和F组加入LPS，终浓度1 μg/ml；E组于加入LPS前2 h加入C3酶，终浓度3 μg/ml；F组于加入LPS前3 h加入U-46619，终浓度10 mg/ml。分别于LPS孵育后6、12和24 h时采用Western blot法检测血管内皮钙黏蛋白(VE-cadherin)和紧密连接蛋白(occludin)的表达；于LPS孵育后24 h时采用LDH法测定细胞LDH释放率，MTT法测定细胞活力，GST pull-down法测定RhoA活性。 结果:与A组比较，C组孵育6、12和24 h时occludin和VE-cadherin表达下调，孵育24 h时细胞活力降低，LDH释放率和RhoA活性升高( P<0.05)；与C组比较，D组孵育6、12和24 h时occludin和VE-cadherin表达上调，孵育24 h时细胞活力升高，LDH释放率和RhoA活性降低( P<0.05)；与C组比较，E组孵育6、12和24 h时occludin和VE-cadherin表达上调，孵育24 h时细胞活力升高，LDH释放率和RhoA活性降低( P<0.05)；与D组比较，F组孵育6、12和24 h时occludin和VE-cadherin表达下调，孵育24 h时细胞活力降低，LDH释放率和RhoA活性升高( P<0.05)。 结论:RhoA参与了氢减轻LPS致小鼠肺微血管内皮细胞屏障功能损伤的过程。

目的:探讨应用细胞分裂周期蛋白42（CDC42）对胰腺癌动脉灌注化疗效果及预后评估的价值。方法:回顾性分析2018年1月至2020年1月芜湖市第二人民医院收治的100例行动脉灌注化疗的胰腺癌患者的临床资料。根据CT检查判定的化疗效果分为有效组（完全缓解+部分缓解）和无效组（疾病稳定+疾病进展），比较两组患者的临床病理特征。采用多因素logistic回归模型分析患者化疗效果的影响因素。以CT检查评估的疗效为金标准，采用受试者工作特征（ROC）曲线分析灌注化疗前CDC42水平对胰腺癌患者动脉灌注化疗效果的预测价值。生存分析采用Kaplan-Meier法，并进行log-rank检验。结果:100例胰腺癌患者中，完全缓解13例，部分缓解30例，疾病稳定20例，疾病进展37例；有效组43例，无效组57例。无效组中肿瘤长径>4 cm、TNM分期Ⅲ~Ⅳ期及灌注前糖类抗原199（CA199）>37 U/ml、癌胚抗原（CEA）>5 ng/ml、中性粒细胞与淋巴细胞比值（NLR）>2.8、血清总胆红素>34.2 μmol/L、CDC42≤1.11 μg/L、分化程度低以及有血管侵犯的患者比例均较有效组高（均 P<0.05）。肿瘤长径>4 cm、TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、灌注前CA199>37 U/ml、灌注前CEA>5 ng/ml、分化程度低、有血管侵犯以及CDC42≤1.11 μg/L是动脉灌注化疗有效的独立危险因素（均 P<0.05）。依据CDC42预测胰腺癌患者动脉灌注化疗无效的ROC曲线下面积为0.810（95% CI 0.781~0.839， P<0.01），最佳临界值为1.11 μg/L，灵敏度为96.25%，特异度为63.13%。CDC42>1.11μg/L患者2年总生存率为58.93%，CDC42≤1.11 μg/L患者为22.73%，差异有统计学意义（ χ2=14.99， P<0.001）。 结论:CDC42水平是胰腺癌患者动脉灌注化疗效果的独立影响因素，对预测患者预后有一定价值。

目的:评价七氟烷麻醉诱发新生大鼠远期学习记忆能力障碍与突触后致密蛋白95(PSD-95)/Kalirin-7/Ras相关的C3肉毒杆菌毒素底物1(Rac1)信号通路的关系。方法:SPF级雄性Wistar大鼠60只，7日龄，体重12~18 g，采用随机数字表法为分为5组( n＝12)：对照组(C组)、1%七氟烷麻醉2 h组(S 1组)、1%七氟烷麻醉4 h组(S 2组)、2%七氟烷麻醉2 h组(S 3组)和2%七氟烷麻醉4 h组(S 4组)。麻醉后第4、8和12周行Morris水迷宫实验。末次Morris水迷宫实验完成后，处死大鼠，取海马组织，HE染色观察病理学结果，TUNEL染色计算神经元凋亡率，分别采用Western blot法和qRT-PCR法检测PSD-95、Kalirin-7和Rac1及其mRNA的表达。 结果:与C组比较，麻醉后第4、8和12周S 1组、S 2组、S 3组、S 4组逃避潜伏期延长，穿越原平台次数减少，目标象限停留时间缩短，海马神经元凋亡率升高，磷酸化Rac1/Rac1比值降低，PSD-95、Kalirin-7及其mRNA表达下调( P<0.05)；与S 4组比较，S 1组、S 2组、S 3组逃避潜伏期缩短，穿越原平台次数增多，目标象限停留时间延长，海马神经元凋亡率降低，磷酸化Rac1/Rac1比值升高，PSD-95和Kalirin-7及其mRNA表达上调( P<0.05)，海马组织病理改变程度减轻。 结论:七氟烷麻醉诱导新生大鼠远期学习记忆能力障碍的机制可能与抑制海马PSD-95/Kalirin-7/Rac1信号通路活性有关。

目的:评价乳脂肪球表皮生长因子Ⅷ(MFG-E8)介导的胞葬与小鼠脓毒症相关性脑病的关系。方法:清洁级健康雄性C57BL/6小鼠40只，2～3月龄，体重18～22 g，采用随机数字表法分为4组( n＝10)：假手术组(Sham组)、盲肠结扎穿孔(CLP)组、假手术+PBS组(Sham+PBS组)和CLP+鼠重组MFG-E8组(CLP+rmMFG-E8组)。采用CLP法制备小鼠脓毒症相关性脑病模型。Sham+PBS组、CLP+rmMFG-E8组术后连续5 d于侧脑室分别注射PBS 1 μl、rmMFG-E8 1 μg。术后第6天行新物体识别实验，第7、8天行条件恐惧实验，计算小鼠新物体探索时间百分比、辨别指数及条件恐惧僵直反应时间。行为学测试结束后处死小鼠，提取海马组织，采用Western blot法检测MFG-E8、Ras相关C3肉毒素底物1的GTP结合蛋白(GTP-Rac1)表达水平，RT-PCR法检测IL-6、TNF-α及IL-1β的mRNA表达水平，TUNEL荧光法确定细胞凋亡率。 结果:与Sham组比较，CLP组新物体探索时间百分比、辨别指数和僵直反应时间百分比降低，海马MFG-E8表达下调，GTP-Rac1表达上调，IL-6、TNF-α及IL-1β的mRNA表达上调，细胞凋亡率升高( P<0.05)；与CLP组比较，CLP+rmMFG-E8组新物体探索时间百分比、辨别指数和僵直反应时间百分比升高，海马MFG-E8、GTP-Rac1表达上调，IL-6、TNF-α及IL-1β的mRNA表达下调，细胞凋亡率降低( P<0.05)。 结论:海马MFG-E8介导的胞葬作用减弱可能参与小鼠脓毒症相关性脑病的病理生理机制。

[目的]探讨GTP酶激活蛋白SH3功能区结合蛋白1(G3BP1)在非小细胞肺癌(NSCLC)患者组织中的表达及其与放疗疗效的关系.[方法]检测133例NSCLC患者组织中G3BP1蛋白表达水平,并分析其与NSCLC临床病理参数及放疗疗效的关系.[结果]NSCLC患者组织中G3BP1蛋白水平在不同肿瘤直径、TNM分期及淋巴结转移患者中比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).有效组NSCLC组织中G3BP1蛋白水平低于无效组,差异有统计学意义(P＜0.05).G3BP1评价疗效的受试者工作特征(ROC)曲线下面积(AUC)、最佳截断值、敏感度和特异度分别为0.802、2.33、86.54％和61.73％.Logistic多因素回归分析结果显示:肿瘤直径、TNM分期、淋巴结转移、急性放射性肺炎及G3BP1水平是影响NSCLC放疗疗效的独立危险因素(P＜0.05).[结论]G3BP1与NSCLC肿瘤直径、TNM分期及淋巴结转移有关,其水平可为评价患者的放疗疗效提供参考.

目的 发现更多表达小G蛋白ARL8B而ARL8A无表达的肿瘤细胞系,以扩大ARL8B在抗肿瘤药物研究中的应用范围.方法 利用实时荧光定量PCR法测定一些肿瘤细胞系中的ARL8B/ARL8A的相对表达量;以ARL8A和ARL8B都表达的细胞系作对照,对新发现的只表达ARL8B的肿瘤细胞系实施siRNA降低ARL8B表达量,用CCK8法检测ARL8B表达量被降低后的细胞活力变化;用Western blot考察ARL8B表达量降低诱导肿瘤细胞凋亡的原因.结果 发现MGC-803细胞表达ARL8B而ARL8A无表达,胃癌细胞系BGC-823和MKN-45均表达ARL8A和ARL8B.ARL8B被敲低后MGC-803细胞出现了明显的凋亡,BGC-823和MKN-45细胞无明显的凋亡出现.细胞自噬水平显著提高是引起细胞凋亡的原因.结论 MGC-803细胞系来源于胃低分化黏液样腺癌患者,是新发现的表达ARL8B而ARL8A无表达的肿瘤细胞系,降低ARL8B表达能导致明显的细胞凋亡,提示ARL8B是抗胃低分化黏液样腺癌潜在的药物作用靶标.

目的 观察实验性脉络膜新生血管(CNV)中Rap1、鸟苷三磷酸-Rap1(GTP-Rap1)、血管内皮生长因子(VEGF)及β-连环蛋白(β-catenin)的表达.方法 42只棕色挪威大鼠随机分为空白对照组、模型组,分别为7、35只;均双眼入组.模型组大鼠氪离子激光光凝建立CNV模型.光凝后3、7、14、21、28 d行荧光素眼底血管造影(FFA)、脉络膜血管铺片检查,观察光凝后不同时间大鼠荧光素渗漏程度以及CNV面积的变化.蛋白免疫印迹法(Western blot)、实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测CNV中Rap1、GTP-Rap1、VEGF、β-catenin蛋白和mRNA表达.结果 FFA检查结果显示,光凝后14d,光凝斑出现大片圆盘状荧光素渗漏.激光共聚焦显微镜观察发现,与光凝后7d时CNV面积比较,光凝后14、21、28d时CNV面积增加,差异均有统计学意义(t=3.725、5.532、3.605,P＜0.05).Westemblot检测结果显示,与空白对照组比较,光凝后不同时间点,CNV中Rap1蛋白相对表达量差异均无统计学意义(P=0.156);GTP-Rap1蛋白相对表达量显著降低,VEGF、β-catenin蛋白相对表达量明显增高,差异均有统计学意义(P=0.000).RT-PCR检测结果显示,与空白对照组比较,光凝后不同时间点,CNV中Rap1 mRNA相对表达量差异无统计学意义(P=0.645);β-catenin mRNA相对表达量差异均有统计学意义(P=0.000).7、14、21、28 d,GTP-Rap1、VEGF mRNA相对表达量差异均有统计学意义(P=0.000).结论 实验性CNV中GTP-Rap1表达较正常大鼠明显减少.

目的 研究ω-3多不饱和脂肪酸(PUFAs)对裸鼠体内胃癌细胞生长的影响及其是否通过RHO-ROCK1信号通路发挥作用.方法 将16只BALB/C系裸鼠皮下注射SGC7901细胞建立荷瘤鼠模型后,随机分为两组,分别为灌胃ω-3 PUFAs药物干预组和灌胃生理盐水对照组,观察移植瘤生长情况及其形态学变化,qPCR检测肿瘤组织RHOA、RHOC及ROCK1 mRNA表达水平,免疫荧光和Western blot法分别检测RHOA、RHOC及ROCK1蛋白表达情况.结果 药物干预组肿瘤体积和重量小于生理盐水组(抑制率为13.63％),但差异无统计学意义(P＞0.05);HE染色结果显示药物干预组相比于生理盐水组,肿瘤组织坏死呈多灶状、坏死区域炎症细胞浸润、细胞排列疏松、部分细胞肿胀呈空泡状;qPCR和Western blot结果显示药物干预组RHOA及ROCKl mRNA和相应蛋白表达量显著减少(P＜0.05);免疫荧光结果显示药物干预组相比生理盐水组RHOA、RHOC及ROCK1蛋白表达量亦减少,趋势与mRNA结果一致.结论 ω-3 PUFAs对裸鼠体内胃癌生长的影响可能是通过影响RHOA、RHOC及ROCK1的表达,从而抑制胃癌细胞的过度增殖,导致肿瘤组织坏死.

目的 探讨RhoA蛋白和驱动蛋白KIf2A在卵巢癌组织中的表达及临床意义.方法 采用免疫组织化学法检测正常卵巢组织20例、卵巢上皮良性肿瘤25例以及卵巢癌45例中的KIf2A、RhoA蛋白表达,观察RhoA、KIf2A在3组中的表达情况,分析其表达与临床病理特征的关系及两者间的相关性.结果 与卵巢上皮良性肿瘤、正常卵巢组织比较,卵巢癌组织中KIf2A、RhoA蛋白的阳性表达率更高(P<0.05);正常卵巢组织与卵巢上皮良性肿瘤间的表达比较差异无统计学意义(P>0.05).卵巢癌分期、淋巴结转移与KIf2A蛋白的表达密切相关(P<0.05);与组织学分级、病理类型以及年龄无关(P>0.05).淋巴结转移、组织学分级与RhoA蛋白表达密切相关(P<0.05);与病理类型、临床分期以及年龄无关(P>0.05).KIf2A、RhoA在卵巢癌中的表达呈正相关(r=0.801,P<0.05).结论 KIf2A、RhoA蛋白在卵巢癌组织中高表达;两者可能共同参与卵巢癌的发生、发展过程,为临床靶向治疗卵巢癌提供新思路.

血管内皮屏障功能的受损涉及到多种病理生理状态的发生与进展,血管内皮屏障的完整性受到细胞骨架及细胞间连接的调控,而Rho-GTP酶在其中起着核心作用.目前已经发现RhoA、Rac1、Cdc42、RhoB参与调节血管内皮屏障功能.这些Rho-GTP酶在血管内皮屏障功能的调节中有着双重作用,与其亚细胞定位密切相关.当炎症因子作用于血管内皮细胞,RhoA广泛分布于细胞各处引起微丝聚集,产生急性细胞收缩破坏血管内皮屏障.在新生血管内皮细胞中,RhoA则大量聚集于细胞膜附近,参与细胞间连接的产生与成熟.Rac1及Cdc42在静息状态下能够降低丝切蛋白的活性,减少细胞膜附近细胞骨架重构,参与维持血管内皮屏障的稳定.而Cdc42在血管内皮完整性受损时能够迅速聚集于细胞皮质处,活化肌球蛋白Ⅱ,促进黏合连接的生成,参与早期血管内皮屏障完整性的恢复.本文就Rho GTP酶对血管内皮屏障完整性的调节进行概述.