Gag-Pol蛋白是人类免疫缺陷病毒(HIV)重要结构蛋白之一,其组成成分包含了 HIV的基本骨架蛋白和生命周期中所需要的功能酶,目前以Gag-Pol上不同的功能区为靶点开发的抑制剂包括衣壳(CA)抑制剂、蛋白酶抑制剂、逆转录酶抑制剂和整合酶抑制剂等.CA抑制剂通过抑制CA的成熟或者破坏CA的组装进而影响HIV复制.蛋白酶抑制剂主要的作用机制是抑制蛋白酶对切割位点CA-间隔多肽1(SP1)的切割,逆转录酶抑制剂通过模仿逆转录底物,阻断HIV的逆转录过程,整合酶抑制剂通过靶向整合酶活性中心—锌指结构影响整合酶活性.本文总结了针对HIV Gag-Pol蛋白的抑制剂及其作用机制,并对已批准上市成药的用法用量进行综述,为今后临床联合用药和针对HIV Gag-pol蛋白的新型抑制剂开发提供参考.

目的 了解广东省HIV-1 CRF07_BC病毒株gag-pol基因的遗传变异特征.方法 收集广州市第八人民医院2015年2月至9月78例CRF07_BC基因亚型HIV感染者抗病毒治疗前血浆,提取病毒RNA,反转录套式PCR扩增并拼接获得病毒gag和pol区基因序列.对获得的序列进行进化树、基因离散率、核苷酸多态性、选择压力和变异特征分析.结果 人群主要传播途径为同性传播(80.77％,63/78),gag-pol基因进化树分成两个亚簇,不同传播途径毒株没有完全成簇聚集.gag基因平均基因离散率及平均熵值均大于pol基因.gag基因的p17区和p6区的平均基因离散率及平均熵值均大于p24区;pol基因的pr区平均基因离散率及平均熵值均大于rt区.gag和pol基因的平均ds/dn值均＞1.将GAG区共享序列与选取的我国常见HIV相关抗原表位(A2、A11、B39、B60两个、Cw1、Cw3、Cw8)比较,发现P17区CTL抗原表位突变多于P24区CTL抗原表位.表位保守率分别为26.92％、0、1.28％、0、96.15％、82.05％、84.62％和98.72％.对pol区基因序列进行HIV耐药性分析,耐药突变发生率为2.56％(2/78).结论 广东省CRF07_BC毒株的gag和pol基因均发生突变.gag基因变异度大于pol基因,且gag基因的变异主要体现在p17和p6区;gag和pol基因均受负向选择压力;P17蛋白CTL抗原表位变异度大于P24蛋白抗原表位;耐药突变发生率低于警戒线,可以继续监测耐药毒株传播情况.

目的 通过比较母婴的Ⅰ型艾滋病病毒(HIV-1)的准种特征,了解病毒垂直传播的规律,并分析三联用药对婴儿体内病毒进化产生的影响.方法 收集1例HIV阳性母亲及其所生新生儿各时间点的血液样本,提取全血和血浆中的脱氧核糖核酸(DNA)、核糖核酸(RNA),经聚合酶链反应(PCR)扩增出HIV-1编码核心蛋白(env)、包膜蛋白(gag)以及多聚酶(pol)的基因片段,进行定性定量、基因亚型和耐药分析;Hiseq高通量测序用来分析各样本准种分布和变化情况.结果 新生儿系列样本核酸检测结果均为阳性,母婴两者感染的HIV-1亚型为重组亚型(CRF08BC),均未检测到耐药突变株,且产时母婴血浆样本内病毒载量分别为68 700拷贝/mL和102 000拷贝/mL.所有样本经高通量测序后,母亲样本三区内的基因离散率都大于新生儿,但二者样本间的基因离散率均＜1.09％.三区系统进化树显示,新生儿体内的优势准种均来自母亲.新生儿产后样本中:前42天基因离散率稳定,三月龄时离散率开始升高,六月龄时离散率回落;样本内的基因离散率均＜0.85％,与基线样本间的基因离散率均＜0.81％.pol区系统进化树显示相对明显的进化关系.结论 母亲与新生儿感染的HIV-1病毒属当地流行亚型,两者有传播关系,新生儿感染了母亲全血样本内的多数优势准种.新生儿三月龄后病毒准种呈现波动性变化,说明抗病毒治疗能影响体内优势准种的分布,但由于样本时间间隔短,系统进化树分析准种进化的能力有限.

目的 分析2010—2017年丹东地区艾滋病病毒(HIV)1/2抗体蛋白印迹试验(WB)阳性样本的带型分布规律,为制定该地区切实有效的艾滋病防控措施提供科学依据.方法 采用WB对2010—2017年500份HIV-1抗体筛查阳性样本进行确证检测,并对WB带型进行统计分析.结果 500份HIV-1抗体阳性样本中,WB带型组合为全带型和次全带的占90.0％(450份);抗env、抗pol基因编码的抗体条带和抗gag基因编码的p24检出率均超过93.0％,p55和p17检出率分别为68.8％和85.2％.感染者以男性居多,p24在不同性别中检出率的差异有统计学意义(χ2=6.706,P<0.05);抗env基因编码的抗体在各个年龄组的检出率差异均无统计学意义(P＞0.05),抗pol基因编码的抗体在各个年龄组的检出率差异均有统计学意义(P<0.05),抗gag基因编码的抗体除p55外,p24和p17在各个年龄组的检出率差异均有统计学意义(P<0.05).结论 该地区大部分感染者在艾滋病期前被及时发现,中青年人群为该地区HIV感染的高危人群,应重点防控.

目的 了解丹东地区新发现艾滋病病毒Ⅰ型(HIV-1)阳性者的疾病进程,探讨不同疾病进程阶段蛋白印迹试验(WB)带型的特点.方法 采用流式细胞仪检测CD4+T淋巴细胞(简称CD4细胞)计数,根据CD4细胞计数结果进行临床分期,对不同疾病期感染者组的WB特异性条带检出率及带型进行统计分析.结果 对2016-2017年新发现的175例HIV-1阳性者中,WB特异性条带gp160、gp120、gp41、p66、p31及p24检出率均为100％,p51为95.43％,p17为86.29％,p55为64.57％.p51检出率在3组间差异无统计学意义(P＞0.05),p17和p55在艾滋病(AIDS)期的检出率与原发感染组和感染中期组的差异均有统计学意义(P＜0.05).WB带型共出现6种类型:①全带型(未缺失),②缺失p55,③缺失p55+p17,④缺失p55+p51,⑤缺失p17,⑥缺失p55+p51+ p17,各类型所占比例分别为60.57％(106人)、22.29％(39人)、8.57％(15人)、3.43％(6人)、4.00％(7人)、1.14％(2人);①全带型出现率在AIDS期组、原发感染组和感染中期组的差异均有统计学意义(x2=I0.817,p=0.001;x2=8.805,P=0.003),②次全带(缺失p55)出现率在3组间差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 env带型和pol带型的出现率不受疾病病程的影响;gag带型p55和p17的转阴可以作为疾病发展为艾滋病期的一个潜在判别依据.

目的 回顾性分析2014-2015年广西医科大学第一附属医院艾滋病确证实验室艾滋病病毒(HIV)抗体初筛阳性标本的确证实验结果,探讨蛋白印迹试验(WB)带型与HIV感染的关系.方法 对送至本实验室的917例HIV抗体筛查阳性标本,经WB确证后阳性及不确定结果进行整理,用SPSS 17进行统计分析.结果 初筛阳性标本中,确证阳性855例,阳性率93.2％,确证阴性43例,阴性率4.7％,不确定结果19例,占筛查阳性的2.1％.确证阳性标本中,env类带型阳性率最高,其中gp160最高为100.0％,p55阳性率最低,占38.6％;不确定者中,共有8种带型,gp160p24带型出现最多占31.6％;随访的14例不确定者中,env类不确定带型阳转率最高.HIV-1抗体阳性WB带型分布在不同性别间差异无统计学意义,pol基因编码的p31(x2=9.48,P=0.02)及gag基因编码的p55(x2=12.45,P＜0.01)、p17(x2=8.57,P=0.03)和p39(x2=11.41,P＜0.01)蛋白阳性率在不同年龄组人群间差异有统计学意义.结论 env类条带对于HIV阳性的确证具有重要意义;不确定带型中env类最常见,阳转率也最高,应谨慎处理,加强随访;WB带型分布的差异可能有助于流行病学追踪和病原学诊断,应及时对实验室检测数据进行整理分析,提高实验室检测效率.

目的 对新发HIV-1感染者血清S/CO值、WB条带及CD4+T淋巴细胞计数进行分析,探讨HIV-1新发感染者的带型特征及免疫状况的相关性.方法 纳入2010年1月-2018年1月检测的新发HIV-1感染者108例,ELISA检测HIV-1抗体S/CO值,WB蛋白印迹实验检测HIV-1抗体带型,流式细胞仪计数CD4+T淋巴细胞,对所得结果进行统计学分析.结果 同免疫状态组感染者的WB条带中,膜蛋白(ENV)及酶蛋白(POL)的出现率较高,而核心蛋白(GAG)的p55、p39、p17出现率较低.其中,p24、p39、p17出现率在不同免疫状态组中差异有统计学意义(P＜0.05).新发感染者WB条带的单因素和多因素Logistic回归分析表明p17、p51和gp41条带缺失与HIV-1新发感染者相关(P＜0.05).结论 HIV-1感染者血清S/CO值与机体免疫状态无明显相关性,而WB带型与机体免疫状态存在相关性.WB检测结果缺失p17、p51和gp41时应高度怀疑其为HIV-1新发感染.

目的 了解2016年至2017年哈尔滨地区男男性行为人群(men who have sex with men,MSM)流行的人类免疫缺陷病毒1型(human immunodeficiency virus type 1,HIV-1)的亚型分布及原发耐药流行特点.方法 收集哈尔滨市传染病院和哈尔滨医科大学附属第四医院60的新诊断的MSM途径HIV-1感染者未经抗逆转录病毒治疗(antiretroviral therapy,ART)的外周血样本,提取血浆中RNA,逆转录PCR和巢式PCR扩增HIV-1的gag、pol、int片段并纯化和测序.应用Mega 6.0软件构建系统进化树并分析病毒亚型.利用美国斯坦福大学HIV耐药检测系统分析耐药突变的种类和频率.结果 成功获得50条gag基因序列、56条pol基因序列和44条int基因序列.亚型分析结果显示:CRF01_AE、CRF07_BC、B亚型和独特重组型(unique recombinant form,URF)分别占比为59.7％(34/57)、26.3％(15/57)、3.5％(2/57)和10.5％(6/57).本研究共发现7份(12.5％)样本存在耐药突变,其中针对非核苷类逆转录抑制剂的耐药位点V179D/E/T频率最高为8.75％(5/56),此外还发现蛋白酶抑制剂耐药位点Q58E(1/56)和M46I(1/56)突变.未发现针对核苷类逆转录酶抑制剂和整合酶抑制剂的耐药突变位点.结论 哈尔滨地区部分新诊断的MSM途径HIV-1感染者中以CRF01_AE亚型比例最多,其次为CRF07_BC和CRF01_AE与其他亚型重组株,耐药株所占比例较高,未发现整合酶抑制剂耐药突变.

内源性逆转录病毒(ERV)是插入到宿主基因组中的、可以稳定遗传的病毒基因组,能够在宿主体内表达和复制,调节插入位点附近的基因表达,以及抑制同源病毒的感染.从四川山鹧鸪Arborophila rufipectus基因组中确定了3 962个全长ERV拷贝,其中4个具有完整的结构,72个具有自我复制的能力,554个含有gag、pol或env基因所编码的蛋白质结构域.根据逆转录酶序列的相似性,确定了7个ERV家族,并依据与其他物种的相似性对家族进行了命名.其中,AruERV-L包含122个ERV拷贝,为拷贝数最多的家族.7个ERV家族的年龄分布在0～ 12百万年,其中AruERV-K1是最年轻的家族,其约86％的拷贝年龄在1百万年以内.