目的:探讨利拉鲁肽(lira)对棕榈酸(PA)所致H9C2大鼠心肌细胞脂毒性损伤的干预效果及其相关机制.方法:在不同浓度的PA(0、50、100、150、200、300 μmol/L)和不同时间(6、12、24h)的条件下分别刺激H9C2大鼠心肌细胞(n=3),建立心肌细胞的脂毒性损伤模型,使用CCK8检测确定使H9C2细胞脂毒性损伤较大、细胞存活数最多的刺激条件.将成功建立模型的H9C2细胞分为对照组(CON)、CON+Lira(1 000 nmol/L)组、CON+PA(150 μmol/L)组和 PA(150 μmol/L)+Lira(1 000 nmol/L)组进行油红O染色(n=3),检测细胞内脂质含量,以明确PA(150 μmol/L)对心肌细胞有无脂毒性.将H9C2细胞根据不同的PA浓度(0、50、100、150、200、300 μmol/L)分为 6 个组(CON、PA1、PA2、PA3、PA4 和 PA5)(n=3),按照不同的 Lira 浓度分为 6 组:CON 组、PA 组(150 μmol/L)、CON+Lira3(1 000 nmol/L)组、PA(150 μmol/L)+Lira1(100 nmol/L)组、PA(150 μmol/L)+Lira2(500 nmol/L)组和PA(150 μmol/L)+Lira3(1 000 nmol/L)组(n=3),用蛋白印迹测定凋亡相关蛋白的表达量及其与PA、Lira浓度的关系.结果:使用CCK8检测并最终确定PA为150 μmol/L、刺激12 h的条件下,H9C2细胞的脂毒性损伤较大、细胞存活数最多.与CON组相比,PA组(150 μmol/L)的细胞活性明显下降、脂滴明显增加(t=34.53,P＜0.05),经lira预处理后脂滴明显减少(t=19.07,P＜0.05);与CON组相比,随着PA浓度的增加,Bax、Caspase-3蛋白表达明显增加(F=12.32、3.307,均P＜0.05),Bcl-2蛋白表达明显减少(F=7.618,P＜0.05);与 PA 刺激组(150 μmol/L)相比,lira 预处理可以使 Bcl-2 蛋白表达明显增加(F=7.104,P＜0.05,),Bax、Cas-pase-3蛋白表达明显减少(F=12.32、7.104,均P＜0.05).结论:浓度为150 μmol/L的PA刺激H9C2心肌细胞12 h后可造成心肌细胞脂毒性损伤模型,lira可以改善甚至逆转PA诱导的H9C2心肌细胞脂毒性损伤,其机制可能与抑制炎症、抑制细胞凋亡有关.

目的 设计通用甲型流感病毒DNA疫苗,并检测其在小鼠体内的免疫效力.方法 合成含H1N1、H3N2、H9N2亚型甲型流感病毒M2(3M2e)胞外结构域的DNA序列,克隆至载体pVAX1中,构建真核表达质粒pVAX1-3M2e.将质粒pVAX1-3M2e分别与细胞穿透肽(cell penetrating peptides,CPPs)RVG9dR、Protamine、RVG9dR+Protamine 多肽复合物(质量分数1∶1)按不同质量分数混合(1∶0.5、1∶1、1∶2、1∶4、1∶8),进行凝胶阻滞试验,以确定DNA与CPPs的正确结合;并通过细胞荧光试验在细胞水平(293T细胞)检测CPPs的递送效率.选择RVG9dR+Protamine递送质粒pVAX1-3M2e经肌内免疫雄性BALB/c小鼠(多肽复合物两种剂量:25 μg pVAX1-3M2e+500 μg多肽复合物、50 μg pVAX1-3M2e+1000 μg多肽复合物,每组8只小鼠),检测通用甲型流感病毒DNA疫苗对3种亚型流感病毒(H1N1、H3N2、H9N2)的交叉保护作用.结果 DNA与RVG9dR、Protamine、RVG9dR+Protamine的最佳结合比分别为1∶2、1∶2、1∶1;RVG9dR+Protamine在1:20的质量分数下对质粒pVAX1-3M2e具有超强的递送效率;50 μg pVAX1-3M2e+1 000 μg多肽复合物对3种亚型流感病毒攻毒组小鼠的保护率均为100％.结论 由RVG9dR+Prot-amine多肽复合物递送的质粒pVAX1-3M2e在小鼠中提供了针对3种亚型甲型流感病毒的交叉保护.

目的:本研究旨在探讨乳酸化修饰在脓毒症心肌病中的作用，并深入研究调控乳酸化修饰对脓毒症心肌病心功能及预后的影响。方法:将80只C57BL/6小鼠分为等渗NaCl溶液对照组（Ctrl组）、紫草素对照组（Shik组）、模型组[脂多糖（LPS）组]、LPS +紫草素组（LPS + Shik组）和LPS +紫草素+乳酸组（LPS + Shik + Lac组），每组各16只。LPS组、LPS + Shik组、LPS + Shik + Lac组通过腹腔内注射LPS（5 mg/kg）制备脓毒症心肌病小鼠模型；Ctrl组和Shik组小鼠根据体质量分别注射等渗NaCl溶液（5 mg/kg）和紫草素（8 mg/kg）。LPS + Shik组于LPS处理前1 h腹腔注射紫草素（8 mg/kg）；LPS + Shik + Lac组于LPS处理前1 h腹腔注射紫草素（8 mg/kg），并在LPS腹腔给药后6 h给予乳酸（pH 6.8，0.5 g/kg）。LPS注射后16 h，每组5只小鼠用于检测心功能，收取心脏组织进行乳酸化修饰蛋白的免疫印迹分析，检测各组小鼠烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化态（NAD+）及其还原态（NADH）和三磷酸腺苷（ATP）水平。每组另外11只在LPS给药后7 d内密切观察并记录小鼠死亡情况。此外，将6只C57BL/6小鼠分为Ctrl组和LPS组，每组各3只。在LPS注射后16 h，采集两组小鼠心脏样本分析心肌乳酸化修饰蛋白及位点。结果:5组小鼠赖氨酸乳酸化（Kla）、左心室射血分数（LVEF）、短轴缩短率（FS）、NAD+、NAD+/NADH及ATP比较，差异均有统计学意义（F = 58.745、10.560、12.372、21.347、16.407、32.163，P均< 0.001）。与LPS组比较，LPS + Shik组Kla水平显著降低，LVEF、FS、NAD+、NAD+/NADH及ATP显著升高；与LPS + Shik组比较，LPS + Shik + Lac组Kla水平显著升高，LVEF、FS、NAD+、NAD+/NADH及ATP则显著降低（P均< 0.05）。LPS给药后7 d，5组小鼠分别死亡0、0、9、3、10只。LPS组、LPS + Shik组和LPS + Shik + Lac组小鼠死亡情况比较，差异具有统计学意义（χ2 = 11.717，P = 0.003）。且LPS + Shik组小鼠的7 d死亡情况显著低于LPS组，LPS + Shik + Lac组小鼠的7 d死亡情况则显著高于LPS + Shik组（P均< 0.017）。与对照组相比，模型组小鼠心脏组织中分别有105个差异乳酸化蛋白（DLPs）和191个修饰位点上调，10个DLPs和10个修饰位点下调，其中68.70%的DLPs定位在线粒体中且主要涉及代谢。结论:乳酸化修饰在脓毒症心肌病中发挥重要作用，机制可能与线粒体能量代谢功能紊乱有关，乳酸化修饰可能是脓毒症心肌病治疗的潜在靶点。

目的 探讨水飞蓟宾对乙醇诱导状态下H9c2心肌细胞氧化应激损伤的保护效应.方法 实验中,将H9c2心肌细胞随机分为对照组、乙醇组(500 mmol/L)以及水飞蓟宾(50 μmol/L、100 μmol/L)+乙醇组.经过药物干预后,观察细胞形态,使用细胞计数试剂盒(CCK8)试剂盒检测细胞存活率,流式细胞术测定细胞内活性氧(ROS)含量、细胞凋亡以及线粒体膜电位变化;测定细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性和丙二醛(MDA)含量;检测细胞中过氧化氢酶(CAT)、抗氧化酶超氧化物歧化酶(SOD)以及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性.结果 乙醇组的H9c2心肌细胞形态异常,存活率显著降低,细胞凋亡率升高,线粒体膜电位降低,细胞内ROS增加;细胞培养液中LDH活性和MDA含量显著升高,细胞中抗氧化酶物质活性显著降低.相比于乙醇组,水飞蓟宾(100μmol/L)+乙醇(500mmol/L)组H9c2心肌细胞形态改善,存活率显著提高,凋亡率显著降低,线粒体膜电位的降低有所改善,培养液中LDH活性和MDA含量显著降低,细胞中抗氧化酶活性显著升高,细胞内ROS显著降低,差异均具有统计学意义.结论 H9c2心肌细胞经乙醇诱导构建氧化应激损伤模型,水飞蓟宾作用后在细胞形态、细胞存活率和凋亡率以及抗氧化酶活性改善等方面表现出明显的保护效应.

目的:探讨熊果酸对H9C2心肌细胞H2O2过氧化损伤的保护作用及其与热休克蛋白(HSPs)的表达的相关性.方法:采用H2O2诱导H9C2心肌细胞氧化应激模型,实验分为正常对照组(Control)、H2O2组(H2O2)、熊果酸+H2O2组(Ursolic Acid,UA).CCK8检测各组细胞活力值,ELISA法检测培养基上清液 HSP27、HSP70、HSP90 含量,Western blot 检测各组细胞 HSP27、HSP70、HSP90、HSF1 蛋白表达水平.结果:与正常对照组相比,H2O2组细胞活力值降低,HSP27、HSP70、HSP90含量及HSP27、HSP70、HSP90、HSF1的表达水平上升(均P＜0.05);与H2O2组相比,熊果酸+H2O2组细胞活力值升高,HSP27、HSP70、HSP9 0含量及HSP27、HSP70、HSP90、HSF1的表达水平上高(均P＜0.05).结论:熊果酸可以通过促进HSPs的表达提高H9C2心肌细胞的抗氧化能力从而发挥对H2O2过氧化损伤的保护作用.

[目的]探讨葛根芩连汤联合硫辛酸治疗糖尿病周围神经病变(DPN)患者的临床疗效及对患者血清神经营养因子、糖化血红蛋白(HbA1c)水平的影响.[方法]选取2021年9月至2023年3月在滑县焦虎镇卫生院和安阳市人民医院就诊的84例DPN患者,按照随机数字表法分为对照组和观察组,每组42例.两组均给予常规治疗,对照组同时给予硫辛酸治疗,观察组在对照组基础上联合葛根芩连汤治疗.比较两组治疗前后中医证候积分、神经传导速度[运动神经传导速度(MNCV)、感觉神经传导速度(SNCV)]、神经营养因子[神经生长因子(NGF)、血清胰岛素样生长因子1(IGF-1)、脑源性神经营养因子(BDNF)]水平、血糖[糖化血红蛋白(HbA1c)、空腹血糖、餐后2 h血糖]水平、症状评分[多伦多临床系统(TCSS)评分、密歇根糖尿病神经病变评分(MDNS)]及不良反应发生率.[结果]治疗后,观察组中医症候积分均显著低于对照组(P＜0.05).观察组MNCV、SNCV及血清NGF、IGF-1和BDNF水平均高于对照组(P＜0.05).观察组患者空腹血糖、餐后2 h血糖、HbA1c水平均低于对照组(P＜0.05).观察组TCSS评分和MDNS均低于对照组(P＜0.05).两组治疗期间不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P＞0.05).[结论]葛根芩连汤联合硫辛酸治疗DPN患者,可有效改善患者神经功能,调节血糖代谢,促进神经修复,提高患者生活质量.

目的 观察补肾活血方(BSHXF)含药血清对脂多糖(LPS)诱导的软骨细胞炎症及凋亡的影响,探讨BSHXF治疗骨关节炎的作用机制.方法 制备空白血清及BSHXF含药血清.采用LPS诱导C28/I2人正常软骨细胞,构建软骨细胞炎症模型.将细胞分为空白组、LPS模型组、LPS+BSHXF组,空白组以含10％空白血清的培养基培养,LPS模型组以含10μmol·L-1 LPS和10％空白血清培养基培养,LPS+BSHXF组以含10 μmol·L-1 LPS和10％含药血清培养基培养.各组均干预48 h后,CCK-8法检测细胞活力,LDH法检测细胞毒性,ELISA法检测细胞培养基上清液中IL-6、iNOS和COX2的水平,TUNEL染色法检测细胞凋亡情况,Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白Cleaved-Caspase-9、Bcl-2、Bax的表达及核转录因子-κB(NF-κB)信号通路关键蛋白p-IκBα、IκBα、p-p65、p65的表达.结果 与空白组相比,LPS模型组软骨细胞活力降低,细胞上清液中LDH水平升高,IL-6、iNOS和COX2的水平升高,细胞凋亡率增加,Cleaved-Caspase-9及Bax蛋白表达升高、Bcl-2蛋白表达降低,p-IκBα/IκBα、p-p65/p65比值升高.与LPS模型组相比,LPS+BSHXF组软骨细胞活力增加,细胞上清液中LDH水平降低,IL-6、iNOS和COX2的水平降低,细胞凋亡率降低,Cleaved-Caspase-9、Bax 蛋白表达降低,Bcl-2 蛋白表达升高,p-IκBα/IκBα、p-p65/p65 比值降低.结论 BSHXF可提升LPS诱导的损伤软骨细胞的活性,减轻LPS对软骨细胞的毒性,减少炎症因子释放、抑制软骨细胞凋亡,其机制可能是通过抑制NF-κB信号通路,进而发挥软骨保护作用.

目的:研究花椒提取物羟基-α-山椒素对异丙肾上腺素所致心肌缺血大鼠和过氧化氢(H2O2)诱导的大鼠心肌细胞(H9c2)氧化损伤的保护作用及可能机制.方法:36只SD雄性大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、盐酸地尔硫卓20 mg/kg、羟基-α-山椒素5、10和20 mg/kg组.各组大鼠连续给药14 d,在13、14 d腹腔注射异丙肾上腺素(ISO)40 mg/kg造成心肌缺血模型,超声心动图检查评估各组大鼠心功能;试剂盒检测血清丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)、心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)和IL-6含量;实时荧光定量qRT-PCR法检测心肌组织Tnfa、Il1和Il6 mRNA表达;苏木素-伊红(HE)和马松(Masson)染色观察心肌组织病理改变.体外培养H9c2细胞,用H2O2600 μmol/L处理H9c2细胞6 h构建氧化损伤体外细胞模型,随机分为正常对照组、模型对照组、羟基-α-山椒素2.5、5、10 μg/mL组.采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法筛选羟基-α-山椒素最佳给药浓度;采用流式细胞仪和激光共聚焦显微镜观测细胞凋亡情况;流式细胞仪检测细胞活性氧(ROS)浓度;ELISA法检测MDA、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和SOD含量或活力;蛋白质印迹法检测核因子E2相关因子2(Nrf2)、B淋巴细胞瘤-2基因相关X蛋白(BAX)、血红素氧合酶1(HO-1)、切割胱天蛋白酶3(Cleaved-caspase3)和B淋巴细胞瘤-2基因(BCL-2)蛋白表达水平.结果:与正常对照组相比,模型对照组大鼠左心室短轴缩短率(LVFS)和射血分数(LVEF)显著降低(P＜0.01),血清MDA、cTnl、LDH、CK-MB含量或活力显著升高(P＜0.01),GSH、SOD活力显著降低(P＜0.01),心肌组织中Il1b、Il6及Tnfa mRNA表达明显上调(P＜0.05);与模型对照组相比,羟基-α-山椒素各剂量组LVFS和LVEF明显升高(P＜0.05),羟基-α-山椒素20 mg/kg组MDA、cTnl、LDH、CK-MB含量或活力明显降低(P＜0.05),GSH、SOD活力明显升高(P＜0.05或P＜0.01),心肌组织中Il1b、Il6及Tnfa mRNA表达明显下调(P＜0.05),羟基-α-山椒素各剂量组心肌组织损伤减轻,心肌细胞胶原沉积减少.与正常对照组比较,H2O2模型对照组H9c2细胞活力、线粒体膜电位降低,细胞凋亡率、ROS水平、MDA、TNF-α、IL-1β、IL-6含量升高,GSH-Px、SOD活力降低(P＜0.01),经羟基-α-山椒素预处理后,H9c2细胞活力显著升高、线粒体膜电位升高,羟基-α-山椒素5、10 μg/mL组细胞凋亡率、ROS浓度、MDA、IL-1β、IL-6含量降低,GSH-Px、SOD活力显著升高(P＜0.01),羟基-α-山椒素10 μg/mL组细胞TNF-α含量显著降低(P＜0.01),羟基-α-山椒素处理H9c2细胞后Nrf2(核内)、HO-1、BCL-2蛋白表达上调,Nrf2(核外)、BAX、Cleaved-caspase3蛋白表达下调(P＜0.01).结论:羟基-α-山椒素可改善ISO所致心肌缺血大鼠的心功能、心肌损伤及纤维化程度,保护H2O2诱导的H9c2细胞氧化损伤,改善H9c2细胞凋亡,其作用机制可能与抑制氧化应激反应和炎症因子释放,激活Nrf2/HO-1信号通路有关.

组织蛋白酶在昆虫的消化、发育与变态中起重要作用,是捕食性蝽唾液(毒液)中普遍存在的成分,但其生理功能尚不清楚.本文利用同源比对的方法从蠋蝽Arma custos基因组中鉴定出组织蛋白酶基因,使用生物信息学软件分析其序列特征和进化关系,采用 RT-PCR 技术分析它们在成虫不同组织中的表达特征.结果表明,蠋蝽基因组中有 37个组织蛋白酶基因,根据结构域分为组织蛋白酶B(AcCAB1-4)、组织蛋白酶D(AcCAD1-13)和组织蛋白酶 L(AcCAL1-20).多序列比对及结构域预测结果表明,组织蛋白酶 B 和组织蛋白酶 L 均含有Peptidase_C1 结构域、保守的酶催化位点(谷氨酰胺、半胱氨酸、组氨酸和天冬酰胺)以及 1 个由半胱氨酸残基(C)和组氨酸残基(H)构成的催化二联体,而组织蛋白酶 D 中存在保守 Asp 结构域和 2 个保守的酶催化位点(天冬氨酸).RT-PCR结果显示,除AcCAL7和AcCAB2外,其余33个组织蛋白酶基因均在肠道中表达,且绝大多数表现特异性或高表达.AcCAL2、AcCAL5-7、AcCAL9等 20个组织蛋白酶基因在唾液腺中表达,且AcCAL2仅在主腺后叶和副腺表达,AcCAL7仅在主腺前叶表达,AcCAD13仅在主腺后叶表达,AcCAB2仅在主腺前叶和主腺后叶表达.这些结果表明,多数组织蛋白酶基因在蠋蝽口外消化和肠道消化中发挥消化功能.

目的 分析达格列净对糖尿病肾病(DN)患者肾脏功能改善作用及机制.方法 选取2021年10月至2022年9月该院收治的518例DN患者作为研究对象,根据随机数字表法分为治疗组与对照组,每组259例.对照组采用常规治疗,治疗组在对照组基础上结合达格列净治疗.比较两组疗效及治疗前后糖代谢指标[空腹血糖(FPG)、糖化血红蛋白(HbA1c)和餐后2 h血糖(2 h PG)]、肾脏功能指标[尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、尿白蛋白排泄率(UAER)]、细胞因子指标[白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α和C反应蛋白(CRP)],以及血清胱抑素(Cys)C、转化生长因子(TGF)-β 1和胰岛素样生长因子(IGF)-1水平.结果 治疗组总有效率高于对照组(P＜0.05).两组治疗后 UAER、FPG、HbA1c、2 h PG、BUN、Scr、IL-6、CRP、TNF-α、Cy-sC、TGF-β1、IGF-1水平低于治疗前,差异均有统计学意义(P＜0.05).治疗组治疗后UAER、FPG、HbA1c、2 h PG、BUN、Scr、IL-6、CRP、TNF-α、CysC、TGF-β1、IGF-1 水平低于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 达格列净对DN患者疗效显著,改善肾脏功能,其机制可能与减轻炎症反应及降低血清CysC、TGF-β1和IGF-1水平有关.