目的:探讨lncRNA HOTTIP通过调控miR-663a表达对4个非小细胞肺癌细胞系放射敏感性影响。方法:用0、2、4、6、8 Gy分别照射H838、H157、A549、H1299细胞系，采用克隆形成实验检测细胞存活情况。qRT-PCR检测细胞中HOTTIP和miR-663a表达水平。以A549、H1299细胞为研究对象，沉默HOTTIP表达、过表达miR-663a后用克隆形成实验检测细胞存活情况。流式细胞术检测细胞凋亡情况，Western blot检测Cleaved caspase-3、Cleaved PARP和γ-H 2AX表达。双荧光素酶报告基因实验和qRT-PCR检测验证HOTTIP和miR-663a的靶向关系。 结果:HOTTIP在放射耐受的H157、A549、H1299细胞中表达上调，miR-663a表达下调。沉默HOTTIP或过表达miR-663a均可抑制A549、H1299细胞存活(放射增敏比分别为1.562、1.507)，促进Cleaved caspase-3、Cleaved PARP和γ-H 2AX表达，促进放射照射诱导细胞凋亡。miR-663a是HOTTIP的靶基因，HOTTIP可负性调控miR-663a的表达。抑制miR-663a表达可逆转沉默HOTTIP对肺癌细胞系放射敏感性的影响。 结论:沉默HOTTIP通过上调miR-663a表达，抑制肺癌细胞系存活，促进其凋亡，从而提高肺癌细胞系的放射敏感性。

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)HOXA末端转录本反义RNA(HOTTIP)对胰腺癌诊断的临床价值。方法:收集2017年6月至2018年12月间徐州市中心医院18例行手术切除并经病理证实的胰腺癌组织及癌旁正常胰腺组织(距癌组织>1 cm)；收集78例临床确诊的胰腺癌患者血浆，选取78例健康体检者作为健康对照组，同时收集原发性肝癌、结直肠癌及胃癌各50例作为疾病对照组。实时荧光定量PCR法检测胰腺癌组组织及血浆、健康对照组和疾病对照组血浆HOTTIP的表达水平，化学发光法检测胰腺癌患者血浆CA19-9水平。分析胰腺癌患者血浆HOTTIP与癌组织HOTTIP及血浆CA19-9相关性，分析血浆HOTTIP水平与肿瘤临床病理特征之间的关系。绘制高表达HOTTIP组和低表达HOTTIP组患者的生存曲线，log-rank检验比较两组间的生存率差异。绘制受试者工作特征曲线(ROC)，计算曲线下面积(AUC)，评估血浆HOTTIP水平对胰腺癌的诊断效能。结果:胰腺癌患者癌组织HOTTIP表达量显著高于癌旁正常胰腺组织(2.24±0.25比0.62±0.11， P<0.001)；胰腺癌、肝癌、结直肠癌、胃癌患者及健康对照者血浆HOTTIP水平分别为1.33±0.32、0.57±0.17、0.51±0.10、0.41±0.09、0.54±0.05，胰腺癌组显著高于肝癌、结直肠癌、胃癌患者及健康对照者，差异均有统计学意义( P值均<0.05)，但肝癌、结直肠癌、胃癌患者血浆HOTTIP水平与健康对照者的差异均无统计学意义。胰腺癌患者血浆HOTTIP表达与CA19-9及癌组织中HOTTIP表达均呈正相关( P值均<0.001)，且血浆HOTTIP表达水平与TNM分期有关( P＝0.029)，而与患者性别、年龄及淋巴结转移、肿瘤大小无关。HOTTIP高表达患者生存率明显低于HOTTIP低表达患者(15.9个月比30.6个月， P<0.05)。血浆HOTTIP水平诊断胰腺癌的AUC值为0.81(95% CI 0.74～0.87)，诊断临界值为1.14，灵敏度为62%，特异度为94%，准确性为74%。血浆HOTTIP联合CA19-9诊断胰腺癌的灵敏度提高到81%，特异度提高到97%，准确性提高到84%。 结论:胰腺癌患者血浆HOTTIP水平对胰腺癌的诊断具有一定的临床价值。

目的:探讨胃癌患者血清外泌体对胃癌细胞AGS顺铂耐药、克隆形成、迁移、侵袭和凋亡的影响，并探讨其分子机制。方法:分离胃癌患者血清外泌体，qRT-PCR检测血清外泌体中lncRNA HOTTIP的表达。体外培养正常胃上皮细胞株GES1、胃癌细胞株AGS、人胚肾细胞株293T。AGS细胞与外泌体（Exo）孵育，以PBS处理作为对照，随后转染si-NC或si-HOTTIP-3，设为Exo组、PBS组、si-NC+Exo组、si-HOTTIP-3+Exo组。AGS细胞分别转染si-NC、si-HOTTIP-1、si-HOTTIP-2、si-HOTTIP-3、oe-HOTTIP、vector、oe-HOTTIP+miR-138-5p mimic、oe-HOTTIP+mimic NC、miR-138-5p inhibitor、inhibitor NC、miR-138-5p inhibitor+si-TJP1及miR-138-5p inhibitor+si-NC，设为si-NC组、si-HOTTIP-1组、si-HOTTIP-2组、si-HOTTIP-3组、oe-HOTTIP组、vector组、oe-HOTTIP+miR-138-5p mimic组、oe-HOTTIP+mimic NC组、miR-138-5p inhibitor组、inhibitor NC组、miR-138-5p inhibitor+si-TJP1组及miR-138-5p inhibitor+si-NC组。293T细胞转染mimic NC+HOTTIP wt、miR-138-5p mimic+HOTTIP wt、mimic NC+HOTTIP mut、miR-138-5p mimic+HOTTIP mut、mimic NC+TJP1 3'UTR wt、miR-138-5p mimic+TJP1 3'UTR wt、mimic NC+TJP1 3'UTR mut、miR-138-5p mimic+TJP1 3'UTR mut分别设为mimic NC+HOTTIP wt组、miR-138-5p mimic+HOTTIP wt组、mimic NC+HOTTIP mut组、miR-138-5p mimic+HOTTIP mut组、mimic NC+TJP1 3'UTR wt组、miR-138-5p mimic+TJP1 3'UTR wt组、mimic NC+TJP1 3'UTR mut组、miR-138-5p mimic+TJP1 3'UTR mut组。CCK8实验检测细胞的顺铂敏感性，平板克隆检测细胞克隆形成，Transwell实验检测细胞迁移和侵袭，流式细胞仪检测细胞凋亡，Western blot实验检测外泌体标志蛋白CD63和CD81、TJP1及耐药相关蛋白P-gp、MCL-1的表达，双荧光素酶实验验证lncRNA HOTTIP、miR-138-5p和TJP1之间的靶向关系。观察指标：（1）lncRNA HOTTIP的表达情况。（2）血清外泌体介导lncRNA HOTTIP对胃癌细胞顺铂的耐药情况。（3）过表达lncRNA HOTTIP通过miR-138-5p对胃癌细胞顺铂耐药的调控情况。（4）miR-138-5p靶向TJP1 3′非编码区检测情况。（5）抑制miR-138-5p通过TJP1对胃癌细胞顺铂耐药的调控情况。正态分布的计量资料以 x±s表示，组间比较采用 t检验，多组间比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用Tukey′s检验。计数资料以绝对数表示，组间比较采用 χ2检验。相关性分析采用Pearson检验。 结果:（1）lncRNA HOTTIP的表达情况。lncRNA HOTTIP在胃癌患者血清外泌体中的表达高于在健康志愿者血清外泌体中的表达，差异有统计学意义（ P<0.05）。透射电子显微镜结果显示：血清外泌体呈圆形或卵圆形；Western blot检测结果显示：血清外泌体中存在标志性蛋白CD63和CD81的表达。（2）血清外泌体介导lncRNA HOTTIP对胃癌细胞顺铂的耐药情况。与PBS组比较，Exo组半抑制浓度（IC50）、细胞克隆形成数、侵袭细胞数、迁移细胞数、P-gp蛋白表达和MCL-1蛋白表达均升高，细胞凋亡率降低，差异均有统计学意义（ P<0.05）。与si-NC+Exo组比较，si-HOTTIP-3+Exo组IC50、细胞克隆形成数、侵袭细胞数、迁移细胞数、P-gp蛋白表达和MCL-1蛋白表达均降低，细胞凋亡率升高，差异均有统计学意义（ P<0.05）。（3）过表达lncRNA HOTTIP通过miR-138-5p对胃癌细胞顺铂耐药的调控情况。与vector组比较，oe-HOTTIP组IC50、细胞克隆形成数、侵袭细胞数、迁移细胞数、P-gp蛋白表达和MCL-1蛋白表达均升高，细胞凋亡率降低，差异均有统计学意义（ P<0.05）。与oe-HOTTIP+mimic NC组比较，oe-HOTTIP+miR-138-5p mimic组IC50、细胞克隆形成数、侵袭细胞数、迁移细胞数、P-gp蛋白表达和MCL-1蛋白表达均降低，细胞凋亡率升高，差异均有统计学意义（ P<0.05）。（4）miR-138-5p靶向TJP1 3′非编码区检测情况。双荧光素酶实验显示：mimic NC+TJP1 3′UTR wt组、miR-138-5p mimic+TJP1 3′UTR wt组的荧光素酶活性分别为1.00±0.09、0.21±0.03，差异有统计学意义（ t=15.02， P<0.05）。（5）抑制miR-138-5p通过TJP1对胃癌细胞顺铂耐药的调控情况。与inhibitor NC组比较，miR-138-5p inhibitor组IC50、细胞克隆形成数、侵袭细胞数、迁移细胞数、P-gp蛋白表达和MCL-1蛋白表达均升高，细胞凋亡率降低，差异均有统计学意义（ P<0.05）。与miR-138-5p inhibitor+si-NC组比较，miR-138-5p inhibitor+si-TJP1组IC50、细胞克隆形成数、侵袭细胞数、迁移细胞数、P-gp蛋白表达和MCL-1蛋白表达均降低，细胞凋亡率升高，差异均有统计学意义（ P<0.05）。 结论:血清外泌体介导lncRNA HOTTIP通过调控胃癌细胞中miR-138-5p/TJP1的表达，促进胃癌细胞的顺铂耐药性、克隆形成、迁移和侵袭，抑制细胞凋亡。

目的 探讨HOTTIP rs1859168和rs17427960单核苷酸多态性(SNP)与宫颈癌及宫颈上皮内瘤变(CIN)发病风险的关系.方法 收集2019年11月至2021年5月盐城市第一人民医院诊断为CIN的患者142例作为CIN组,被诊断为宫颈癌的患者103例作为宫颈癌组,以同期住院的170例无妇科疾病的非肿瘤患者为对照组,采用TaqMan-MGB探针法方法进行基因分型,采用x2检验和logistic回归分析SNP位点与宫颈癌及宫颈上皮内瘤变的相关性.结果 与对照组相比,HOTTIP rs1859168和rs17427960在宫颈癌患者中的基因型分布存在显著性差异.在共显性模型中,携带 rs1859168 CA 基因型(ORadj=1.897,95％CI:1.090～3.300,Padj=0.023)及 rs17427960 AC 基因型(ORadj=1.787,95％CI:1.020～3.131,Padj=0.042)均显著增加了宫颈癌的发病风险;在显性模型中,rs 1859168 CA+AA 基因型(ORadj=1.690,95％CI:1.004～2.844,Padj=0.048)增加了 宫颈癌的发病风险.结论 HOTTIP rs 1859168和rs17427960的SNP与宫颈癌的发病风险相关,可作为宫颈癌的潜在易感性位点.

目的:探究HOTTIP通过竞争性结合miR-506来调节Vimentin基因的表达调控肾透明细胞癌细胞迁移的作用机制.方法:通过生信分析TCGA数据库中肾透明细胞癌的差异表达miRNA、mRNA、lncRNA.利用miRcode数据库数据对lncRNA-miRNA的结合进行预测,并对miRNA调控的靶基因进行预测.qRT-PCR检测肾透明细胞癌细胞系中HOTTIP、miR-506、Vimentin的表达,RNA pull-down实验检测miR-506和HOTTIP结合,RIP实验检测miR-506与HOTTIP和Vimentin的结合,Transwell和划痕愈合实验检测786-O细胞迁移能力.结果:HOTTIP在肾透明细胞癌中显著上调,并且与患者预后显著相关,其靶miRNA miR-506在肾透明细胞癌中显著下调.miR-506的下游调控基因Vimentin在肾透明细胞癌中显著上调并且与患者预后显著相关.HOTTIP通过竞争性结合miR-506来调节Vimentin基因的表达.干扰HOTTIP后,肾透明细胞癌细胞的迁移能力显著降低,而干扰HOTTIP的同时沉默miR-506或过表达Vimentin则能逆转干扰HOTTIP对肾透明细胞癌细胞迁移能力的抑制作用.结论:HOTTIP很有可能通过竞争性结合miR-506来调节Vimentin基因的表达从而调控肾透明细胞癌细胞迁移.

HOXA远端转录本(HOXA transcript at the distal tip,HOTTIP)RNA是HOXA基因远端转录生成的一类长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA),对协调激活HOXA 5'端的基因具有重要作用,尤其是调控邻近的HOXA13基因的表达.HOTTIP在食管癌、胃癌、肝癌、胰腺癌以及结直肠癌等消化系统肿瘤中表达增高,并与肿瘤的发生发展关系密切,影响患者的生存和预后,有望成为消化系统肿瘤的辅助诊断指标、预后标志以及新的治疗靶点.本文就lncRNA HOTTIP的发现、作用机制及其在常见消化系统恶性肿瘤中的最新研究进展进行综述.

长链非编码RNA(lncRNA)是一种转录本长度超过200个核苷酸,没有蛋白质编码功能的特殊RNA分子.长期以来,lncRNA被当作基因组的"垃圾序列",但随着研究的不断深入,人们发现lncRNA广泛参与细胞的生物学过程.lncRNA与多种恶性肿瘤的发生、发展密切相关.而同源异型基因簇 A 远端转录本(HOTTIP)属于lncRNAs中的一种,其在多种恶性肿瘤中异常表达,所以了解HOTTIP在调节肿瘤细胞生命活动中的具体作用具有十分重要的意义.对其在肿瘤细胞发生、发展中的潜在分子机制进行分析,可为今后肿瘤的预防和治疗提供新思路.

目的 研究干扰HOTTIP(HOXA transcript at the distal tip)的表达对卵巢癌细胞系SKOV3细胞侵袭、迁移能力及凋亡的影响.方法 选取人正常卵巢癌上皮细胞IOSE 80和人卵巢癌细胞SKOV3检测其中HOTTIP的表达情况.在确定HOTTIP在SKOV3细胞中高表达后,用慢病毒将干扰HOTTIP的shRNA转染进SKOV3细胞,构建HOTTIP的稳定敲减克隆.再分别构建阴性对照shRNA组(转染阴性对照质粒的克隆)和空白的对照组(未经转染的人卵巢癌SKOV3细胞),用PCR凝胶电泳及real-time PCR法检测3组细胞的HOTHP表达,以确定转染效率.随后,Transwell小室及划痕实验检测干扰HOTTIP对细胞侵袭迁移能力的影响.Western印迹法检测干扰HOTTIP对凋亡相关通路蛋白表达的影响.结果 干扰HOTTIP可使SKOV3细胞的划痕愈合率及细胞侵袭数目显著下降,使促凋亡蛋白表达上调,抗凋亡蛋白表达下调(P均＜0.05).结论 干扰HOTTIP可使SKOV3细胞的侵袭迁移能力显著下降,使细胞的凋亡增加.

目的 探讨长链非编码RNA(long non-coding RNAs,lncRNAs) HOTTIP与ROR联合高尔基体蛋白73 (Golgi protein 73,GP73)在甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)阴性肝癌(AFP-negative hepatocellular carcinoma,AFP-NHCC)中的临床价值.方法 AFP-NHCC患者100例为AFP-NHCC组,肝脏良性疾病患者100例为肝脏良性疾病组,体检健康者110例为健康对照组.采用实时荧光定量PCR法检测3组血浆lncRNA HOTTIP、ROR,采用ELISA法检测3组血浆GP73,并进行组间比较;分析血浆lncRNA HOTTIP、ROR、GP73与AFP-NHCC临床特征的关系;绘制ROC曲线,分析血浆lncRNA HOTTIP、ROR与GP73对AFP-NHCC的诊断价值;多元logistic回归分析AFP-NHCC的危险因素.结果 AFP-NHCC组患者血浆lncRNA HOTTIP[12.8±0.6(-log)]、ROR表达[3.9±0.2(-log)]及GP73水平[(93.4±8.5) μg/L]高于肝脏良性疾病组[5.8±0.3 (-log)、2.6±0.2(-log)、(30.8±3.7)μg/L]和健康对照组[5.7±0.2(-log)、2.5±0.2(-log)、(27.2±1.6)μg/L](P＜0.05);血浆lncRNA HOTTIP、ROR和GP73表达水平与AFP-NHCC患者的淋巴结转移(HOTTIP:r=0.567,P=0.002;ROR:r=0.552,P=0.006;GP73:r=0.535,P=0.011)及TNM分级(HOTTIP:r=0.559,P=0.001;ROR:r=0.539,P=0.007;GP73:r=0.538,P=0.017)呈线性关联;ROC曲线分析显示,血浆GP73、lncRNA HOTTIP、ROR诊断AFP-NHCC的灵敏度/特异度分别为80.4％/76.9％、86.1％/74.5％和69.3％/63.2％,而联合三者诊断AFP-NHCC的特异度为92.9％;logistic回归多因素分析显示,在校正年龄、性别、吸烟史、饮酒史等因素影响后,血浆高GP73、lncRNA HOTTIP和ROR水平仍是AFP-NHCC发病的独立危险因素(OR=3.51,95％CI:1.53～5.72,P＜0.001;OR=1.12,95％CI:1.03～1.34 P=0.032;OR=2.77,95％CI:1.47～5.08,P＜0.001).结论 血浆lncRNA HOTTIP、ROR和GP73在AFP-NHCC的诊断以及评估AFP-NHCC患者发生肿瘤远处转移中有重要临床意义.

目的:探讨lncRNA-HOTHP在低氧诱导人舌鳞癌细胞上皮-间质转化过程中的作用.方法:体外正常氧(20％O2)或低氧(1％O2)状态下培养舌鳞癌SCC9、CAL27细胞48 h,实时定量PCR检测lncRNA-HOTTIP与HIF-1α的表达水平;通过小干扰RNA(Si-HIF1α)转染舌鳞癌细胞,检测HIF-1α敲低后lncRNA-HOTHP的表达变化;进一步通过小干扰RNA (Si-HOTHP)转染舌鳞癌细胞,验证敲低lncRNA-HOTHP后E-cadherin、Fibronectin与Vimentin的蛋白和mRNA水平,以及细胞迁移能力的变化.采用SPSS13.0软件包对数据进行统计学分析.结果:人舌鳞癌细胞SCC9、CAL27在低氧培养48 h后,lncRNA-HOTTIP与HIF-1α均显著升高;Si-HIF1α转染SCC9、CAL27并于低氧培养后,HIF-1α水平显著降低,lncRNA-HOTHP表达下降.Si-HOTTIP转染SCC9、CAL27并在低氧培养后,lncRNA-HOTHP水平降低,间质标志蛋白Vimentin和Fibronectin在蛋白和mRNA水平显著降低,上皮标志蛋白E-cadherin表达升高,细胞迁移能力显著降低.结论:低氧可通过上调HIF-1α并激活lncRNA-HOTTIP表达,进而促进人舌鳞癌细胞发生上皮-间质转化及转移.