目的:探讨lncRNA HOTTIP通过调控miR-663a表达对4个非小细胞肺癌细胞系放射敏感性影响。方法:用0、2、4、6、8 Gy分别照射H838、H157、A549、H1299细胞系，采用克隆形成实验检测细胞存活情况。qRT-PCR检测细胞中HOTTIP和miR-663a表达水平。以A549、H1299细胞为研究对象，沉默HOTTIP表达、过表达miR-663a后用克隆形成实验检测细胞存活情况。流式细胞术检测细胞凋亡情况，Western blot检测Cleaved caspase-3、Cleaved PARP和γ-H 2AX表达。双荧光素酶报告基因实验和qRT-PCR检测验证HOTTIP和miR-663a的靶向关系。 结果:HOTTIP在放射耐受的H157、A549、H1299细胞中表达上调，miR-663a表达下调。沉默HOTTIP或过表达miR-663a均可抑制A549、H1299细胞存活(放射增敏比分别为1.562、1.507)，促进Cleaved caspase-3、Cleaved PARP和γ-H 2AX表达，促进放射照射诱导细胞凋亡。miR-663a是HOTTIP的靶基因，HOTTIP可负性调控miR-663a的表达。抑制miR-663a表达可逆转沉默HOTTIP对肺癌细胞系放射敏感性的影响。 结论:沉默HOTTIP通过上调miR-663a表达，抑制肺癌细胞系存活，促进其凋亡，从而提高肺癌细胞系的放射敏感性。

目的:探讨益脉降脂汤含药血清干预THP-1源性泡沫细胞模型后差异表达miRNA及相关生物功能、信号通路.方法:实验分为巨噬细胞组、泡沫细胞模型组、益脉降脂含药血清组,以佛波酯对THP-1细胞诱导为巨噬细胞,经诱导分化的巨噬细胞给予ox-LDL建立泡沫细胞模型,以益脉降脂汤大鼠血清干预泡沫细胞.提取各组细胞Total RNA进行miRNA测序,筛选差异表达miRNA,预测相关靶基因后进行GO分析、KEGG分析,建立蛋白互作网络、miRNA-靶基因互作网络,RT-qPCR验证改善动脉粥样硬化可能信号通路.结果:空白组与模型组差异 miRNA 为 hsa-miR-302c-3p、hsa-miR-302d-3p、hsa-miR-30d-3p、hsa-miR-3189-3p、hsa-miR-374b-5p、hsa-miR-423-5p、hsa-miR-4781-3p、hsa-miR-663a;模型组和益脉降脂含药血清组差异miRNA为hsa-miR-3150a-3p、hsa-miR-7704、hsa-miR-877-3p、hsa-miR-150-5p、hsa-miR-423-5p、hsa-miR-374c-3p、hsa-miR-374b-5p;模型组与益脉降脂含药血清组差异miRNA预测靶基因显示主要富集于MAPK信号通路、ErbB信号通路、Hippo信号通路、Wnt信号通路等信号通路;SCN1A、PRKACA、MECP2、EIF4E、SRSF1、MBNL1、PRKCA、PPARGC1A可能是益脉降脂汤含药血清向THP-1源性泡沫细胞发挥作用潜在关键靶标.结论:hsa-miR-374c-3p、hsa-miR-423-5p、hsa-miR-374b-5p是益脉降脂汤含药血清作用于泡沫细胞重要的miRNAs,差异表达显著的miRNA以及显著富集的相关信号通路可为诊断和治疗动脉粥样硬化提供新的思路.

MicroRNA是一类长度为18～24碱基的非编码小分子RNA,作为基因表达转录后调控因子,涉及多种生理、病理过程,包括调节脂质代谢和动脉粥样硬化.通过机体代谢,miR-126、miR-155、miR-221/222、miR-124、miR-145、miR-133、miR-663、miR-29等可参与动脉粥样硬化的形成和发展.目前有超过30种miRNA,包括miR-33、miR-122、miR-223和miR-27a/b也在调节脂肪酸生物合成及氧化,胆固醇的流出等脂质代谢中起重要作用.此外,“循环miRNA”的发现为其成为动脉粥样硬化性疾病的新型生物标志物提供可能.本综述通过探讨miRNA调节脂质代谢途径,参与动脉粥样硬化的发生、发展过程,为动脉粥样硬化疾病提供新的分子学观点并为深入研究其治疗靶点提供理论依据.

MicroRNAs(miRNAs)是一类长度为22 nt左右的高度保守的内源性小分子非编码RNA,广泛表达于动物、植物等真核细胞生物内,通过影响mRNAs的稳定性和翻译,参与多细胞生物基因表达的转录后调控.Mir-663a作为miRNAs中的一员,对生物的生长,发育,衰老,细胞增殖、分化、凋亡起到调控作用,甚至与恶性肿瘤的发生发展及预后密切相关.现就mir-663a在多种疾病中的表达及调控机制作一综述.

[目的]研究外泌体中糖尿病相关的微RNA(miRNA)在妊娠期糖尿病(GDM)孕妇血浆中的表达情况并探讨其与GDM发病机制的关系.[方法]本研究在基因表达汇编(GEO)数据库中检索到糖尿病相关的miRNAs芯片数据集,采用GEO2R筛选数据集中表达上调或下调的miRNAs,选取在2个或以上数据集中变化一致的miRNAs作为糖尿病相关的miRNAs.研究纳入孕龄在10～16周的单胎孕妇,随访至24～28周,根据口服葡萄糖耐量试验(OGTT)结果将其分为GDM组和正常糖耐量(NGT)组,采用实时定量RT-PCR检测两组孕妇在妊娠早期血浆外泌体中糖尿病相关miRNAs的表达情况,采用受试者工作特征(ROC)曲线检测miRNAs的早期预测效能.采用京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析揭示差异表达miRNAs的功能.[结果]从GEO数据库中下载的与糖尿病相关的芯片数据集包括GSE94649、GSE21321、GSE98043、GSE148961、GSE27645,分析发现10个与糖尿病有关的差异表达miRNAs,其中上调的有7个,下调的有3个.实时定量RT-PCR结果表明与NGT组相比,妊娠早期GDM孕妇血浆外泌体中hsa-miR-188-5p、hsa-miR-663a、hsa-miR-135a-5p和hsa-miR-4707-5p表达上调,4种miRNAs联合预测GDM的曲线下面积(AUC)为0.839(95％CI 0.724～0.954).KEGG富集分析结果显示miR-135a-5p的靶基因参与胰岛素信号通路.[结论]GDM孕妇血浆外泌体中差异表达的miRNAs可作为GDM潜在的预测因子,其中上调的miR-135a-5p可能参与胰岛素信号通路的调控.

目的:通过高通量测序筛选口腔扁平苔藓(oral lichen planus,OLP)患者和正常人口腔黏膜组织中差异表达的微小RNA(miRNAs),探讨miRNAs在OLP发病机制中的作用.方法:收集3例就诊于河北医科大学第四医院口腔科的OLP患者病变组织(P组)和3例正常口腔黏膜组织(N组),进行illumina高通量测序,筛选差异表达的miRNAs,利用生物信息学分析对差异最显著的6个miRNA进行靶基因预测和功能富集分析.结果:应用DESeq软件,筛选出两组间差异表达的miRNAs共61个(|log2FoldChange|>1,P<0.05),其中表达上调的23个,下调的38个.选择上调(miR-449c-5p、miR-663b和miR-196a-5p)和下调(miR-133b、miR-1-3p和miR-133a-3 p)最显著的miRNA各3个进行靶基因预测,GO分析显示这些靶基因主要富集在细胞膜区域,可能参与了细胞迁移、分化、代谢和分泌调节等生物过程,KEGG分析显示这些靶基因显著富集在MAPK、Rap1、NF-κB、Ras等信号通路上.结论:OLP和正常口腔黏膜之间存在差异表达的miRNA,这些miRNA可通过SEMA3F、HECW1、POLDIP等靶基因作用于MAPK、NF-κB、Rap1等通路,参与OLP的发生发展.

目的 探讨microRNA-663b(miR-663b)对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞增殖的调控作用及机制.方法 利用基因表达汇编(GEO)数据库的OSCC组织芯片数据进行差异表达基因分析;采用基因富集分析(GSEA)探寻OSCC与miR-663b相关的生物学功能.将miR-663b mimic以及醛脱氢酶6家族成员A1(ALDH6A1)过表达质粒转染至人OSCC细胞系HSC-3、CAL-27;采用CCK-8实验、克隆形成实验及裸鼠皮下移植瘤实验检测miR-663b对HSC-3、CAL-27细胞体内、外增殖的影响;采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-663b与ALDH6A1的靶向关系.结果 GEO数据库组织芯片数据显示,miR-663b在OSCC细胞中表达上调;GSEA发现miR-663b生物学功能与调节细胞增殖、氧化还原反应及活性氧(ROS)相关.功能试验中,过表达miR-663b显著促进HSC-3、CAL-27细胞的体外增殖、克隆形成能力以及裸鼠皮下移植瘤的生长(P<0.05),下调ALDH6A1蛋白表达和ROS水平(P<0.05),升高NADPH/NADP+比值(P<0.05);而上调ALDH6A1表达则显著抑制HSC-3、CAL-27细胞体外增殖和和克隆形成能力,上调ALDH6A1蛋白表达和ROS水平(P<0.05),降低NADPH/NADP+比值(P<0.05).双荧光素酶报告基因实验结果证实miR-663b能靶向结合ALDH6A1 mRNA的3'UTR区.结论 miR-663b在OSCC细胞中表达上调,并可通过靶向抑制ALDH6A1表达调节ROS水平,进而促进OSCC细胞增殖发挥致癌基因作用.