目的 本研究旨在通过对LBP1C-2靶向Kvβ.2构效关系的探索,阐明LBP1C-2靶向Kvβ.2的活性结构域,为开发具有潜在抗早老痴呆活性的创新药物提供科学依据.方法 枸杞多糖LBP1C-2经部分酸水解得到不同的结构片段后,对其进行单糖组成和分子量分析.通过蛋白芯片挑选出潜在靶蛋白,再用表面等离子体共振(SPR)技术验证各结构片段的靶向性.蛋白质免疫印迹以及细胞免疫荧光测试验证其生物学功能.结果 通过HuProtTM人类蛋白质组芯片高通量筛选到LBP1C-2的潜在靶蛋白Kvβ.2.SPR实验表明LBP1C-2与Kvβ.2蛋白有较强结合,其结合常数KD为1.9×10-7 M.而LBP1C-2的化学降解后各结构片段与靶蛋白Kvβ.2有不同强度结合.其中含鼠李糖和半乳糖醛酸摩尔比为1:1的片段LBP1C-2-1I(18.1 kDa)与原多糖LBP1C-2对Kvβ.2结合强度相近为3.3×10-7 M.对LBP1C-2-1I结构解析表明其有1,2-Rha与1,4-GalA交替连接组成.而该片段对应的酸水解外液部分LBP1C-2-1O与Kvβ.2也有结合,但与其他片段与该蛋白解离相比,更容易解离.从BV2小胶质细胞中敲减KCNAB2基因(Kvβ.2)后,BV2细胞中Aβ的降解被抑制,表明蛋白Kvβ.2可能是早老痴呆发生发展中的一个功能蛋白.结论 LBP1C-2靶向Kvβ.2的主要活性结构域为1,2-Rha与1,4-GalA交替连接组成的主链核心骨架结构.本研究为深化了解LBP1C-2潜在的抗早老痴呆活性提供了重要线索,为基于枸杞多糖抗早老痴呆靶向性药物的设计和开发提供了证据.

目的 通过观察慢性心力衰竭(Chronic heart failure,CHF)患者外周血免疫因子、Th17/Treg比例及CD4+CD25+调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)电压依赖性 Kv1.3 钾离子通道电流的变化,为探究心力衰竭发生、发展的免疫学机制提供一定理论依据.方法 密度梯度磁性分选Treg细胞后使用流式液相多重蛋白定量技术(Cytometric Bead Array,CBA)测定CHF组与正常对照组外周血血浆中IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-17A、TNF、IFN-γ荧光强度(Mean fluorescence intensity,MFI);流式法检测 CHF组与正常对照组全血中 Th17/Treg比例的变化;使用 ELISA法测定TGF-β、IL-10的浓度;膜片钳实验分 4 组:Psora-4 组、CHF组、正常对照组、CHF+EPL组.Psora-4组使用Kv1.3 通道阻断剂Psora-4灌流正常对照组细胞,CHF组与正常对照组细胞不做干预直接检测,CHF+EPL组使用依普利酮(eplerenone,EPL)灌流 CHF患者 Treg 细胞,通过全细胞膜片钳技术记录各组Treg细胞Kv1.3 钾离子通道的电流变化.结果 CHF组 IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-17A、TNF、IFN-γ的 MFI明显强于正常对照组(P ＜0.05);Th17/Treg比例有统计学差异:CHF组 vs 正常对照组[(2.97±0.86)vs(0.95± 0.12)],(P ＜0.01);CHF组TGF-β、IL-10的浓度明显大于正常对照组(P ＜0.01);Psora-4组Treg细胞 Kv1.3 钾离子通道电流密度峰值较正常对照组明显减小[(35.6±3.51)vs(106.11±10.47)]pA/pF,(P ＜0.01);CHF组外周血Treg细胞Kv1.3 钾离子通道电流密度峰值较正常对照组明显增大[(259.57±19.07)vs(106.11±10.47)]pA/pF,(P ＜0.01);CHF+EPL 组 CD4+CD25+Treg 细胞 Kv1.3 钾离子通道电流密度峰值较 CHF 组明显减小[(41.21±3.61)vs(259.57±19.07)]pA/pF,(P ＜0.01).结论 CHF组较正常对照组各免疫因子明显增多,Th17/Treg细胞比例变高,CD4+CD25+Treg细胞Kv1.3 钾离子通道电流密度增大且依普利酮可降低心衰组电流密度,提示Kv1.3 钾离子通道可能参与慢性心力衰竭的发生和发展.

为了提高鹿托盘中胶原蛋白的提取率,采用高压脉冲电场技术辅助胃蛋白酶的方法提取胶原蛋白.以胶原蛋白提取率为指标,通过对胃蛋白酶添加量、脉冲数和电场强度进行单因素考察,采用正交实验对胶原蛋白提取条件进行优化.优选出鹿托盘胶原蛋白的最佳提取条件为:胃蛋白酶添加量2％、脉冲数8、电场强度20kV.cm-1,在该条件下鹿托盘胶原蛋白的提取率可达到(73.27±0.73)％.与普通酶法相比,高压脉冲电场辅助提取胶原蛋白的得率比普通酶法提高了10.34％,且处理时间较短.聚丙烯酰氨凝胶电泳结果表明所提取的胶原蛋白由d1、α2和β-亚基组成,结构特征表明胶原蛋白具有完整的螺旋结构和Ⅰ型胶原蛋白的特性.该研究可为高压脉冲电场用于胶原蛋白的提取提供理论参考.

患者女,32 岁,因发现右上腹壁肿块 2 个月就诊,无红、肿、热、痛,无腹痛、腹胀. 分别于 4 年前和 6 年前行 2 次剖宫产术. B 超检查示腹壁肌层低回声团块,上腹部 CT 平扫示右前上腹壁软组织肿瘤. 体格检查右上腹壁可触及包块,大小约 8 cm×10 cm,质韧,表面欠光滑,边界欠清,活动度小,与周围组织及皮肤无粘连,触之无疼痛. 下腹壁见 1 处长度约 11 cm 陈旧性手术瘢痕,切口区无异常. 浅表淋巴结未触及肿大. 入院后血常规、肝肾功能、凝血全套及血清肿瘤标志物[甲胎蛋白(alphafetoprotein, AFP)、癌胚抗原(carcinoembryonic antigen, CEA)、糖类抗原(carbohydrate antigen, CA)19-9]检测均正常. 为明确病变性质并排除身体其他部位的肿瘤性病灶,行全身18 F-脱氧葡萄糖( fluorodeoxyglucose, FDG) ( 南京江原安迪科正电子研究发展有限公司,放化纯>90％) PET/CT(美国 GE Discovery ST 型)检查. 患者空腹 6 h 以上,空腹血糖 4.4 mmol/ L,静脉注射18 F-FDG 370 MBq,平静休息 60 min后行 PET/ CT 检查. PET 显像采用三维扫描,3 min/ 床位,CT 扫描条件:电压 140 kV、电流 160 mA、层厚 3.75 mm,采集数据经迭代重建后得到全身断层图像. PET/ CT 检查结果 (图 1)示右上腹腹直肌内软组织肿块影,大小约 4.7 cm×6.4 cm×10.4 cm,边界尚清,密度尚均匀,CT 值约 32～38 HU,FDG 代谢不均匀异常增高,最大标准摄取值(maximum standardized uptake val-ue, SUVmax )为 7.2,全身其他部位未见明显占位性病灶及FDG 代谢增高灶,未见明显肿大及 FDG 代谢增高淋巴结影.后行右上腹壁肿块切除术,术后病理学检查(图 2)示右上腹壁韧带样纤维瘤(desmoid-type fibromatosis, DTF),浸润横纹肌,免疫组织化学检查结果 为平滑肌肌动蛋白(大细胞;-)、B细胞淋巴瘤 2 基因(-)、CD34(-)、广谱细胞角蛋白(-)、上皮膜抗原(-)、S-100 蛋白(-)、波形蛋白(+)、肌特异性肌动蛋白(大细胞+)、CD117(-)、β-连环蛋白(+).

目的:探讨2型糖尿病大鼠心室肌细胞离子通道电流及其相关蛋白表达的改变.方法:采用Zucker糖尿病肥胖(Zucker diabetic fatty,ZDF)大鼠建立2型糖尿病大鼠模型,Zucker瘦型(Zucker lean,ZL)大鼠为对照组.采用急性酶解法分离大鼠单个心室肌细胞,采用全细胞膜片钳技术记录其动作电位、L型钙通道电流(ICa-L)及瞬时外向钾电流(Ito)的变化;提取大鼠心肌组织蛋白,采用Western blot检测心肌细胞肥大标志物β-肌球蛋白重链(β-myosin heavy chain,β-MHC)和心房钠尿肽(atrial natriuretic peptide,ANP),以及L型钙通道(Cav1.2)和钾通道(Kv4.3)的蛋白表达水平.结果:用高脂饮食诱导ZDF大鼠成功建立2型糖尿病模型;与ZL大鼠相比,ZDF大鼠心室肌细胞的动作电位时程显著延长,ICa-L和Ito密度显著降低[峰值分别为(?5.96±0.37)pA/pF vs(?4.92±0.30)pA/pF,(12.43±0.86)pA/pF vs(7.48±0.58)pA/pF,均P<0.05];与ZL大鼠相比,ZDF大鼠心肌组织中β-MHC和ANP的表达水平明显增加,伴有Cav1.2和Kv4.3蛋白表达下降(P<0.05).结论:与ZL大鼠相比,2型糖尿病大鼠心肌细胞肥大,心室肌细胞动作电位时程延长,ICa-L和Ito密度及其相关蛋白表达水平降低,提示糖尿病大鼠心室肌细胞发生电生理重构.

癫痫是由各种原因导致脑部神经元异常同步化放电而引起的以癫痫发作为主要表现的慢性神经系统疾病.据调查,我国大约有900 万癫痫患者,其中2/3 为儿童.2017 年国际抗癫痫联盟提出癫痫的主要病因,包括:遗传性、结构性、感染性、免疫性、代谢性和未知病因等[1].随着基因检测技术的飞速发展,发现了越来越多的癫痫致病基因,证实一部分癫痫和遗传因素相关.CSNK2B 基因位于染色体6p21. 33,包括648 个核苷酸和 7 个外显子,编码酪蛋白激酶2 (CK2 )的β亚基,参与细胞DNA的分化、发育和信号转导等[2].CSNK2B基因突变可使神经系统产生异常蛋白质,引起早发的癫痫发作和神经系统的发育异常.KCNQ2基因位于染色体 20q13. 3,包含 17 个外显子[3].KCNQ2基因编码电压门控型K+通道蛋白亚基Kv7. 2 ,其功能可以抑制神经元的兴奋性[4],若KCNQ2 基因突变可导致K+通道的功能受损和 K+电流的减少,引起细胞的兴奋性增高或异常放电.KCNQ2 基因突变还可以破坏神经系统的正常发育从而导致患儿发育落后[5].本文报道 1 例CSNK2B基因合并KCNQ2 基因突变致婴儿早发的全面性癫痫发作和轻度智力运动发育落后的病例,探讨 CSNK2B 和 KC-NQ2 基因突变相关癫痫的临床表型.

目的:研究Kv1.5蛋白通道阻滞剂DPO-1对LPS诱导的大鼠主动脉内皮细胞损伤的影响.方法:将大鼠随机分为Control组、LPS组、LPS+DPO-1 1 组、LPS+DPO-1 2组,LPS组静脉注射5 mg/kg LPS建立脓毒症模型,LPS+DPO-1 1 组、LPS+DPO-1 2组建模后分别腹腔注射不同剂量DPO-1(0.3、3mg/kg).取大鼠胸主动脉,分离内膜组织,Western blot检测内皮细胞中Kv1.5蛋白水平,流式细胞仪检测内皮细胞凋亡率;ELISA检测各组大鼠血清内皮细胞标志物内皮细胞特异性分子-1(Endo-can)、内皮细胞黏附分子-I(VCAM-1)、血管性血友病因子(vWF)及血清炎症因子IL-6、IL-1β及TNF-α水平,并测定超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和髓过氧化物酶(MPO)含量.结果:Kv1.5蛋白在Control组及LPS组存在表达,与Control组相比,LPS组Kv1.5蛋白表达增加(P＜0.01);流式细胞结果显示,LPS组内皮细胞凋亡率较Control组明显上升(P＜0.01),而LPS+DPO-11组及LPS+DPO-1 2组内皮细胞凋亡率较LPS组下降(P＜0.05);与Control组相比,LPS组血清内皮细胞标志物Endocan、VCAM-1、vWF及血清炎症因子IL-6、IL-1β及TNF-α水平明显升高(P＜0.05),给予Kv1.5特异性通道阻滞剂DPO-1干预后,大鼠血清内皮细胞标志物Endocan、VCAM-1、vWF及血清炎症因子IL-6、IL-1β及TNF-α水平下降(P＜0.05),且这一效应随DPO-1剂量增加而加强;LPS组较Control组MDA、MPO水平上升,SOD活性降低(P＜0.05),而DPO-1预处理可降低MDA、MPO含量、增加SOD活性(P＜0.05).结论:Kv1.5蛋白通道DPO-1通过阻断Kv1.5通道,减轻主动脉内皮细胞脂质过氧化损伤,抑制炎症反应.

目的 观察补肾活血组方对心肌梗死(心梗)后心力衰竭大鼠心肌组织β-连锁蛋白(β-catenin)、散乱蛋白1(Dishevelledl,Dvl1)及轴抑制蛋白2(Axin2)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、电压门控钾通道蛋白4.3(voltagegated K+channel4.3,KV4.3)mRNA的影响.方法 将13周龄雄性60只SD大鼠随机分为空白组15只和实验组45只.实验组大鼠通过结扎冠脉左前降支联合力竭式游泳、饥饿,建立心梗后心衰模型.造模成功的大鼠随机分3组,即模型组、赖诺普利组及补肾活血组.赖诺普利组灌胃赖诺普利混悬液1.5 mg/kg,补肾活血组灌胃补肾活血方熬制汤剂9.2 mg/kg,空白组和模型组灌胃等体积蒸馏水,各组均2次/d.灌胃4周后,心脏超声检测左室收缩末内径(left ventricular end systolic diameter,LVESD)、左室舒张末内径(left ventricular end diastolic diameter,LVEDD)、射血分数(ejection fraction,EF)及左室短轴缩短分数(shortening fraction,FS),酶联免疫吸附法测定血清N末端B型利钠肽前体(N-terminal pro brain natriuret-ic peptide,NT-proBNP)、Wnt3a、Wnt5a、Wnt11、Dickkopf-1(DKK1)、分泌性 FZD 相关蛋白 1(secreted Frizzled-related proteins,sFRP1)、Wnt 抑制蛋白 1(Wnt inhibitory protein,WIF1)含量,免疫组化法检测大鼠心肌 β-catenin、Dvl1 表达,反转录聚合酶链式反应法检测Axin2、Cyclin D1、KV4.3 mRNA表达.结果 与空白组比较,模型组大鼠LVEDD、LVESD升高,EF、FS 降低,血清 NT-proBNP、DKK1、sFRP1、WIF1 含量和心肌组织 β-catenin、Dvl1 蛋白及 Cyclin D1、KV4.3mRNA表达升高(P＜0.05),血清Wnt3a、Wnt5a、Wnt11及心肌组织Axin2mRNA表达降低(P＜0.05).与模型组比较,赖诺普利组和补肾活血组大鼠LVEDD、LVESD降低,EF、FS升高,血清NT-proBNP、DKK1、sFRP1、WIF1含量和心肌组织β-catenin、Dvl1 蛋白及 Cyclin D1、KV4.3mRNA 表达降低(P＜0.05),血清 Wnt3a、Wnt5a、Wnt11 及心肌组织 Axin2mRNA 表达升高(P＜0.05).结论 补肾活血组方可能通过下调心梗后心衰大鼠β-catenin、Dvl1蛋白和Cyclin D1、KV4.3mRNA及DKK1、sFRP1、WIF1表达,上调Axin2mRNA及Wnt3a、Wnt5a、Wnt11表达,改善心功能,延缓心室重构,防止心衰发展.