目的 探讨苯并(a)芘对变应性鼻炎(AR)模型鼻黏膜功能及Treg细胞甲基化水平的影响.方法 36只SPF级BALB/c雌性小鼠中选取12只作为正常对照组,剩余小鼠采用随机数表法分为AR模型组和苯并(a)芘干预组,各12只.AR模型组和苯并(a)芘干预组进行建模处理.建模后,苯并(a)芘干预组腹腔注射7.89 mg/kg苯并(a)芘,正常对照组和AR模型组给予等量的无菌PBS溶液腹腔注射.对各组小鼠的鼻炎症状评分和鼻腔灌洗液细胞涂片嗜酸细胞(EOS)计数、血清中卵清蛋白特异性IgE(OVA-sIgE)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素13(IL-13)和嗜酸性粒细胞趋化因子(Eotaxin)水平、小鼠鼻黏膜病理学变化、小鼠鼻黏膜Th亚群及Foxp3甲基化和蛋白水平进行对比.结果 与AR模型组相比,苯并(a)芘干预组中小鼠鼻炎症状评分和鼻腔灌洗液细胞涂片EOS计数增加最为明显(P＜0.05),小鼠血清中 OVA-sIgE、GM-CSF、TNF-α、IL-13 和 Eotaxin 水平升高最为明显(P＜0.05);苯并(a)芘干预后,可见大量的炎性细胞浸润,鼻黏膜上皮组织排列紊乱,增生和血管扩张严重,纤维上皮也受到严重的损伤,出现大量的杯形细胞,苯并(a)芘干预组小鼠鼻黏膜中AhR阳性细胞数量升高最为明显(P＜0.05);Th1和Treg占比降低最为明显,Th2、Th17占比升高最为显著(P＜0.05);小鼠脾脏CD4+CD25+调节性T细胞Foxp3基因甲基化水平升高最为明显(P＜0.05),小鼠脾脏中Foxp3蛋白水平降低最为明显(P＜0.05).结论 苯并(a)芘通过增加CD4+CD25+调节性T细胞Foxp3基因甲基化,降低Treg细胞比例,加重了鼻黏膜炎症和免疫失衡,进而参与变应性鼻炎的发病机制.

目的:探讨外周血调节性B细胞（Breg细胞）和调节性T细胞（Treg细胞）与英夫利昔单抗治疗克罗恩病临床疗效的关系。方法:2017年1月至2019年6月期间，在温州医科大学附属第二医院收集32例活动期克罗恩病患者和33名性别、年龄相匹配的健康对照者。取空腹静脉血5 ml，分离外周血单个核细胞（PBMCs），经多色流式细胞术检测PBMCs中Breg细胞（CD3 -CD19 +IL-10 +B细胞）占B细胞的比例，以及Treg细胞（CD4 +CD25 +Foxp3 +T细胞）占CD4 +T细胞的比例。克罗恩病患者于第0、2、6周静脉注射英夫利昔单抗（5 mg/kg）诱导缓解，其后每隔8周给予相同剂量的英夫利昔单抗维持治疗。于第14周再次检测PBMCs中Breg细胞比例和Treg细胞比例，并与第0周进行比较。同时，克罗恩病患者分别于第0周和第14周检测C反应蛋白（CRP）、白细胞计数、血小板计数、血细胞沉降率辅助评估英夫利昔单抗疗效。 结果:英夫利昔单抗治疗前，克罗恩病组与健康对照组之间整体比较，PBMCs中Breg细胞比例较高[(3.15±1.17)%比（2.64±0.38)%， P=0.024]，Treg细胞比例较低[(2.15±0.49)%比（4.25±0.41)%， P<0.001]。英夫利昔单抗治疗前和治疗第14周，克罗恩病组中Breg细胞比例和Treg细胞比例均呈独立正相关（ r=0.628， P<0.001； r=0.749， P<0.001）。治疗第14周，根据症状、克罗恩病活动指数（CDAI）、内镜下黏膜愈合进行评估。CDAI<150且内镜下黏膜愈合者定义为缓解组（R组），CDAI≥150或内镜下黏膜未愈合者为未缓解组（N组）。治疗第14周与治疗前比较，R组中Breg细胞比例和Treg细胞比例均显著增高[(5.89±2.60)%比（3.19±1.27)%， P<0.001；(4.59±0.72)%比（2.08±0.47)%， P<0.001]，CDAI和CR P均显著降低[CDAI：(63.19±14.69）比（195.62±58.13)， P<0.001；CRP：(3.65±2.23) mg/L比（29.80±30.06) mg/L， P<0.001]。治疗前和第14周，克罗恩病患者中Breg细胞比例和Treg细胞比例与CRP（ r=-0.279， P=0.026； r=-0.406， P=0.001）和CDAI（ r=-0.409， P=0.001； r=-0.708， P<0.001）始终呈独立负相关。治疗第14周，ROC曲线分析显示"Breg细胞比例+Treg细胞比例"对英夫利昔单抗疗效的预测价值高于其他参数（曲线下面积：0.782，截断值：0.895 5， P=0.034）。 结论:Breg细胞和Treg细胞不仅与克罗恩病疾病活动密切相关，而且在活动期克罗恩病患者中，联合检测这两类免疫细胞对英夫利昔单抗疗效的预测价值更高。

目的:评价术前睡眠剥夺对术后免疫抑制小鼠肠道菌群的影响。方法:SPF级健康成年雄性C57BL/6J小鼠72只，体重23～25 g，8～10周龄，采用随机数字表法分为5组：手术组(O组， n＝18)、术前睡眠剥夺组(SR组， n＝18)、伪无菌小鼠生理盐水组(GF＋V组， n＝12)、伪无菌小鼠给予O组小鼠粪菌滤液移植组(GF＋O组， n＝12)和伪无菌小鼠给予SR组小鼠术前粪菌滤液移植组(GF＋SR组， n＝12)。O组和SR组腹腔探查和肝叶部分切除术前7 d开始每天20 h的睡眠剥夺，连续7 d。术前2周开始连续14 d在小鼠饮水中添加光谱抗生素制备伪无菌小鼠模型，伪无菌小鼠灌胃给予生理盐水或O组、SR组术后24 h小鼠的粪便滤液(200 μl)，间隔24 h，连续14 d。术后24 h时收集小鼠粪便行16S rRNA基因高通量测序。术后或粪菌移植后24 h时测量脾脏长径并称重，流式细胞术检测血CD4 ＋T细胞、CD8 ＋ T细胞和调节性T细胞(Treg细胞)。 结果:与O组比较，SR组肠道菌群Simpson多样性指数降低，血CD4 ＋T细胞和CD8 ＋T细胞数减少，Treg细胞百分比增加，脾脏长径和重量减少，GF＋V组血CD4 ＋T细胞和CD8 ＋T细胞数减少，Treg细胞百分比增加，脾脏长径和重量减少( P<0.05)；与GF＋V组比较，GF＋O组血CD4 ＋T细胞和CD8 ＋T细胞数增加，Treg细胞百分比减少，脾脏长径和重量升高( P<0.05)；与GF＋O组比较，GF＋SR组血CD4 ＋T细胞和CD8 ＋T细胞数减少，Treg细胞百分比增加，脾脏长径和重量减少( P<0.05)。 结论:术前睡眠剥夺加重小鼠术后免疫抑制的机制与肠道菌群紊乱有关。

目的:探讨低剂量（0.1 mg/kg）西达本胺治疗原发免疫性血小板减少症（ITP）的作用及机制。方法:①应用C57BL/6J小鼠建立ITP被动模型，灌胃给予0、0.01、0.1、0.5、5.0 mg/kg西达本胺，观察治疗前后ITP小鼠模型外周血血小板计数。②应用C57BL/6J小鼠建立ITP主动模型，灌胃给予0.1 mg/kg西达本胺，观察治疗前后ITP小鼠模型外周血血小板计数；4周后处死小鼠，流式细胞术检测脾细胞中CD4 +CD25 +Foxp3 +自然调节性T细胞（nTreg）比例并应用ELISA方法检测小鼠外周血IL-6水平。③分离ITP患者外周血单个核细胞，与低剂量西达本胺共培养72 h后检测nTreg细胞比例；免疫磁珠法分离CD4 +CD25 +调节性T细胞（Treg细胞）以及CD4 +CD25 -效应T细胞，将二者以1∶4比例混合共培养，加入低剂量西达本胺干预，检测Treg细胞对效应T细胞增殖的抑制作用。 结果:①低剂量西达本胺可明显提高ITP被动模型鼠外周血血小板水平。②低剂量西达本胺可显著提高ITP动物模型外周血血小板水平，降低出血相关死亡率。③低剂量西达本胺可显著提高ITP动物模型脾细胞中nTreg比例、降低血清IL-6水平。④低剂量西达本胺可显著提高ITP患者外周血单个核细胞培养体系中nTreg细胞比例、增强Treg细胞对效应T细胞增殖的抑制作用。结论:低剂量西达本胺可促进nTreg生成、增强Treg细胞的免疫抑制功能、降低IL-6水平，促进免疫耐受，对ITP有较好的治疗作用。

目的:探讨Notch通路在鼻息肉中的表达及其与调节性T细胞（Treg细胞）表达和嗜酸粒细胞（Eos）浸润的相关性。方法:选择2012年11月至2018年8月期间在中山大学附属第三医院接受鼻内镜手术的慢性鼻窦炎（CRS）和鼻中隔偏曲的患者，分别作为CRS组和对照组。收集慢性鼻窦炎不伴鼻息肉（CRSsNP）患者（30例，男14例，女16例，年龄18~63岁）、慢性鼻窦炎伴鼻息肉（CRSwNP）患者（58例，男38例，女20例，年龄18~65岁）的窦口鼻道复合体黏膜组织、鼻息肉，对照组（29例，男19例，女10例，年龄20~57岁）患者的下鼻甲黏膜组织。通过苏木精-伊红（hematoxylin-eosin，HE）染色法观察组织中的Eos浸润情况，并将CRSwNP分为嗜酸粒细胞性慢性鼻窦炎伴息肉（Eos-CRSwNP）和非嗜酸粒细胞性慢性鼻窦炎伴息肉（non-Eos-CRSwNP）。通过实时荧光定量聚合酶链反应（quantitative real-time polymerase chain reaction，qRT-PCR）的方法检测4组患者Notch通路受体Notch-1、Notch-2、Notch-3、Notch-4及其配体Jagged-1、Jagged-2、Delta-1、Delta-3和Delta-4的表达，Th2型细胞因子［白细胞介素4（IL-4）、IL-5、IL-13］、嗜酸粒细胞阳离子蛋白（eosinophilic cationic protein，ECP）以及Treg细胞关键转录因子Foxp3的表达。采用流式细胞术检测CD4 +CD25 +Foxp3 + Treg细胞在4组患者鼻黏膜组织中的表达。采用SPSS 20.0软件进行统计学分析，多组间均数比较采用单因素方差分析，相关性分析采用 Spearman检验。 结果:与对照组、CRSsNP组和non-Eos-CRSwNP组相比，Eos-CRSwNP组的IL-4、IL-5、IL-13表达水平最高（ F值分别为16.930、9.197、9.116， P值均<0.05）；Foxp3的表达水平最低（ F=2.780， P<0.05）；Foxp3与ECP呈负相关（ r=-0.326， P<0.05）。Eos-CRSwNP组中CD4 +CD25 +Foxp3 + Treg细胞占比低于对照组、CRSsNP组、non-Eos-CRSwNP组（ F=13.140， P<0.01）。Notch-1、Jagged-1在Eos-CRSwNP组中表达高于non-Eos-CRSwNP组，差异有统计学意义（ F值分别为5.953、 6.380， P值均<0.05）；且在鼻息肉组中Notch-1/Jagged-1与Foxp3表达呈负相关（ r值分别为-0.611、-0.346， P值均<0.05），与IL-4、IL-5、IL-13和ECP的表达呈正相关（ r值分别为0.781、0.459，0.621、0.601，0.605、0.490，0.464、0.668， P值均<0.05）；在鼻息肉组中其余Notch通路受体/配体在各组间的表达无相关性。 结论:Notch-1/Jagged-1通路异常激活可能参与调控Eos-CRSwNP中Treg细胞功能的抑制，以促进Th2型炎性反应及Eos浸润。

目的:探讨急性B淋巴细胞白血病（B-ALL）患儿外周血中CD4 +CD25 +Foxp3 +调节性T细胞（Treg）和辅助性T细胞17（Th17）的表达情况及其比值变化规律。 方法:选取2017年2月至2019年10月首都儿科研究所附属儿童医院初发急性B淋巴细胞白血病（B-ALL）患儿54例为研究对象，年龄4.9（3.1，7.4）岁。分为治疗前组和治疗后组，治疗后根据疾病转归分为完全缓解组45例，复发/难治组9例，选取20名查体儿童为对照组。运用流式细胞术（FCM）分别检测B-ALL患儿治疗前后和查体儿童外周血中CD4 +CD25 +Foxp3 +Treg细胞和Th17细胞占CD4 +T细胞的比例，并计算Treg/Th17细胞比值。在治疗前后分别比较复发/难治组、完全缓解组和对照组之间Treg、Th17细胞比例及Treg/Th17比值。分别比较完全缓解组和复发/难治组同一患儿治疗前后检测指标差异。 结果:B-ALL患儿治疗前，复发/难治组和完全缓解组外周血Treg细胞比例（分别为6.11±0.48，6.20±1.16）高于对照组（4.89±1.46），Treg/Th17细胞比值（分别为8.34±2.14，5.91±1.92）高于对照组（3.55±1.68），复发/难治组外周血Treg/Th17细胞比值高于完全缓解组，其差异均有统计学意义（ P<0.05）。B-ALL患儿治疗后，复发/难治组外周血Treg细胞比例（6.09±0.80）高于完全缓解组（5.25±0.87）及对照组（4.89±1.46），Treg/Th17细胞比值（7.37±1.19）高于完全缓解组（4.22±1.50）及对照组（3.55±1.68），其差异均有统计学意义（ P<0.05）。治疗后，完全缓解组患儿外周血Treg细胞比例及Treg/Th17细胞比值均低于治疗前，Th17细胞比例（1.38±0.49）高于治疗前（1.14±0.39），其差异均有统计学意义（ P<0.05）。复发/难治组外周血Treg细胞及Treg/Th17细胞比率与治疗前比较，其差异均无统计学意义（ P>0.05）。 结论:B-ALL患儿外周血存在CD4 +CD25 +Foxp3 +Treg细胞升高和Th17细胞比例降低所致的Treg/Th17细胞比值改变，随疾病的缓解而趋于正常。定期检测Treg细胞及Th17细胞比例有助于对B-ALL患儿进行免疫状态监测及预后判断，可能为B-ALL的免疫治疗提供依据。

目的:探讨玉屏风散联合深度水解配方奶粉治疗牛奶蛋白过敏婴幼儿的临床疗效及对患儿免疫功能、白细胞介素（IL）10、IL-22水平的影响。方法:选取杭州市儿童医院2020年1月至2021年1月接诊的牛奶蛋白过敏婴幼儿80例，按照随机数字表法分为玉屏风组、常规治疗组各40例，并选择同期健康体检的婴幼儿80例为对照组。常规治疗组予深度水解配方奶粉，玉屏风散组患儿采用玉屏风散联合深度水解配方奶粉治疗，均持续治疗30 d。比较两组临床疗效、血清总免疫球蛋白（IgE）、牛奶特异性IgE（sIgE）、外周血CD 4+CD 25+Treg、IL-10、IL-22水平。 结果:玉屏风散组总有效率为92.5%（37/40），明显高于常规治疗组的72.5%（29/40），差异有统计学意义（χ 2=5.54， P < 0.05）。玉屏风散组血清总IgE、牛奶sIgE分别为（132.93±14.61）IU/L、（0.62±0.14）IU/L，均低于常规治疗组的（150.27±16.22）IU/L、（0.85±0.17）IU/L，差异均有统计学意义（ t=5.02、6.61，均 P < 0.001）；玉屏风散组CD 4+CD 25+Treg表达为（13.29±1.40）%，明显高于常规治疗组的（11.84±1.27）%，差异有统计学意义（ t=4.85， P < 0.05），玉屏风散组CD 4+CD 25+Treg与对照组［（13.40±2.03）%］比较，差异无统计学意义（ t=0.31， P=0.759）；玉屏风散组IL-10为（34.57±4.07）μg/L，明显高于常规治疗组的（22.19±2.15）μg/L，IL-22水平为（2.20±0.42）ng/L，明显低于常规治疗组的（5.28±0.79）ng/L，差异均有统计学意义（ t=17.01、21.77，均 P < 0.05），且玉屏风散组IL-10、IL-22与对照组［（35.53±3.85）μg /L、（2.13±0.53）ng/L］差异均无统计学意义（ t=1.26， P=0.209； t=0.73， P=0.468）。 结论:玉屏风散联合深度水解配方奶粉治疗牛奶蛋白过敏婴幼儿的临床疗效显著，能明显改善婴幼儿的免疫功能，提高IL-10水平，降低IL-22水平。

目的:评价全凭静脉麻醉和全凭吸入麻醉对浸润性乳腺癌患者围手术期外周血辅助性T细胞亚型及相关细胞因子[IL-17A、干扰素-γ（interferon-γ, IFN-γ）、IL-6、IL-10]的影响。方法:选择常德市第一人民医院浸润性乳腺癌患者60例，ASA分级Ⅰ、Ⅱ级，年龄35~75岁，肿瘤TNM分期Ⅰ、Ⅱ级，BMI 18.5~28.0 kg/m 2，按随机数字表法分成丙泊酚全凭静脉麻醉组（静脉组）和七氟醚吸入麻醉组（吸入组），每组30例。麻醉诱导：静脉组选用咪达唑仑0.04 mg/kg，芬太尼6 μg/kg，丙泊酚1.5~2.0 mg/kg，苯磺酸顺阿曲库铵0.3 mg/kg；吸入组选用依托咪酯0.2 mg/kg替代丙泊酚，其余诱导用药同静脉组。静脉组采用微量泵靶控输注（target-controlled infusion, TCI）模式持续输注丙泊酚维持麻醉，靶控浓度3~4 mg/L；吸入组持续吸入1.5%~2.0%浓度的七氟醚；维持BIS 40~60。两组患者分别于入手术室后麻醉诱导前（D 0，术前）、术后第1天（D 1）、术后第3天（D 3）采集外周静脉血3 ml，流式细胞仪检测外周血中CD4 +CD25 +Foxp3 +调节性T细胞绝对计数及相对计数，流式液相多重蛋白定量法检测血浆中IL-17A、IFN-γ、IL-6和IL-10浓度。 结果:与D 0比较：两组患者D 1外周血中CD4 +CD25 +Foxp3 +调节性T细胞绝对计数及相对计数降低，IL-17A、IL-6浓度升高，差异有统计学意义（ P<0.05）；D 3时均基本恢复至D 0水平。与吸入组比较：静脉组患者D 1时IL-17A、IL-6浓度较低（ P<0.05），其余指标相同时间点组间比较差异无统计学意义（ P>0.05）。 结论:丙泊酚全凭静脉麻醉和七氟醚全凭吸入麻醉对乳腺癌改良根治术患者围手术期外周血CD4 +CD25 +Foxp3 +调节性T细胞的含量无明显影响；相较于全凭吸入麻醉，全凭静脉麻醉可抑制IL-17A、IL-6的过度表达，可能有利于减轻乳腺癌患者围手术期炎性反应。

气道上皮损害、Th2炎症反应增强、免疫调节性T细胞功能受损是哮喘发生的重要机制。吲哚胺2，3-双加氧酶(indoleamine 2，3-dioxygenase，IDO )由脂多糖、干扰素-γ诱导表达，调控幼稚T细胞分化成CD4 +CD25 +调节性T细胞(T regulatory cell，Treg)，诱导免疫耐受，可抑制嗜酸粒细胞性气道炎症；IDO活性下降可能会促进哮喘的发生。色氨酸代谢产物与芳烃受体作用，促进IL-22的产生，增强上皮的完整性及抗感染性；可改变特异性免疫治疗诱导的Th17/Treg平衡，Treg细胞增多；降低气道炎症，减少炎症细胞因子浸润。D-色氨酸可促进肠道菌群的多样性，增加肺和结肠中Treg的数量，降低Th2炎症反应，降低气道高反应性。色氨酸及其代谢产物、IDO、D-色氨酸等在哮喘发生、发展及特异性免疫治疗中有重要作用。

目的:探讨系统性免疫球蛋白轻链淀粉样变性（AL）初治患者的外周血免疫细胞表型特征及其与临床指标的相关性。方法:采用流式细胞仪多参数免疫荧光分析技术，对36例AL初诊患者和28名健康供者的外周血单个核细胞的表面抗原CD3、CD56、CD4、CD8、CD25、CD45RA、CD28、CD57及核内抗原FOXP3进行检测和比较。根据梅奥2012分期对AL患者进行分期，比较Ⅰ~Ⅱ、Ⅲ~Ⅳ期患者的免疫细胞表型差异。分析λ轻链型AL患者T细胞亚群比例与多项临床指标的相关性。结果:AL患者的外周血T（CD3 +CD56 -）和NKT（CD3 +CD56 +）细胞比例，T细胞中的CD4 +CD8 -、CD4 -CD8 +、Treg（CD4 +CD25 +FOXP3 +）细胞比例与健康供者相比差异无统计学意义（ P>0.05）。AL患者的CD4 -CD8 +细胞中，CD57 +细胞的比例较健康供者显著降低（ P<0.05），但CD45RA +和CD28 +细胞的比例在AL和健康供者间差异无统计学意义。Ⅰ~Ⅱ期和Ⅲ~Ⅳ期AL患者T细胞及其亚群的比例差异无统计学意义（ P>0.05）。在λ轻链型AL患者中，外周血CD4 -CD8 +细胞的比例与24 h尿蛋白和血肌酐呈正相关（ P<0.05），与eGFR呈负相关（ P<0.05），与其他临床指标无显著相关性。与此相反，CD4 +CD8 -细胞的比例与eGFR呈正相关，而与24 h尿蛋白和血肌酐呈负相关（ P<0.05）。 结论:AL患者外周血的T细胞亚群与健康供者相比差异无统计学意义，但CD8 + T细胞的比例与肾脏损伤程度呈正相关，提示CD8 + T细胞的比例在评估AL患者肾脏预后中具有一定的价值。