[目的]考察MDCK-MDR1细胞对立方液晶纳米粒的摄取及摄取机制.[方法]以钙黄绿素为标准荧光物质制备液晶纳米粒.采用流式细胞仪检测不同时间点MDCK-MDR1细胞内荧光强度,比较细胞对钙黄绿素、钙黄绿素液晶纳米粒摄取的差异;采用不同抑制剂(非律平、细胞松弛素D、氯丙嗪、2-D-去氧葡萄糖)与钙黄绿素液晶纳米粒共同孵育后,流式细胞仪测定胞内荧光强度,判断MDCK-MDR1细胞摄取液晶纳米粒的通路.[结果]摄取2 h内,立方液晶纳米粒不仅可以增加MDCK-MDR1细胞对钙黄绿素的摄取也可改变细胞的摄取行为.经氯丙嗪、2-D-去氧葡萄糖孵育的细胞胞内荧光含量低,差异有统计学意义(P<0.05).[结论]立方液晶纳米粒可增加MDCK-MDR1对钙黄绿素的摄取,摄取途径为能量依赖网格蛋白介导的主动内吞.

目的:研究白芷香豆素类成分欧前胡素、异欧前胡素、氧化前胡素对硫酸长春新碱肠道转运及药代动力学的影响.方法:采用MDCK-MDR1细胞模型,考察欧前胡素、异欧前胡素、氧化前胡素对硫酸长春新碱肠道转运的影响.采用LCMS/MS测定给药后不同时间血浆中药物浓度,研究欧前胡素、异欧前胡素、氧化前胡素成分对硫酸长春新碱药代动力学的影响.结果:长春新碱配伍质量浓度为10.80,5.42,1.35 mg·L-1欧前胡素的表观渗透系数(Papp)分别为(0.287 2±0.0266)×10-6,(0.351 5±0.041 6) ×10-6,(0.294 9±0.006 8)×10-6 cm·s-1,三者与硫酸长春新碱的Papp[(0.227 2±0.014 8)×10-6 cm·s-1]比较有显著性差异(P＜0.05).硫酸长春新碱与欧前胡素、异欧前胡素、氧化前胡素配伍后药时曲线下峰面积(AUC0-t)分别为(343.50±10.29),(348.70±27.99),(235.70±17.56) μg·h·L-1,与硫酸长春新碱组比较有显著性差异(P＜0.01).药峰浓度(Cmax)分别为(81.870±8.517),(83.010±9.276),(60.440±6.679)μg· L-1,与硫酸长春新碱组的比较有显著性差异(P＜0.01).结论:白芷香豆素类成分能促进硫酸长春新碱的肠道转运,提高其生物利用度.

目的 探讨微乳制剂对葛根素在血脑屏障(BBB)细胞模型MDCK-MDR1的转运影响以及机制.方法 采用MTT法评价葛根素微乳与溶液的细胞毒性浓度范围,确定适宜给药质量浓度,考察葛根素溶液及微乳在MDCK-MDR1单层的双侧转运特性,通过免疫组化染色研究细胞紧密连接蛋白的表达,荧光光漂白恢复法测定细胞膜流动性的变化以及阴离子探针结合流式细胞技术研究细胞膜电位的改变,进而阐明微乳对葛根素转运影响的作用机制.结果 葛根素溶液质量浓度50～300 μg/mL,微乳稀释500倍以上对MDCK-MDR1无显著毒性.溶液中葛根素在MDCK-MDR1单层的吸收方向转运表观渗透系数(Papp)为1.04×10-6 cm/s,外排方向转运Papp值为1.05×10-6 cm/s,微乳中葛根素双侧转运Papp值均较溶液中葛根素显著增加(P＜0.05).微乳作用可以减少MDCK-MDR1紧密连接蛋白Claudin-1、Occludm、ZO-1、F-actin的表达,促进细胞膜流动,降低细胞膜电位.结论 微乳制剂可以促进葛根素在BBB细胞模型MDCK-MDR1的双侧转运,其作用机制与打开细胞间紧密连接,增加细胞膜流动性,使细胞去极化,降低膜电位进而增大葛根素细胞旁路渗透有关.

目的 研究马钱子碱、士的宁在MDCK-MDR1单层细胞模型中的双向转运机制.方法 MTT法确定马钱子碱、士的宁对MDCK-MDR1单层细胞毒性范围,以MDCK-MDR1单层细胞为体外研究模型,考察转运时间、药物作用质量浓度、P-糖蛋白(P-gp)抑制剂维拉帕米对马钱子碱、士的宁的累积吸收浓度(Ccum)和表观渗透系数(Papp)的影响.结果 马钱子碱和士的宁Papp均＞1×10-5 cm/s,Papp(BL→AP)/Papp(AP→B)均＜2.马钱子碱、士的宁与维拉帕米合用,显著降低了Papp(BL→AP)/Papp(AP→BL)值.结论 马钱子碱、士的宁以被动转运为主,P-gp抑制剂维拉帕米对其吸收有明显抑制作用,马钱子碱、士的宁可能是P-gp底物.

目的 总甘草素是甘草苷在体内的主要暴露形式,对两者在大鼠体内暴露特征及体外跨膜转运机制进行研究,为以甘草苷单体为新药的进一步开发提供依据.方法 采用LC-MS/MS分析方法测定大鼠给药后不同时间点血浆样品中的总甘草素浓度,并应用WinNonlin.6.3软件采用非房室模型的统计矩法计算药代动力学参数;同时测定大鼠ig给药后组织匀浆中的浓度,考察不同类型甘草素在各组织中的暴露特征;应用体外MDCK-MDR1细胞模型,研究甘草苷、甘草素的跨膜转运能力及其机制.结果 ig给药后在大鼠体内,甘草苷不呈线性动力学特征;血浆和大部分组织中主要以甘草素的Ⅱ相结合产物存在,肝、子宫、卵巢、胃和肠组织中主要为游离甘草素;总甘草素暴露量排序为肠＞血浆＞肝＞肾＞肺＞胃＞子宫＞卵巢＞脂肪＞心＞脾＞肌肉＞睾丸,且不易产生组织蓄积现象;甘草素跨膜转运能力较甘草苷良好,且均不是P-gp转运体的底物.结论 甘草苷不呈线性动力学吸收特征;甘草素在组织中暴露特征表现为不同组织中甘草素的存在形式和分布程度差异较大,总甘草素不易产生组织蓄积现象;两者均为被动扩散跨膜转运方式.

目的 探讨川芎中3个苯酞类成分藁本内酯、洋川芎内酯A和洋川芎内酯Ⅰ对氧糖剥夺/再灌注诱导MDR1转染犬肾细胞(MDCK-MDR1)损伤的作用及机制.方法 采用氧糖剥夺/再灌注诱导MDCK-MDR1细胞损伤模型,给予藁本内酯、洋川芎内酯A和洋川芎内酯Ⅰ进行干预,采用MTT法检测细胞存活率;采用试剂盒检测细胞上清液中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放率;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;采用Western blotting法检测细胞紧密连接蛋白如claudin-5、occludin、ZO-1 以及外排蛋白 P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)和葡萄糖转运蛋白-1(glucose transporter-1,GLUT-1)表达情况;以芍药苷为探针药物,研究藁本内酯、洋川芎内酯A和洋川芎内酯Ⅰ对芍药苷在氧糖剥夺/再灌注诱导的MDCK-MDR1细胞上跨膜转运的影响.结果 与模型组比较,洋川芎内酯Ⅰ(80μg/mL)显著提高MDCK-MDR1细胞存活率(P＜0.05);洋川芎内酯Ⅰ(40、80 μg/mL)显著抑制细胞上清液中LDH释放率(P＜0.05、0.01);藁本内酯(20、40μg/mL)和洋川芎内酯Ⅰ显著抑制细胞凋亡率(P＜0.01);藁本内酯(20μg/mL)和洋川芎内酯Ⅰ显著上调claudin-5蛋白表达水平(P＜0.05、0.01);藁本内酯(20、40μg/mL)、洋川芎内酯A(20 μg/mL)和洋川芎内酯Ⅰ(40、80 μg/mL)显著上调occludin蛋白表达水平(P＜0.01);藁本内酯(20μg/mL)和洋川芎内酯Ⅰ(40μg/mL)显著上调ZO-1蛋白表达水平(P＜0.05、0.01);藁本内酯、洋川芎内酯A(40、80μg/mL)和洋川芎内酯Ⅰ显著下调GLUT-1蛋白表达水平(P＜0.01);藁本内酯(20μg/mL)、洋川芎内酯A和洋川芎内酯Ⅰ(20μg/mL)显著下调P-gp蛋白表达水平(P＜0.01);藁本内酯(20 μg/mL)、洋川芎内酯A(40、80 μg/mL)和洋川芎内酯Ⅰ显著促进芍药苷跨膜转运(P＜0.05、0.01).结论 藁本内酯、洋川芎内酯A和洋川芎内酯Ⅰ能够上调紧密连接蛋白表达,抑制氧糖剥夺/再灌注诱导的MDCK-MDR1细胞损伤,促进探针药物的跨膜转运.

目的 探讨淫羊藿苷元(icaritin,ICT)在肠道内的转运机制,并阐明ICT生物利用度低的主要原因.方法 采用体外细胞模型人结肠癌Caco-2细胞及小肠癌LS-180细胞和人药物转运蛋白细胞系[P-糖蛋白(P-glycolprotein,P-gp,又名MDR1)、乳腺癌耐药蛋白(breast cancer resistance protein,BCRP)和多药耐药相关蛋白 2(multidrug resistance-associated protein 2,MRP2)过表达的狗肾细胞系MDCK-MDR1、MDCK-BCRP、MDCK-MRP2及空白转染的狗肾细胞系MDCK-mock;有机阴离子转运多肽 2B1(organic anion transporting polypeptides 2B1,OATP2B1)过表达的人胚胎肾细胞 HEK293-OATP2B1及空白转染的人胚胎肾细胞HEK293-mock],应用实时定量荧光PCR、LC-MS/MS联用、放射性同位素示踪等技术,共同研究淫羊藿苷元在肠道的跨膜转运机制.结果 Caco-2细胞研究中,ICT在低浓度给药时摄入方向表观渗透系数(Papp)较小,渗透性较弱,存在明显外排,且外排可被BCRP抑制剂明显抑制,不能被P-糖蛋白(P-glycolprotein,P-gp)抑制剂明显抑制,随着给药浓度的增加,外排逐渐减弱,摄入方向Papp逐渐增加,渗透性逐渐增强.通过人药物转运蛋白细胞系研究,ICT可显著抑制BCRP和OATP2B1的转运,对BCRP和OATP2B1转运蛋白的半数抑制浓度(IC50)分别为6.33、31.8μmol/L;同时,ICT是BCRP和OATP2B1的底物.通过LS-180细胞诱导研究表明,ICT不能诱导肠道外排蛋白P-gp、BCRP的表达上调.结论 ICT在肠内通过被动扩散和主动转运2种机制吸收,其中被动扩散能力弱,主动转运包括外排转运蛋白BCRP的外排和摄入转运蛋白OATP2B1摄入共同介导,且对肠道外排转运蛋白无诱导表达功能.BCRP的外排对ICT吸收影响有限,这可能与ICT的给药浓度及BCRP的饱和浓度有关.

目的 研究岩白菜素透血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)的转运机制.方法 采用MTT法考察岩白菜素的无毒剂量范围;采用分子对接法预测岩白菜素与P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的相互作用(结合方式及作用力);采用体外MDCK-MDR1细胞模型模拟岩白菜素的透BBB跨膜转运,并分析透过-浓度关系、透过-时间关系以及P-gp抑制剂维拉帕米对其跨膜转运的影响.结果 在5～40μmol·L-1浓度范围内岩白菜素对MDCK-MDR1细胞无毒性;岩白菜素主要通过氢键和疏水作用与P-gp结合,复合物P-gp-岩白菜素的稳定性强于P-gp-维拉帕米;岩白菜素从顶(apical,AP)端到底(basolateral,BL)端转运的表观渗透系数(Papp AP→BL)为(1.07±0.27)×10-6 cm·s-1(t=90 min,c=20μmol·L-1),外排率(efflux rate,ER)为4.32;岩白菜素与维拉帕米联合给药,岩白菜素的Papp AP→BL明显增大(P<0.01),PappBL→AP明显减小(P<0.05),ER值减小至0.98.结论 岩白菜素为透BBB中等的化合物,其跨膜转运过程除被动扩散外,还有P-gp的参与.