目的:探讨基因Panel在诊断新生儿重症监护病房（neonatal intensive care unit，NICU）患儿的基因变异中的应用价值。方法:前瞻性纳入2022年11月至2023年1月湖州市妇幼保健院NICU收治的所有日龄≤28 d的新生儿（病例组）以及在本院足月出生的200例表型无明显异常的健康新生儿作为对照组。以中国可防可治罕见病、中国新筛病种等为基础，筛选明确致病基因与变异位点为靶标，设计适合中国新生儿的基因Panel，针对542种疾病、601个基因。制备干血斑样本，采用该基因Panel进行检测，检出的致病位点采用Sanger测序验证。结合临床特征分析患儿基因检测结果，依据患儿的主要临床诊断（早产儿、新生儿高胆红素血症、出血性疾病、新生儿感染、室间隔缺损/动脉导管未闭和其他）数，分为1、2、3和≥4种诊断。采用 χ2检验及线性关联 χ2检验进行统计学分析。 结果:病例组共纳入173例患儿，致病变异检出率为30.6%（53/173），包括致病基因阳性52例及染色体拷贝数变异1例。病例组致病基因阳性检出率高于对照组［30.1%（52/173）与15.0%（30/200）， χ2=12.26， P<0.001］；病例组共检出14个致病基因，分别为 FLG、UGT1A1、G6PD、MYH7、AR、ABCC2、ACADS、C YP21A2、GJB2、MEFV、PAH、PKHD1、SCN4A及 HBA。在病例组，致病变异检出率在黄疸新生儿中高于无黄疸者［35.2%（44/125）与18.8%（9/48）， χ2=4.42， P=0.036］，但在男婴女婴间、母亲是否高龄及是否有妊娠期糖尿病、是否早产儿、是否发生出血性疾病、是否有新生儿感染、是否发生室间隔缺损/动脉导管未闭组间差异均无统计学意义（ P值均>0.05）。临床诊断数目1、2、3和≥4种的患儿，致病变异检出率呈线性增长［21.1%（8/38）、25.4%（15/59）、38.2%（13/34）与40.5%（17/42），线性关联 χ2=4.84， P=0.028］。在病例组，变异（包含致病基因阳性及携带者）检出率较高的基因有7个，检出率最高的为 UGT1A1［检出率为24.9%（43/173）］，其他依次为 GJB2、 FLG、 DUOX2、 ABCA4、 G6PD和 MUT基因；7个高频变异位点为 UGT1A1基因c.211G>A（p.Gly71Arg）、c.1091C>T（p.Pro364Leu）、c.-41_-40dupTA及c.686C>A（p.Pro229Gln）， GJB2基因c.109G>A（p.Val37Ile）， FLG基因c.12064A>T（p.Lys4022Ter）及c.3321del（p.Gly1109GlufsTer13）。 结论:本研究设计的基因Panel可以为部分NICU患儿提供有效的基因检测，尤其是临床诊断复杂的患儿。

报告1例家族性地中海热(FMF)患者。该病例因反复周期性发热和腹痛15年就诊，发作期间炎症指标轻度升高，发作间期症状完全缓解，外院多次住院查感染性指标、风湿性指标、肿瘤标志物等均为阴性，多次胃镜、肠镜、胶囊内镜、肠道计算机断层扫描及小肠镜检查均无明显阳性发现，经阑尾切除术、腹腔镜探查术和基因检测，最终发现家族性地中海热基因( MEFV)突变确诊FMF，口服秋水仙碱治疗后未再发作。

本文报道了一例以反复发热及多浆膜腔积液起病的青年女性的诊疗过程。该患者在病程中在未应用针对性治疗的情况下症状及炎症指标即呈现自发缓解及复发趋势，影像学也可见胸腔及心包积液在短时间内明显变化。在进行基础筛查除外常规感染、自身免疫性疾病及肿瘤性疾病后，经全外显子组基因检测后发现患者携带与自身炎症性疾病中的家族性地中海热相关的MEFV E148Q杂合突变，并在加用秋水仙碱治疗后，患者症状消失，未再发作。

目的:分析湖州地区新生儿遗传病致病基因变异的类型及位点分布特点。方法:以2022年10月至2023年1月湖州地区出生的1 000例新生儿(出生48 ～ 72 h)为研究对象。常规采集新生儿筛查的干血斑样本，用高通量靶向测序技术对542种疾病的致病基因进行变异筛查，通过Sanger测序对检出的变异进行验证。结果:在1 000例新生儿中，男女比例为1.02 : 1.00，其中253例未检出致病性变异，747例至少检出1个致病性变异，携带率为74.7%，排列前5位的基因为 FLG、 GJB2、 UGT1A1、 USH2A、 DUOX2。根据类型将变异分为纯合变异、复合杂合变异和半合子变异。根据美国医学遗传学与基因组学学会(ACMG)相关指南，213例新生儿携带致病性或疑似致病性变异，阳性率为21.3%，最常涉及的基因为 UGT1A1、 FLG、 GJB2、 MEFV、 G6PD。 结论:基于高通量靶向测序技术的新生儿疾病筛查扩大了筛查的范围，提高了阳性预测值。根据结果提供遗传咨询可以改善患者的管理，降低婴儿死亡率和儿童发病率，同时为其家庭成员的健康管理和再生育提供帮助，是遗传咨询和干预的重要依据。

目的:分析1个由 MEFV基因变异所致的常染色体显性遗传型地中海热(autosomal dominant-familial Mediterranean fever, AD-FMF)家系的临床及遗传学特点。 方法:先证者为男性，5岁，以"发作性无菌性脑膜炎"作为首发表现，症状表现为发作性发热伴头痛呕吐；其母亲、胞兄及胞姐均存在类似发作性发热。提取该家系成员外周血DNA，应用全外显子基因组测序法检测相关基因变异，并通过Sanger测序法验证变异。对可疑变异进行生物信息学分析。结果:经全外显子基因组测序分析发现，先证者 MEFV基因上第10外显子存在一个c.2229C>G (p.Phe743Leu)错义变异，该变异在其母亲、胞兄及胞姐中均有检出。c.2229C>G虽为国内外未报道的错义变异，但其导致的氨基酸水平的改变(p.Phe743Leu)既往在阿拉伯发病人群中有报道(PS1)；该变异在常见正常人群数据库中不存在(PM2)，且经Mutationtaster、PROVEAN、PolyPhen-2等变异预测软件预测结果均提示为有害变异；经PubMed BLAST系统分析 MEFV基因编码蛋白pyrin第743位氨基酸的改变可影响SPRY_PRY_TRIM20及SPRY_superfamily结构域的完整性；同时经计算机模拟对蛋白3D结构建模分析发现，该氨基酸的改变可导致pyrin蛋白原有空间结构发生改变，原有功能丧失(PP3)。根据美国医学遗传学与基因组学学会序列变异解释指南判定该家系检出变异为可能致病性变异(PS1+PM2+PP3)。 结论:MEFV基因c.2229C>G (p.Phe743Leu)可能为该家系罹患AD-FMF的致病原因，以"发作性无菌性脑膜炎"作为主要临床表现在AD-FMF患者中较罕见，国内尚未见报道，分析该家系成员的临床表型及基因变异特点有助于提高国内医师对该病的认识。

周期热-阿弗他口炎-咽炎-淋巴结炎(pediatric fever,aphthous stomatitis,pharyngitis and adenitis,PFAPA)是儿童期最常见的周期性发热性疾病.典型病例往往5岁前起病,具有周期性发热、阿弗他口炎、咽炎和淋巴结炎等临床表现.目前PFAPA发病机制尚不清楚,天然免疫反应和T细胞活化异常可能是主要病因.地中海热基因突变可改变PFAPA病情.诊断标准除了传统的临床症状和体征外,需要重视生物学指标,如C反应蛋白、维生素D、CD64、CXC趋化因子配体10(CXCL10)及其他非特异的炎症因子.由于PFAPA具有自限性,目前尚无公认的确切治疗方案.PFAPA治疗包括单剂糖皮质激素、扁桃体切除术及白细胞介素(IL)-1抑制剂等,治疗选择需要个体化.未来需要通过更大样本研究,探索PFAPA遗传学背景及特异的生物学标志,规范PFAPA诊治过程,提高患儿生活质量.

目的 探讨周期性发热-阿弗他口炎-咽炎-淋巴结炎(PFAPA)患儿的临床特征、血浆细胞因子变化及基因变异特点.方法 回顾性分析2015年6月至2017年5月深圳市儿童医院诊断的11例PFAPA患儿的临床资料及基因变异特点,选择15名健康体检的儿童为健康对照组,检测患儿及健康对照组血浆细胞因子白细胞介素(IL)1β、IL-6、IL-17、肿瘤坏死因子α (TNF-α)、γ干扰素(IFN-γ)、粒细胞集落刺激因子(G-CSF),比较患儿发热期与发热间歇期外周血炎症指标[白细胞(WBC)、C反应蛋白(CRP)、血浆淀粉样蛋白(SAA)]及发热期、间歇期与健康对照组血浆细胞因子,组间比较采用t检验;患儿及父母外周血行免疫基因组外显子检测.结果 11例患儿中男7例,女4例,中位起病年龄24(3～60)月龄,中位诊断年龄69(11～151)月龄,中位发热时长4(1~8)d,发热间歇期1～8周.11例患儿均有周期性发热及咽炎或扁桃体炎,7例有淋巴结炎,5例有口腔溃疡.发热期与间歇期外周血炎症指标: WBC[(14.7±4.1)×109/L比(8.4±1.9)×109/L,t=4.645,P＜0.001],CRP[(24.2±21.1)比(3.3± 2.1)mg/L,t=3.286,P=0.040],SAA[(136.4±47.7)比(7.1±1.1)mg/L,t=7.172,P＜0.001],组间比较差异均有统计学意义.血浆细胞因子检测显示,发热期分别与发热间歇期、健康对照组两两比较,IL-6[(38±10)比(8±4)、(8±5)ng/L,t=6.514、6.830]、IFN-γ[(132±43)比(49±21)、(53±21)ng/L, t=4.069、4.276]、G-CSF ([ 403±12)比(175±90)、(121±49)ng/L, t=4.219、9.047]升高,差异有统计学意义(P均＜0.05).免疫基因组外显子测序显示8例PFAPA患儿存在MEFV基因杂合变异.结论 PFAPA临床特征包括周期性发热、咽炎或扁桃体炎、阿弗他口炎及淋巴结炎,当患儿表现为周期性发热伴上述临床症状时需警惕PFAPA,基因测序分析、外周血炎症指标及细胞因子检测有助于诊断此病.

目的:探讨Pyrin在巨噬细胞M1型极化中的作用.方法:培养人单核细胞株THP-1细胞,提取人外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)、小鼠骨髓来源巨噬细胞(bone marrow-derived macrophage,BMDM).随机分为对照组和实验组,实验组用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS,100 ng/mL)复合干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ,20 ng/mL)干预(THP-1 18 h,PBMC、BMDM 24 h)构建巨噬细胞M1型极化模型.qRT-PCR、Western blot和流式细胞术检测2组M1型极化相关标志物,同时利用qRT-PCR和Western blot检测MEFV基因和Pyrin蛋白表达水平.结果:与对照组相比,实验组在LPS+IFN-γ刺激后,qRT-PCR检测THP-1细胞M1型极化标志物:肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)(t=-4.360,P=0.007)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)(t=-8.329,P=0.000)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)(t =-2.924,P=0.033)、CD14 (t=-2.858,P=0.035)、CD80(t=-3.433,P=0.019),PBMC细胞M1型极化标志物:TNF-α(t=-2.893,P=0.034)、IL-1β(t=-3.606,P=0.015)、IL-6(t=-2.895,P=0.034)、CD14(t=-2.645,P=0.046)、CD80(t=-3.648,P=0.015),BMDM细胞M1型极化标志物:TNF-α(t =-6.123,P=0.002)、IL-1β(t=-2.697,P=0.043)、单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotactic protein 1,MCP-1)(t=-4.335,P=0.007)、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)(t=-3.607,P=0.015)均明显增加,Western blot检测THP-1细胞M1型极化标志物:TNF-α (t=-3.827,P=0.031)、IL-1β(t=-4.189,P=0.025)、IL-6(t=-5.345,P=0.002)均明显增加,流式细胞术检测THP-1细胞M1型极化标志物HLA-DR(t=-3.270,P=0.017)、BMDM细胞M1型极化标志物F4/80+CD11c+(t=-3.833,P=0.009)均明显增加,提示M1型极化模型构建成功;在构建成功的M1型极化模型中,qRT-PCR检测THP-1细胞、PBMC细胞和BMDM细胞MEFV基因表达水平较对照组明显增加(t=-3.226,P=0.023;t=-2.989,P=0.030;t=-2.891,P=0.034),Western blot检测THP-1细胞Pyrin蛋白表达水平较对照组明显增加(t=-8.591,P=0.000).结论:巨噬细胞M1型极化中Pyrin表达增加,Pyrin可能与巨噬细胞M1型极化相关.

家族性地中海热(familial mediterranean fever,FMF)是一种常染色体隐性遗传病,致病基因MEFV位于染色体16p13.3.多数患者在10岁前发病,主要临床表现为反复发作的短暂的炎性反应和浆膜炎,包括发热、腹膜炎、滑膜炎和胸膜炎,肾脏淀粉样变为其最重要的并发症.儿童病例的诊断主要依据Yal(c)inkaya等提出的标准.FMF的治疗目标是控制急性发作和减少亚临床的炎性反应,秋水仙碱能有效治疗FMF,控制或减少发作,同时能预防肾脏淀粉样变的进展,诊断后应尽可能早应用;秋水仙碱无效时可选用IL-1受体拮抗剂等生物制剂.

目的 探讨家族性地中海热(FMF)的临床特征及基因突变情况.方法 选择该院收治的1例间断发热4+年的患儿(年龄13岁).对该患儿进行全面的体格检查,检测C反应蛋白(CRP)、红细胞沉降率等非特异性炎性指标,筛查致病基因MEFV突变情况,并根据临床诊断进行相应治疗.结果 患儿的临床表现符合针对儿童的FMF诊断标准,靶向捕获二代测序证实该患儿MEFV基因存在复合杂合突变,分别为c.442G＞C(p.E148Q)和c.1588-69G＞A,两个突变分别遗传自父母.给予秋水仙碱治疗后,随访7个月,患儿未再发热,红细胞沉降率降至正常.结论 FMF临床表现包括不定期反复发热,可自行缓解.通过基因突变和秋水仙碱治疗情况可以帮助诊断.