目的:探讨DMSO提取的香烟尘雾颗粒(DSP)暴露对小鼠气道反应性的影响和分子机制。方法:实验性研究。将32只8周龄SPF级Balb/c小鼠随机分为对照组、低剂量DSP (0.75 ml/L)组、中剂量DSP (1.5 ml/L)组、高剂量DSP(3 ml/L)组。每组小鼠自鼻腔滴入含0.3% DMSO无菌生理盐水或含不同浓度的DSP溶液(每只20 μl)，连续处理7 d。Myograph测定ET A受体激动剂ET-1和ET B受体激动剂蝰蛇毒素对气管环收缩的作用。Western blot检测气管中ET A、ET B、ERK 1/2、p-ERK 1/2、p65、p-p65的表达。 结果:与对照组相比，DSP滴鼻浓度依赖性增强蝰蛇毒素和ET-1对气管环的收缩效应，气管环浓度-收缩曲线左移。DSP滴鼻浓度依赖性增加小鼠气管ET A、ET B蛋白水平。高剂量DSP滴鼻显著升高小鼠气管p-ERK 1/2和p-p65水平。 结论:香烟尘雾颗粒可能通过激活ERK 1/2/NF-κB和上调内皮素受体表达引起气道高反应性改变。

目的 探讨PM2.5亚急性暴露对糖尿病小鼠血管收缩功能的影响及可能机制.方法 24只8周龄SPF级C57BL/6小鼠腹腔注射链脲佐菌素连续5d,建立糖尿病小鼠模型.以异氟醚吸入麻醉,采用口咽误吸法分别给予对照组50μlddH2O,暴露组50μl1mg/ml PM2.5悬液,两组均为12只,每周2次,连续3周.用支气管肺泡灌洗分析灌洗液细胞成分及总蛋白浓度;用压力肌动图系统观察胸主动脉对血管收缩剂去氧肾上腺素(PE)的收缩反应;用TaqMan探针法进行qRT-PCR分析,比较两组小鼠主动脉肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)及超氧化物歧化酶2(SOD2)mRNA表达.结果 PM2.5暴露组小鼠肺部出现明显的中性粒细胞浸润和蛋白渗漏,表现出明显的炎症反应.压力肌动图结果显示,PM2.5暴露组小鼠主动脉对不同浓度PE的收缩率高于对照组,EC120低于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.01).qRT-PCR结果显示,PM2.5暴露组小鼠主动脉TNF-α、IL-6和SOD2mRNA表达明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).结论 PM2.5亚急性暴露可增强糖尿病小鼠主动脉的收缩功能,促进主动脉炎症因子的表达,这可能是PM2.5促进糖尿病人群心血管疾病发生的机制之一.

目的 观察原儿茶醛(protocatechuic aldehyde,PCA)对大鼠肠系膜上动脉血管环的舒张作用,并探讨其相关机制.方法 使用Myograph动态描记系统,分别记录高钾(60 mmol/L)、5-羟色胺(5-HT)、苯肾上腺素(PE)对大鼠离体血管环的收缩作用;观察不同浓度PCA对高钾(60 mmol/L)、5-HT、PE预收缩血管环的舒张作用;用高钾(60 mmol/L)预收缩血管后,分别用内皮机制抑制剂左旋硝基精氨酸甲酯(L-NAME)、吲哚美辛(Indo)、1H-[1,2,4]恶草灵并[4,3-a]喹喔啉-1-酮(ODQ)以及钾通道阻断剂四氨基吡啶(4-AP)、四乙胺(TEA)、氯化钡(BaCl2)、格列苯脲(Glib)作用于血管环后,观察PCA对预收缩血管环的舒张作用,研究PCA的作用机制.结果 PCA在10-6~10-3 mol/L浓度范围内,对高钾(60 mmol/L)和5-HT引起的血管收缩有浓度依赖性的舒张作用(P<0.01);内皮机制抑制剂Indo对PCA引起的舒张有抑制作用(P<0.05);钾离子通道阻滞剂4-AP和BaCl2对PCA引起的舒张有抑制作用(P<0.01).结论 PCA具有舒张血管作用,其作用与抑制钾离子通道和内皮机制有关.

目的:探索桂皮醛对高糖诱导的内皮细胞氧化应激的影响及其对相关血管内皮功能损害的作用,初步分析其作用机制.方法:①制作高糖(30 mM)致人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤和血管组织损伤模型,并以低糖(5.5 raM)作为对照,高糖干预的HUVECs给予桂皮醛(10 μM)或桂皮醛+TRPA1特异性拮抗剂(HC030031,10 μM)进行干预,以DHE染色和DAF-2DA染色观察各组细胞超氧阴离子和一氧化氮(NO)水平;western blotting分析核因子E2相关因子2(Nrf2),内皮一氧化氮合酶(eNOS),磷酸化eNOS及P22phox水平.②以TRPA1敲除(TRPA1-/-)及相应的野生型(Wild type,WT)小鼠分离胸主动脉进行体外培养,设低糖(5.5 mM D-葡萄糖)组、高糖(30 mM D-葡萄糖)组、高糖+桂皮醛(10μM)组,以微血管张力测定仪测定血管内皮依赖性舒张功能和非内皮依赖性舒张功能.结果:①桂皮醛可显著减少高糖介导的内皮细胞超氧阴离子的产生,防止NO水平下降,但上述作用可被HC030031所阻断.②桂皮醛可显著防止WT小鼠胸主动脉血管内皮依赖性舒张功能减退,但对TRPA1-/-小鼠无上述作用.③桂皮醛剂量依赖性地上调Nrf2的表达,还可促进eNOS磷酸化,减少P22phox,上述作用均可被HC030031阻断.结论:桂皮醛激活TRPA1通过Nrt2信号通路可改善高糖介导的血管内皮细胞氧化应激水平,防止NO水平下降,改善血管内皮依赖性舒张功能.

本文旨在建立优化的观察肠系膜动脉三级分支(sMA,直径100～300 μm)血管张力和血管平滑肌细胞(vascular smoothmuscle cells,VSMCs)内Ca2+信号的同步变化的实验方法.分别采用DMT 360CW激光共聚焦微血管张力测定系统和Nikon C2激光共聚焦显微镜,同时记录Ca2+通道激动剂KC1、内皮素-1(endothelin-1,ET-1)以及Ca2+通道抑制剂钆离子(Gd3+)诱导的去内皮sMA血管张力和VSMCs内Ca2+信号的变化,并对共聚焦显微镜不同物镜(10×、20×、40×)下记录到的Ca2+信号荧光值变化量进行对比分析,探索最佳的实验条件.结果显示,KC1可引起sMA显著收缩,20×、40×物镜下VSMCs内Ca2+信号会同步增强,相比40×物镜,20×物镜下Ca2+信号变化量更大,荧光值更稳定,而10×物镜下VSMCs内Ca2+信号变化不明显;不同浓度的ET-1能够引起sMA浓度依赖性收缩,同样20×物镜下VSMCs内Ca2+信号也呈浓度依赖性同步增强;ET-1预收缩sMA后加入Gd3+显著降低ET-1诱导的血管收缩效应,相应地20×物镜下VSMCs内Ca2+信号也显著降低.以上结果表明,Ca2+通道激动剂或抑制剂引起血管收缩或舒张的同时,VSMCs内Ca2+信号会发生相应的变化,提示本实验方法可同步记录两者的变化,而且共聚焦显微镜20×物镜为最佳的实验条件.与分别应用血管张力检测技术测定血管张力变化和动态细胞荧光成像技术测定VSMCs内Ca2+信号变化的方法相比,同步检测张力和Ca2+信号的变化更简单实用,有效避免了不必要的实验误差.

为了观察槲皮素对大鼠离体肾动脉的舒张作用,并探讨该作用与蛋白激酶C(protein kinaseC,PKC)的关系,本研究采用血管张力测定仪记录大鼠肾动脉肌张力变化,用膜片钳全细胞记录方式记录大鼠肾动脉血管平滑肌细胞(vascular smoothmuscle cell,VSMC)L-型电压依赖性钙通道(L-type voltage-gated Ca2-channels,LVGC)电流.实验结果显示,槲皮素能够舒张60 mmol/L KC1或1×10-5 mol/L苯肾上腺素(phenylephrine,PE)预收缩的大鼠肾动脉,其最大舒张百分比分别为(84.53±7.35)％和(76.42±4.63)％;血管内皮完整组和去内皮组肾动脉相比,槲皮素对预收缩肾动脉的最大舒张百分比没有显著性差异;预孵育PKC特异性抑制剂C6303可使槲皮素对肾动脉的最大舒张幅度降低,与未孵育C6303组相比具有统计学差异(P＜0.05);离体大鼠肾动脉VSMC的正常LVGC尖峰电流密度为(23.17±1.33) pA/pF,10 μmol/L槲皮素可以降低其电流密度到(10.46±1.35) pA/pF,其抑制百分比为54.86％,1μmol/L C6303可部分逆转槲皮素对LVGC电流的降低幅度,其抑制百分比为62.08％ (P＜ 0.05).上述实验结果提示,槲皮素可舒张大鼠离体肾动脉,该作用具有浓度依赖性且不受内皮影响,可能与抑制LVGC和激活PKC有关.

目的 研究Kv1.1及Kv1.3通道亚型对小鼠肠系膜微细血管的调节作用.方法 以健康6～8周C57BL/6雄性小鼠肠系膜微细动脉作为研究对象,应用丹麦DMT520A离体微血管张力测定系统记录血管张力变化.应用广谱电压依赖性钾通道(Kv)阻断剂4-AP,Kv1.3通道选择性阻断剂PAP-1,Kv1.1通道选择性阻断剂TEA分别作用于静息状态,KCl及NE预收缩动脉,记录血管张力变化情况.应用Kv通道阻断剂4-AP,Kv1.3通道选择性阻断剂PAP-1作用于血管,观察Kv及Kv1.3通道在0 mmol/L Ca2+及2 mmol/L Ca2+ K-H液中对NE收缩曲线的作用.结果 Kv通道阻断剂4-AP可引起静息状态的血管收缩,并进一步收缩KCl预收缩的血管,但浓度依赖性舒张NE预收缩的动脉,并且与对照组相比,4-AP能明显抑制NE在0 mmol/L Ca2+液中所致的血管收缩[(3.45-±0.24)mN vs(0.11±0.02) mN,P＜0.01].Kv1.3通道选择性阻断剂PAP-1未能收缩静息状态的血管,但可使KCl预收缩的血管发生轻微舒张反应,却明显舒张NE预收缩的动脉,而且PAP-1既可抑制NE在0 mmol/L Ca2+ K-H液中所致的血管收缩[对照组vs PAP-1组:(4.28 ±0.53)mN vs(2.75 ±0.49)mN,P＜0.05],又可抑制在2 mmol/L Ca2+液中的收缩张力[对照组vsPAP-1组:(7.08 ±0.58)mN vs(5.90 ±0.80)mN,P＜0.05].Kv1.1通道选择性阻断剂TEA可引起静息状态的血管收缩,但在0 mmol/L Ca2+液中该作用消失,同时对KCl或NE预收缩的动脉均无明显作用.结论 Kv通道可调节小鼠肠系膜动脉的舒缩反应.其中Kv1.1通道主要发挥血管收缩调节作用,可能与促进血管平滑肌细胞外钙内流有关,而Kv1.3通道主要发挥血管舒张调节作用,可能同时抑制平滑肌细胞内钙释放和细胞外钙内流.

目的 研究茜草素对自发性高血压大鼠(SHR)肾叶间动脉平滑肌细胞BKCa通道功能和表达的变化.方法 应用尾动脉测压仪、压力机动图技术、膜片钳技术和Western Blot技术分别观察茜草素干预前后SHR收缩压,肾叶间动脉血管直径,BKCa通道电流和beta亚基表达的变化.结果 (1)茜草素干预后,SHR收缩压较干预前降低(P＜ 0.01);(2) ibTX抑制茜草素对SHR肾叶间动脉血管段的舒张作用(P＜0.01);(3)茜草素增强SHR肾叶间动脉平滑肌细胞BKCa通道介导的电流(P＜0.05);(4)茜草素干预第21天,BKCa通道beta亚基表达上调(P＜0.01).结论 茜草素通过调节BKCa通道beta亚基功能,引起平滑肌细胞超极化,肾叶间动脉舒张和SHR收缩压降低.

目的 研究不同动脉对同一血管收缩剂的反应性是否存在差异,及其与L-型钙通道的关系.方法 采用离体血管张力测定实验方法,测定在累积浓度血管收缩剂处理下的大鼠胸主动脉、肾内动脉或冠状动脉的张力变化以及L-型钙通道阻断剂硝苯地平(nifedipine)的影响.结果 苯肾上腺素(phenylephrine,Phe)对冠状动脉无明显影响,但可诱导胸主动脉和肾内动脉产生明显的浓度依赖性收缩,胸主动脉的pEC50明显大于肾内动脉(P<0.05);给予硝苯地平孵育后,再给予累积浓度的Phe,胸主动脉收缩的下降幅度大于肾内动脉(P<0.05).5-羟色胺(5-hydroxy tryptamine,5-HT)对胸主动脉的收缩作用不明显,但可浓度依赖性诱导肾内动脉和冠状动脉收缩;给予硝苯地平孵育后,再给予累积浓度的5-HT,冠状动脉收缩的下降幅度明显大于肾内动脉(P<0.05).胸主动脉、肾内动脉和冠状动脉均对血栓素A2类似 物 (9, 11-dideoxy-11α, 9α- epoxymethanoprostaglandin, U46619)产生浓度依赖性收缩,肾内动脉收缩量效曲线的Emax最小(P<0.05),胸主动脉收缩量效曲线pEC50最大(P<0.05).给予硝苯地平孵育后,再给予累积浓度的U46619,冠状动脉收缩的下降幅度最大,胸主动脉收缩的下降幅度最小.结论 大鼠胸主动脉、肾内动脉及冠状动脉对同一血管收缩剂的反应存在异质性,其中L-型钙通道介导的收缩作用也不同.

目的:研究红花-甘草配伍对寒凝血瘀证大鼠肠系膜动脉血管舒缩功能的影响.方法:采用冰水应激大鼠30d制作寒凝血瘀证大鼠模型,应用生物机能实验系统测定大鼠肠系膜动脉血管收缩力.结果:与对照组比较,模型组苯肾上腺素(PE)收缩血管的量效曲线、β2受体拮抗剂ICI 118551预处理后肾上腺素(AD)收缩血管的量效曲线及沙丁胺醇(SAL)舒张血管的量效曲线均明显右移,最大收缩幅度(Emax)或舒张幅度(Rmax)均明显降低,pD2值均明显减小;与模型组比较,红花组和红花-甘草组此三种量效曲线明显左移,Emax或Rmax明显升高,红花-甘草组的作用强于红花组.用高K+和PE收缩血管,Ach对模型组大鼠血管的内皮依赖性舒张作用明显减弱,红花组和红花甘草组Ach舒张血管的作用明显增强,红花甘草组的作用强于红花组.结论:红花-甘草配伍能明显改善寒凝血瘀证大鼠肠系膜血管的收缩和舒张功能,其机制可能与调节肾上腺素受体和保护血管内皮功能有关.