目的 探究左旋紫草素对急性胰腺炎动物模型胰腺组织损伤的作用及其作用机制.方法 选取SD大鼠48只,随机分为假手术组、模型组、左旋紫草素低剂量组和左旋紫草素高剂量组4组,每组12只.采用胆胰管逆行注射5%牛磺酸钠溶液构建急性胰腺炎模型,左旋紫草素低剂量组和高剂量组在造模前1 h及造模后分别腹腔注射左旋紫草素(10、20 mg/kg),模型组及假手术组给予等量0.9%氯化钠溶液.采用HE染色观察胰腺及心肌组织病理变化,免疫组织化学染色和蛋白免疫印迹(Western blot)分析NF-κB信号通路和NLRP3炎性体轴相关蛋白的表达情况,酶联免疫吸附法检测各组大鼠血清中白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)水平.结果 与假手术组相比,模型组大鼠的胰腺及心肌组织出现明显的病理损伤,NF-κB、NLRP3蛋白阳性率及相关蛋白NF-κB p65、p-p56、NLRP3、半胱氨酸蛋白酶1(Caspase-1)、ASC蛋白的相对表达水平显著升高(P＜0.01),而IκBα的相对表达水平显著降低(P＜0.01),且血清IL-1β、TNF-α、CK-MB水平显著升高(P＜0.01).与模型组相比,左旋紫草素低剂量组和高剂量组大鼠的胰腺及心肌组织损伤程度减轻,NF-κB、NLRP3蛋白阳性率及相关蛋白NF-κB p65、p-p56、NLRP3、Caspase-1、ASC蛋白的相对表达水平显著降低(P＜0.01),IκBα的相对表达水平显著升高(P＜0.01),血清IL-1β、TNF-α、CK-MB水平显著降低(P＜0.01),且左旋紫草素高剂量组的效果优于低剂量组.结论 左旋紫草素能够通过调节NF-κB信号通路和NLRP3炎性体轴减轻急性胰腺炎动物模型胰腺组织损伤,为左旋紫草素在急性胰腺炎的治疗提供重要的参考.

目的 探讨白藜芦醇对重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)大鼠胰腺腺泡细胞凋亡的影响及对NOD样受体蛋白结构域相关蛋白3(NOD like receptor pyrin domain containing 3,NLRP3)炎性体轴的调节作用.方法 将50只大鼠随机分为假手术组、模型组和白藜芦醇低、高剂量组及地塞米松组,每组10只,除假手术组大鼠外,其余组大鼠通过牛黄胆酸钠逆行胰胆管注射制备SAP模型.手术结束5 min后,白藜芦醇低、高剂量组分别腹腔注射白藜芦醇30、60 mg·kg-1,地塞米松组大鼠腹腔注射地塞米松2 mg·kg-1,每日1次,连续给药3 d,假手术组和模型组大鼠腹腔注射等量生理盐水.检测大鼠血清中淀粉酶和脂肪酶活性,白细胞介素(IL)-1β、IL-18和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor α,TNF-α)含量,检测胰腺组织病理损伤并进行病理评分,胰腺腺泡细胞凋亡指数以及NLRP3、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶 1(caspase-1)、B细胞淋巴瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)的蛋白相对表达量.结果 假手术组大鼠胰腺组织结构正常,无水肿、充血或坏死;模型组胰腺间质水肿,肺泡间隔变宽,可见大量炎性细胞浸润,实质出现点状或片状出血或坏死;白藜芦醇低、高剂量组和地塞米松组胰腺组织病变程度均减轻.与假手术组比较,模型组淀粉酶和脂肪酶活性,IL-1β、IL-18和TNF-α含量,组织病理评分,细胞凋亡指数及NLRP3、caspase-1和Bax蛋白的相对表达量均升高,Bcl-2蛋白相对表达量降低(P<0.05);与模型组比较,白藜芦醇低、高剂量组和地塞米松组淀粉酶和脂肪酶活性,IL-1β、IL-18和TNF-α含量,组织病理评分,细胞凋亡指数及NLRP3、caspase-1和Bax蛋白的相对表达量均降低,Bcl-2蛋白相对表达量升高(P<0.05);与白藜芦醇低剂量组比较,高剂量组和地塞米松组淀粉酶和脂肪酶活性,IL-1β、IL-18和TNF-α含量,组织病理评分,细胞凋亡指数及NLRP3、caspase-1和Bax蛋白的相对表达量均降低,Bcl-2蛋白相对表达量升高(P<0.05);与白藜芦醇高剂量组比较,地塞米松组淀粉酶和脂肪酶活性,IL-1β、IL-18和TNF-α含量,组织病理评分,细胞凋亡指数及NLRP3、caspase-1和Bax蛋白的相对表达量均降低,Bcl-2蛋白相对表达量升高(P<0.05).结论 白藜芦醇可减轻SAP大鼠胰腺损伤,抑制胰腺腺泡细胞凋亡,其可能是通过阻碍NLRP3炎性体轴激活发挥作用的.

目的:探讨右美托咪定(DEX)对糖尿病小鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及可能分子机制.方法:将60只8周龄的SPF级C57BL小鼠高脂喂养6周,第7周通过腹腔注射链脲佐菌素(STZ)45 mg/kg/天,1次/天,连续5天,建立2型糖尿病模型,建模后采用随机数字表法分为假手术组(sham组)、缺血再灌注组(I/R组)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)抑制剂2ME2组(2ME2组)、DEX组、DEX+2ME2组(DM组),每组12只.假手术组仅切开皮肤后缝合,其余四组开胸结扎冠状动脉左前降支,缺血60 min后松开结扎线结,再灌注120 min建立缺血再灌注损伤模型.于再灌注120min时抽取小鼠腹主动脉血,ELISA检测血清肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)、白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的浓度,随后处死小鼠,分离左心室,HE染色观察心肌组织形态结构,Western blot检测HIF-1α、nod样受体蛋白3(NLRP3)的表达量,再灌注24h时超声心动图评估心功能.结果:与sham组相比,I/R组、2ME2组、DEX组、DM组cTnⅠ、IL-1β,TNF-α浓度明显升高,心肌组织结构紊乱,心肌纤维断裂增加,心肌细胞明显肿胀,炎性细胞浸润增加,心肌组织NLRP3表达量显著增加,每搏量(SV)、射血分数(EF)％、短轴缩短率(FS)％明显下降(P＜0.05);与I/R组相比,DEX组、DM组HIF-1α表达量明显增加,NLRP3表达明显降低,cTnⅠ、IL-1β,TNF-α浓度明显下降,心肌组织结构明显改善,炎性细胞浸润明显减少,SV,EF、FS明显升高(P＜0.05);与DEX组相比,DM组HIF-1α表达量明显降低,NLRP3表达量明显增加,cTnⅠ、IL-1β、TNF-α浓度明显增加,心肌组织结构紊乱,心肌纤维断裂增加,心肌细胞明显肿胀,炎性细胞浸润增加,SV,EF、FS明显降低(P＜0.05).结论:DEX可能通过上调心肌组织HIF-1α的表达,抑制NLRP3炎性体的激活,减轻心脏炎症反应,改善糖尿病小鼠心肌缺血再灌注损伤.

目的 观察健脾益心方对心肌梗死大鼠炎症反应及心室重塑的影响,探讨其作用机制.方法 采用左冠状动脉前降支结扎法建立心肌梗死大鼠模型,将27只SD大鼠随机分为假手术组、模型组和健脾益心方组,每组9只.健脾益心方组予健脾益心方19.95 g/kg灌胃,其余2组予等量生理盐水,连续4周.超声心动图观察心脏结构和功能,HE和Masson染色观察心肌组织病理形态,TUNEL染色检测心肌细胞凋亡情况,免疫组化染色和Western blot检测心肌组织Bax、Bcl-2、细胞色素c(Cytc)、Cleaved Caspase-3、NOD样受体蛋白3(NLRP3)、Caspase-1、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6、核因子(NF)-κB p50蛋白表达.结果 与假手术组比较,模型组大鼠左室射血分数(LVEF)、左室短轴缩短率(LVFS)、左室舒张末期前壁厚度(LVAWd)、左室收缩末期前壁厚度(LVAWs)显著减少(P<0.01),左室舒张末期内径、左室收缩末期内径(LVIDs)、左室舒张末期容积、左室收缩末期容积(LVESV)显著增加(P<0.01),心脏肥大明显,心肌组织细胞排列杂乱、炎性细胞浸润严重,心肌纤维化面积比和细胞凋亡率显著升高(P<0.01),心肌组织Bax、Cytc、Cleaved Caspase-3、NLRP3、Caspase-1、ASC、IL-1β、IL-6、NF-κB p50蛋白表达显著升高,Bcl-2蛋白表达显著降低(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,健脾益心方组大鼠LVEF、LVFS、LVAWd、LVAWs显著增加,LVIDs、LVESV显著减少(P<0.01),心脏肥大改善,心肌组织病理损伤减轻,心肌纤维化面积比和细胞凋亡率显著降低(P<0.05,P<0.01),心肌组织Bax、Cytc、Cleaved Caspase-3、NLRP3、Caspase-1、ASC、IL-1β、IL-6、NF-κB p50蛋白表达显著降低,Bcl-2蛋白表达显著升高(P<0.05,P<0.01).结论 健脾益心方可缓解心肌梗死大鼠心室重塑,增强心功能,其对缺血心肌的保护作用可能与调节炎症反应、抑制心肌细胞凋亡有关.

目的 研究清肠温中方对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的溃疡性结肠炎(UC)小鼠NLRP6/IL-18/MUC2轴及肠道黏液屏障的影响及作用机制.方法 24只SPF级雄性C57BL/6小鼠随机分为空白组、模型组、清肠温中方组和美沙拉嗪组,每组6只.空白组自由饮用去离子水,模型组、清肠温中方组和美沙拉嗪组自由饮用3%DSS溶液制备UC模型.造模7 d后,清肠温中方组、美沙拉嗪组予相应药液灌胃,空白组、模型组予去离子水灌胃,连续7 d.每日称量小鼠体质量,记录小鼠疾病活动指数(DAI)评分,HE染色观察结肠组织病理变化,AB-PAS染色观察结肠组织杯状细胞情况,Western blot检测结肠组织核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白6(NLRP6)、白细胞介素(IL)-18蛋白表达,免疫荧光染色检测结肠组织黏蛋白2(MUC2)蛋白表达.结果 与空白组比较,模型组小鼠体质量下降,DAI评分显著升高(P＜0.01),结肠长度显著缩短(P＜0.01),结肠组织黏膜屏障破坏,杯状细胞数量减少,黏液分泌减少;结肠组织NLRP6、MUC2蛋白表达显著降低(P＜0.01),IL-18蛋白表达显著升高(P＜0.01).与模型组比较,清肠温中方组小鼠体质量增加,DAI评分显著降低(P＜0.01),结肠长度显著增加(P＜0.05);结肠黏膜损伤减轻,炎性细胞浸润减少,杯状细胞数量增多;结肠组织NLRP6、MUC2蛋白表达显著升高(P＜0.01),IL-18蛋白表达显著降低(P＜0.01).结论 清肠温中方能明显缓解UC小鼠疾病活动度,降低DAI评分,修复结肠组织病理损伤,增加杯状细胞数量,促进黏液分泌,其作用机制可能与调节NLRP6/IL-18/MUC2轴,修复肠道黏液屏障有关.

目的 研究2-十一烷酮对实验性哮喘小鼠重组与合成蛋白/硫氧还蛋白互作蛋白/硫氧化还原蛋白(Nrf2/TXNIP/TrX)信号的影响.方法 将Balb/c小鼠随机分为正常组、模型组、对照组、实验组和联合组,每组6 只.正常组未行造模,其余4 组给予抗原混合液200 μL致敏+1%OVA激发建模.在此基础上,对照组给予400 mg·kg-1 2-十一烷酮;实验组给予 30 mg·kg-1 ML385;联合组给予400 mg·kg-1 2-十一烷酮+30 mg·kg-1 ML385;正常组和模型组均给予等量0.9%NaCl.用苏木精-伊红染色法观察肺组织炎性细胞的浸润情况,用酶联免疫吸附试验法检测血清免疫球蛋白E(IgE)和支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素 1 β(IL-1 β)水平,用蛋白质印迹法检测Nrf2、TXNIP、TrX和NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)的表达水平.结果 实验组、对照组、联合组、模型组和正常组的炎症评分分别为(4.33±0.65)、(1.00±0.41)、(3.00±1.21)、(3.33±0.32)和(0.67±0.31)分,血清 IgE 分别为(24.17±4.59)、(87.51±9.91)、(49.43±8.49)、(129.38±13.75)和(78.00±11.35)ng·mL-1,BALF 中 IL-1β分别为(44.17±7.11)、(154.45±17.75)、(87.04±15.72)、(216.29±19.64)和(134.87±23.83)pg·mL-1,Nrf2 蛋白相对表达水平分别为 1.00±0.00、0.46±0.02、0.71±0.03、0.30±0.02 和 0.48±0.02,TXNIP 蛋白相对表达水平分别为 1.00±0.00、4.16±0.57、1.55±0.21、5.25±0.18 和 3.59±0.24,TrX蛋白相对表达水平分别为 1.00±0.00、0.38±0.02、0.79±0.01、0.24±0.03 和 0.42±0.02,NLRP3蛋白相对表达水平分别为 1.00±0.00、4.33±0.42、2.26±0.31、5.21±0.44 和3.67±0.29.实验组的上述指标与模型组比较,差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 2-十一烷酮对OVA诱导的小鼠哮喘具有明显的治疗作用,其机制可能与调节Nrf2/TXNIP/TrX信号,抑制NLRP3 炎症小体活化有关.

目的:研究土茯苓总黄酮(TFSG)对急性痛风性关节炎小鼠的抗炎作用,并初步探讨其作用机制.方法:将90只雄性C57BL/6小鼠随机分为正常组,模型组,秋水仙碱组(0.65 mg·kg-1),土茯苓总黄酮低、中、高剂量组(100,300,500 mg· kg-1),每组15只.除正常组外,其余各组采用尿酸钠结晶复制小鼠痛风性关节炎模型,测定小鼠踝关节肿胀度;酶联免疫吸附法(ELISA)检测不同组别滑膜组织中白细胞介素-1β(IL-1β),IL-6,肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)测定滑膜组织中核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3),凋亡相关斑点样蛋白(ASC),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)的蛋白表达,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测NLRP3,ASC,Caspase-1 mRNA水平的表达.结果:与正常组比较,模型组小鼠踝关节肿胀度明显增加(P＜0.01),模型组小鼠滑膜组织中IL-1β,IL-6,TNF-α水平显著升高(P＜0.01),NLRP3,ASC,Caspase-1蛋白表达和mRNA水平显著升高(P＜0.01);与模型组比较,土茯苓总黄酮组能够显著降低小鼠踝关节肿胀度(P＜0.01),滑膜组织中IL-1β,IL-6,TNF-α水平以及NLRP3,ASC,Caspase-1蛋白水平和mRNA水平显著降低(P＜0.01).结论:土茯苓总黄酮具有一定的抗痛风性关节炎作用,其作用机制与NLRP3炎性体轴有关.

目的:研究在急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)引发的心肌纤维化过程中,NLRP3炎性体-IL-1β信号轴的激活与内皮-间充质转化(endothelial-mesenchymal transition,End-MT)是否存在同一性.方法:30只成年雄性SD大鼠随机分为假手术组(n=15)与AMI组(n=15),术后28 d采用Masson染色检测心肌纤维化水平;Western blot检测NLRP3炎性体(NLRP3、ASC、pro-caspase-1和caspase-1)、内皮细胞标志物(CD31和VE-cad-herin)及间充质细胞标志物(α-SMA和FSP1)的表达;酶联免疫吸附法检测NLRP3炎性体下游因子IL-1β的表达.结果:与假手术组相比,冠脉结扎组AMI大鼠心肌纤维化水平、End-MT进展程度、NLRP3炎性体活性及caspase-1和IL-1β的表达均显著增加(P<0.05).结论:NLRP3炎性体-IL-1β信号轴的激活与End-MT进程具有显著同一性,提示NLRP3炎性体-IL-1β作为激活End-MT的潜在靶点将为研究AMI后心肌纤维化及心力衰竭提供新的理论依据.

[目的]基于Nod样受体蛋白3(Nod-like receptor pyrin domain 3,NLRP3)炎性体轴和核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)信号通路,探讨加味三妙丸(modified Sanmiao pill,MSMP)对THP-1细胞痛风炎症模型的抗炎作用及机制.[方法]通过尿酸钠(monosodium urate,MSU)和脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)共同诱导建立THP-1细胞痛风炎症模型.以MTT法测定细胞存活率;酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定细胞培养基中白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)分泌水平,Western blot检测NLRP3炎性体轴和NF-κB信号通路中相关蛋白表达情况.[结果]MSU与LPS联用可诱导THP-1细胞产生典型痛风炎症.与空白组比较,模型组THP-1细胞分泌IL-1β水平显著升高(P＜0.01);NLRP3炎性体轴相关蛋白NLRP3、含CARD结构域的凋亡相关颗粒样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing CARD,ASC)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-1(cysteinyl aspartate specific proteinase-1,caspase-1)、磷酸化NF-κB p65 (phospho-NF-κB p65,p-NF-κB p65)、磷酸化NF-κB抑制蛋白α(phospho-inhibitor of NF-κB α,p-IκBα)、磷酸化IκB激酶α(phospho-inhibitor of NF-κB kinaseα,p-IKKα)及上游调节蛋白髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)、Toll样受体2(Toll-like receptor 2,TLR2)、Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)表达明显上调(P＜0.01).与模型组比较,MSMP具有较强的抗炎效果,对NLRP3炎性体轴和NF-κB信号通路两条路径相关蛋白的异常表达均具有明显的调控作用,不同剂量的MSMP显著降低IL-1β的分泌(P＜0.01),明显下调NLRP3、ASC、caspase-1、p-NF-κB、p-IκBα、p-IKKα及MyD88、TLR2、TLR4等蛋白的表达,且具有剂量依赖性(P＜0.05,P＜0.01).[结论]MSMP在痛风炎症细胞模型上表现出较强的抗痛风性关节炎作用,其机制与调控NLRP3炎性体轴和NF-κB信号通路相关蛋白的表达密切相关.

目的 研究地黄梓醇对椎间盘髓核细胞NLRP3炎性体的调控作用.方法 采用H2O2 刺激大鼠原代椎间盘髓核细胞建立细胞模型,地黄梓醇预给药.CCK8法测定细胞活力,流式细胞仪检测髓核细胞凋亡,ELISA 测定细胞上清液T-SOD、MDA、IL-1β水平,实时荧光定量PCR测定TXNIP、NLRP3、caspase-1、IL-1β mRNA 表达,Western blot检测TXNIP、NLRP3、caspase-1、IL-1β、NF-κB p65蛋白表达,免疫荧光法检测TXNIP、NLRP3表达.结果 地黄梓醇(5、10 μmol/L)能上调细胞上清液T-SOD水平,下调MDA、IL-1β水平(P＜0.05),抑制H2 O2 诱导髓核细胞凋亡(P＜0.05),降低髓核细胞TXNIP、NLRP3、caspase-1、IL-1β mRNA及蛋白表达(P＜0.05,P＜0.01),并且10 μmol/L地黄梓醇能抑制NF-κB p65蛋白表达(P＜0.05).结论 地黄梓醇可有效抑制H2 O2 导致的髓核细胞凋亡,可能与调控ROS/NLRP3/IL-1β通路轴有关.