目的 优选土茯苓乙酸乙酯部位总黄酮的纯化条件,建立其特征图谱,并评价其对重金属铅解毒作用,以期为土茯苓解铅毒作用方面的开发和应用提供数据基础及参考.方法 采用紫外分光光度法测定总黄酮的含量,并以此作为评价指标,考察6种不同色谱填料对土茯苓乙酸乙酯部位总黄酮纯化性能,筛选最佳纯化工艺;采用高效液相色谱法建立纯化后总黄酮的特征图谱;并以重金属铅致小鼠慢性毒性为动物模型,以铅含量、生化指标及组织形态学检测结果为指标,评价纯化后总黄酮解铅毒的活性.结果 土茯苓乙酸乙酯部位总黄酮最佳纯化工艺为选用微孔树脂(MCI)填料,25％乙醇水溶液为上样溶剂冲洗3倍柱体积(VB),60％乙醇水溶液为洗脱溶剂洗脱3 VB,总黄酮含量78.0％.建立了总黄酮高效液相色谱(HPLC)特征图谱,指认了 5个特征共有峰.与模型组对比,总黄酮组小鼠采食量增加,血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、肌酐(Cr)、血尿素氮(BUN)水平趋于正常,小鼠血液、肝脏和肾脏铅含量显著降低;病理切片结果显示,总黄酮对于铅诱导的肝、肾功能损伤具有一定的保护作用.结论 土茯苓总黄酮纯化工艺具有结果稳定、操作方便、含量较高特点.总黄酮特征图谱精密度、重复性和稳定性良好.纯化后的总黄酮对重金属铅具有显著解毒作用.研究结果可为土茯苓解铅毒的药效物质基础阐明提供参考,并为研发解铅毒新药提供理论基础.

目的 探讨土茯苓总黄酮(SGF)对兔胸主动脉环的舒张作用及作用机制.方法 制备内皮完整或去内皮的兔离体胸主动脉环并检验其内皮完整性,利用MedLab-U/8c生物信号采集处理系统检测药物刺激后血管张力.①内皮完整胸主动脉环分为氯化钾(KCl)60 mmol·L-1、去氧肾上腺素(PE)1 μmol·L-1、去甲肾上腺素(NE)1 μmol·L-1、一氧化氮合酶抑制剂左旋硝基精氨酸甲酯(L-NAME)100 μmol·L-1和β2肾上腺素能受体阻滞剂ICI1185510.1 μmol·L-1组.KCl组、PE组和NE组分别预收缩胸主动脉环10 min,L-NAME组和ICI118551组分别预处理胸主动脉环30 min,并加入NE 1 μmol·L-1预收缩10 min.所有组间隔6 min加1次SGF,检测SGF 15.625～500 mg·L-1浓度作用下血管张力;②去内皮胸主动脉环分为PE 1 μmol·L-1、NE 1 μmol·L-1和氯化钙(CaCl2)组.PE组和NE组预收缩胸主动脉环10 min,间隔6 min加1次SGF,检测SGF 15.625～250 mg·L-1浓度作用下血管张力.CaCl2组在无钙环境中加入KCl 60 mmol·L-1预收缩胸主动脉环,同时加SGF 500 mg·L-1预处理20 min,间隔6 min添加1次CaCl2,检测CaCl20.15～2.4 mmol·L-1浓度作用下血管张力.同时设生理盐水组.结果 在内皮存在条件下,SGF 15.625～250 mg·L-1对KCl预收缩胸主动脉环无明显作用,而SGF 31.25～500 mg·L-1对PE和NE预收缩胸主动脉环有显著舒张作用(P<0.01),最大舒张率分别达(56±12)%和(76±13)%.SGF 500 mg·L-1对胸主动脉环的舒张功能减弱,舒张率为(40±10)%和(46±15)%.L-NAME 100 μmol·L-1预处理基本阻断SGF诱导的胸主动脉环舒张作用(P<0.01),而ICI1185510.1 μmol·L-1预处理仅部分阻断SGF的舒张效应(P<0.01).去除胸主动脉环内皮后,SGF对PE和NE预收缩胸主动脉环无舒张作用,但SGF 500 mg·L-1预处理能显著降低CaCl20.6～2.4 mmol·L-1诱导的胸主动脉环收缩(P<0.05).结论 SGF可能具有一氧化氮依赖性诱导血管舒张、钙离子通道阻滞剂和β受体阻滞剂作用.

[目的]研究土茯苓总黄酮(smilax glabra flavonoids,SGF)对单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)大鼠肾功能的影响及相关机制.[方法]将60只雄性SD大鼠分出对照组10只,剩余大鼠建立肾间质纤维化(renal interstitial fibrosis,RIF)模型,将造模后大鼠依据体质量分为模型组、SGF低剂量组15mg/(kg·d)、SGF中剂量组30mg/(kg·d)、SGF高剂量组60mg/(kg·d)及厄贝沙坦组10mg/(kg·d),每组10只.各组大鼠均连续灌胃给予对应药物2周.全自动生化仪检测大鼠血清白蛋白(albumin,ALB)、血清尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)和血清肌酐(serum creati-nine,Scr)的含量,以及24h尿蛋白(urine total protein,U-TP)、尿尿素氮(urine urea nitrogen,UUN)、尿肌酐(creatinine,CREA)的含量,并计算肌酐清除率(creatinine clearance rate,Ccr);HE染色观察肾组织病理变化;Masson染色观察SGF对肾组织纤维化的影响;免疫组化染色观察肾脏转化生长因子-β1(transformation growth factor-β1,TGF-β1)蛋白表达水平的变化.[结果](1)模型组大鼠血清BUN、Scr含量显著高于对照组(P<0.01),ALB含量显著低于对照组(P<0.01),U-TP、UUN、CREA含量也显著高于对照组(P<0.01),Ccr低于对照组(P<0.05);SGF各剂量组、厄贝沙坦组血清BUN、Scr含量均显著低于模型组(P<0.05或0.01),U-TP、UUN、CREA含量显著低于模型组(均P<0.05).(2)病理学结果显示模型组大鼠肾实质萎缩,肾小管基底膜不规则改变或完整性丧失,肾间质大量炎症细胞浸润和成纤维细胞聚集,肾间质重度纤维化,免疫组化结果显示TGF-β1蛋白表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01);SGF各剂量组、厄贝沙坦组肾脏在肾实质萎缩、肾小管结构毁损、炎细胞浸润、纤维组织增生等方面较模型组均有不同程度地改善,TGF-β1蛋白表达水平低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05或0.01).[结论]SGF能够改善UUO大鼠的肾功能,并能够减轻RIF,可能与下调TGF-β1蛋白的表达有关.

目的 提高泌感合剂的质量标准.方法 通过薄层色谱法鉴别地榆和土茯苓;通过MC13络合法,采用紫外分光光度法测定泌感合剂中总黄酮的含量.结果 总黄酮在0.044 4 ～0.133 3 mg范围内具有良好的线性关系,线性方程为Y=46.57X-0.001,r=0.999 8,平均回收率为92.85％,RSD为1.77％(n=6).结论 该方法简单、准确、数据可靠,可作为泌感合剂的质量控制方法.

目的:研究土茯苓总黄酮(TFSG)对急性痛风性关节炎小鼠的抗炎作用,并初步探讨其作用机制.方法:将90只雄性C57BL/6小鼠随机分为正常组,模型组,秋水仙碱组(0.65 mg·kg-1),土茯苓总黄酮低、中、高剂量组(100,300,500 mg· kg-1),每组15只.除正常组外,其余各组采用尿酸钠结晶复制小鼠痛风性关节炎模型,测定小鼠踝关节肿胀度;酶联免疫吸附法(ELISA)检测不同组别滑膜组织中白细胞介素-1β(IL-1β),IL-6,肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)测定滑膜组织中核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3),凋亡相关斑点样蛋白(ASC),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)的蛋白表达,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测NLRP3,ASC,Caspase-1 mRNA水平的表达.结果:与正常组比较,模型组小鼠踝关节肿胀度明显增加(P＜0.01),模型组小鼠滑膜组织中IL-1β,IL-6,TNF-α水平显著升高(P＜0.01),NLRP3,ASC,Caspase-1蛋白表达和mRNA水平显著升高(P＜0.01);与模型组比较,土茯苓总黄酮组能够显著降低小鼠踝关节肿胀度(P＜0.01),滑膜组织中IL-1β,IL-6,TNF-α水平以及NLRP3,ASC,Caspase-1蛋白水平和mRNA水平显著降低(P＜0.01).结论:土茯苓总黄酮具有一定的抗痛风性关节炎作用,其作用机制与NLRP3炎性体轴有关.

目的:探讨土茯苓总黄酮与亚硒酸钠联用对铅离子螯合能力及体外抗氧化性的影响.方法:采用双硫腙-PAR-铅分光光度法检测溶液中的铅离子含量,从而衡量出样品对铅离子的螯合能力;体外试验测定土茯苓总黄酮、亚硒酸钠、土茯苓总黄酮与亚硒酸钠联用药物清除自由基的能力和总的抗氧化能力.结果:土茯苓总黄酮、亚硒酸钠、土茯苓总黄酮与亚硒酸钠联用药物均在体外有很好的螯合作用,能够有效清除ABTS+、DPPH·和羟基自由基,并且具有很好的抗氧化能力.结论:土茯苓总黄酮与亚硒酸钠联用对铅离子有显著的螯合能力,以及具有良好的自由基清除和抗氧化能力.

目的 为了优化土茯苓产地加工与炮制一体化工艺,减少土茯苓加工炮制中的重复环节,以保证土茯苓饮片的质量.方法 以总黄酮、落新妇苷、白藜芦醇、花旗松素含量的综合评分为评价指标,在单因素试验基础上,采用Box-Behnken响应面法考察切片厚度、干燥温度和干燥时间对土茯苓有效成分含量的影响,得出最佳加工工艺.结果 优化工艺参数为切片厚度2mm、干燥温度60C、干燥时间8h.结论 土茯苓产地加工与炮制一体化工艺合理可行,可作为生产规范进行推广.

目的:探讨土茯苓总黄酮改善Lewis肺癌小鼠顺铂化疗肾损伤的作用及机制.方法:建立Lewis肺癌荷瘤小鼠模型,将30只荷瘤小鼠随机分为对照组、顺铂组、顺铂+土茯苓总黄酮组,每组10只.给药3w后,观察肿瘤体积增长情况和瘤体质量,检测各组小鼠肾脏指数、血清肌酐(SCr)及尿素氮(BUN)水平,观察肾脏病理变化,检测肾组织氧化应激指标超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和还原型谷胱甘肽(GSH)水平,RT-PCR法检测肾组织抗氧化基因Gclm、Nqo1、Gclc表达情况,免疫组化法分析抗氧化转录因子Nrf2表达情况.结果:与顺铂组比较,顺铂+土茯苓总黄酮能显著降低荷瘤小鼠肾脏指数、SCr及BUN水平,减轻肾组织病理学改变,提高肾组织SOD、CAT和GSH水平,上调抗氧化基因Gclm、Nqo1、Gclc mRNA表达,增强抗氧化转录因子Nrf2活性(P＜0.05或P＜0.01),但对荷瘤小鼠肿瘤体积大小和瘤体质量无明显影响(P＞0.05).结论:土茯苓总黄酮能够显著改善Lewis肺癌小鼠顺铂化疗肾损伤,其机制主要与促进Nrf2表达提高肾组织抗氧化能力有关.

目的 探究土茯苓解重金属铅毒性的活性物质.方法 以"总提取物-有效萃取部位-有效部位及有效成分"顺序逐一追踪解毒活性成分的研究思路,以急/慢性铅致小鼠毒性为动物模型,以铅含量、生化指标及组织形态学检测结果为指标,确认土茯苓解铅毒的活性部位.依据文献及前期化学研究基础,采用高效液相色谱(HPLC)法对活性部位进行主要成分分析.结果 急性铅中毒实验结果显示,与模型组相比,土茯苓总提物组和醋酸乙酯组小鼠血液、肝和肾脏中铅含量显著降低(P＜0.05);血清丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量有所降低(P＜0.05),谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性有不同程度提高(P＜0.05);小鼠肝和肾损伤程度均有改善.慢性铅中毒实验结果显示,与模型组相比,土茯苓总黄酮低、中、高剂量组小鼠血液、肝和肾脏铅含量均有下降(P＜0.05),且呈剂量相关性;小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)活性和肌酐(creatinine,Cr)、尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)水平均有不同程度地降低(P＜0.05),并以土茯苓总黄酮高剂量组最为显著;小鼠肝和肾损伤程度均有所改善,且土茯苓总黄酮高剂量组组织结构趋近正常.新落新妇苷、落新妇苷、花旗松素、新异落新妇苷、异落新妇苷和黄杞苷6个黄酮类化合物为总黄酮部位的主要成分,占总黄酮的58.89％.结论 土茯苓醋酸乙酯部位对铅致小鼠急性毒性有显著解毒作用,且醋酸乙酯部位优于总提物,提示醋酸乙酯部位为土茯苓解铅毒的有效萃取部位;土茯苓总黄酮具有较好的排铅作用,对铅诱导的肝、肾功能损伤具有一定的保护作用,且呈剂量相关性,提示总黄酮为土茯苓解重金属铅毒的活性部位.土茯苓总黄酮主要由新落新妇苷、落新妇苷、花旗松素、新异落新妇苷、异落新妇苷和黄杞苷6个黄酮类化合物组成,提示上述化合物可能为土茯苓解铅毒的活性成分.

[目的]探讨土茯苓总黄酮对银屑病小鼠皮肤瘙痒及炎症反应的影响,及对白细胞介素(IL)-17/Notch信号轴的调控作用.[方法]将50只小鼠按照随机数字表法随机分为正常组、模型组、土茯苓总黄酮低剂量组(简称低剂量组)、土茯苓总黄酮高剂量组(简称高剂量组)和甲氨蝶呤组,每组10只,除正常组外,其余组小鼠背部脱毛,每日涂抹5％咪喹莫特软膏62.5 mg,1次/日,连续7 d,正常组小鼠背部涂抹等量凡士林软膏,低、高剂量组小鼠每日分别用300和500 mg/kg土茯苓总黄酮灌胃,甲氨蝶呤组小鼠每日1 mg/kg甲氨蝶呤片水溶液灌胃,1次/日,连续7 d.评估小鼠皮肤瘙痒次数,进行皮损严重程度指数(PASI)评分,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测血清干扰素γ(IFN-γ)、IL-23和肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量,苏木精-伊红(HE)染色观察皮肤组织病理损伤,聚合酶链反应(PCR)检测水通道蛋白-3(AQP3)和神经酰胺(Cer)mRNA相对表达量,蛋白印迹法检测IL-17、Notch、Jagged1和Hes-1蛋白相对表达量.[结果]正常组小鼠表皮层菲薄,仅有少量炎性细胞;模型组小鼠表皮增厚,伴有角化过度或角化不全,真皮乳头出现水肿,伴血管扩张,棘层增厚,可见大量炎性细胞浸润;低、高剂量组和甲氨蝶呤组小鼠病理损伤不同程度减轻.与正常组比较,模型组小鼠皮肤瘙痒次数、PASI评分、IFN-γ、IL-23和TNF-α含量、IL-17、Notch、Jagged1和Hes-1蛋白相对表达量升高,AQP3和Cer mRNA相对表达量降低(P<0.05);与模型组比较,低、高剂量组和甲氨蝶呤组小鼠皮肤瘙痒次数、PASI评分、IFN-γ、IL-23和TNF-α含量、IL-17、Notch、Jagged1和Hes-1蛋白相对表达量降低,AQP3和Cer mRNA相对表达量升高(P<0.05);与低剂量组比较,高剂量组和甲氨蝶呤组小鼠皮肤瘙痒次数、PASI评分、IFN-γ、IL-23和TNF-α含量、IL-17、Notch、Jagged1和Hes-1蛋白相对表达量降低,AQP3和Cer mRNA相对表达量升高(P<0.05);与高剂量组比较,甲氨蝶呤组小鼠皮肤瘙痒次数、PASI评分、IFN-γ、IL-23和TNF-α含量、IL-17、Notch、Jagged1和Hes-1蛋白相对表达量降低,AQP3和Cer mRNA相对表达量升高(P<0.05).[结论]土茯苓总黄酮可改善银屑病小鼠皮肤损伤,减轻皮肤瘙痒,抑制对炎症反应,其可能是通过抑制IL-17/Notch信号轴发挥调控作用.