目的 探究左旋紫草素对急性胰腺炎动物模型胰腺组织损伤的作用及其作用机制.方法 选取SD大鼠48只,随机分为假手术组、模型组、左旋紫草素低剂量组和左旋紫草素高剂量组4组,每组12只.采用胆胰管逆行注射5%牛磺酸钠溶液构建急性胰腺炎模型,左旋紫草素低剂量组和高剂量组在造模前1 h及造模后分别腹腔注射左旋紫草素(10、20 mg/kg),模型组及假手术组给予等量0.9%氯化钠溶液.采用HE染色观察胰腺及心肌组织病理变化,免疫组织化学染色和蛋白免疫印迹(Western blot)分析NF-κB信号通路和NLRP3炎性体轴相关蛋白的表达情况,酶联免疫吸附法检测各组大鼠血清中白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)水平.结果 与假手术组相比,模型组大鼠的胰腺及心肌组织出现明显的病理损伤,NF-κB、NLRP3蛋白阳性率及相关蛋白NF-κB p65、p-p56、NLRP3、半胱氨酸蛋白酶1(Caspase-1)、ASC蛋白的相对表达水平显著升高(P＜0.01),而IκBα的相对表达水平显著降低(P＜0.01),且血清IL-1β、TNF-α、CK-MB水平显著升高(P＜0.01).与模型组相比,左旋紫草素低剂量组和高剂量组大鼠的胰腺及心肌组织损伤程度减轻,NF-κB、NLRP3蛋白阳性率及相关蛋白NF-κB p65、p-p56、NLRP3、Caspase-1、ASC蛋白的相对表达水平显著降低(P＜0.01),IκBα的相对表达水平显著升高(P＜0.01),血清IL-1β、TNF-α、CK-MB水平显著降低(P＜0.01),且左旋紫草素高剂量组的效果优于低剂量组.结论 左旋紫草素能够通过调节NF-κB信号通路和NLRP3炎性体轴减轻急性胰腺炎动物模型胰腺组织损伤,为左旋紫草素在急性胰腺炎的治疗提供重要的参考.

目的 探讨左旋紫草素(shikonin,SHK)联合顺铂(cisplatin,CDDP)对宫颈癌Hela细胞的抑制作用及作用机制.方法 采用CCK-8法分别测定不同浓度的顺铂、紫草素和紫草素联合顺铂溶液对宫颈癌Hela细胞增殖的活性抑制作用;流式细胞仪测定紫草素联合顺铂后诱导宫颈癌Hela细胞凋亡的情况;Western blot检测Caspase-3蛋白表达情况.结果 左旋紫草素对宫颈癌Hela细胞有抑制作用,24 h与48 h的IC50分别为1.05和0.89 mg·L-1.紫草素联合顺铂作用于Hela细胞48 h后,细胞数量明显变少,胞体变圆,缩小,出现明显的细胞凋亡现象;不同浓度的紫草素联合顺铂作用于Hela细胞,24 h/48 h的IC50值(0.15 mg·L-1SHK +CDDP 2.82 mg·L-1/1.87 mg·L-1;0.3 mg·L-1SHK+ CDDP 2.43 mg·L-1/1.52 mg· L-1;0.6 mg· L-1 SHK+ CDDP 2.01 mg·L-1/1.23 mg·L-1)明显低于顺铂(CDDP 3.54 mg·L-1/2.78 mg·L-1)的IC50值,具有显著性差异(P＜0.05);用流式细胞仪检测细胞凋亡率显示,随着紫草素浓度的增大,紫草素联合顺铂(1.2 mg·L-1SHK+ CDDP总凋亡率15.6％)细胞凋亡比率增高,与对照组顺铂(CDDP总凋亡率3.7％)相比,具有显著性差异(P＜0.05).0.3、0.6、1.2 mg·L-1紫草素+顺铂分别作用Hela细胞48 h后,Western blot结果显示,Caspase-3随着紫草素浓度的增加,出现了明显的裂解活化,促进了凋亡.结论 紫草素联合顺铂对宫颈癌Hela细胞有明显的抑制作用,其抑制作用与促进Hela细胞凋亡有关.

目的 建立紫草软膏的质量标准.方法 采用HPLC法同时测定制剂中左旋紫草素及β,β '-二甲基丙烯酰阿卡宁的含量,色谱柱为Inertsil ODS-3 C18柱(4.6 mm×250 mm, 5 μm);流动相为0.05%甲酸水溶液-乙腈(30∶70),流速为1.0 ml/min,检测波长275 nm,柱温25 ℃.结果 左旋紫草素、β,β '-二甲基丙烯酰阿卡宁分别在0.04～0.81 μg (r＝0.999 5)、0.41～10.36 μg (r＝0.999 2)范围内线性良好,两者的平均回收率分别为 103.32%、101.80%,RSD 分别为 1.96%、2.11%.结论 质量标准方法简便、准确,专属性强,可用于紫草软膏的质量控制.

目的:以人表皮生长因子受体(EGFR)为靶标,从左旋紫草素,乙酰紫草素,β,β-二甲基丙烯酰紫草素,β-乙酰氧基异戊酰紫草素等新疆紫草所含的4种柰醌类活性成分中筛选潜在的EGFR抑制剂.方法:利用表面等离子体共振(SPR)技术,首先通过预吸附实验,优化固定的pH和浓度,选择最佳条件,构筑EGFR生物芯片.在此基础上,以pH 7.4,浓度10 mmol·L-1的磷酸缓冲溶液(含0.005％聚山梨酯-20)作为相互作用时的缓冲溶液,实时动态研究EGFR与4种单体的相互作用.通过软件计算动力学参数,基于结合动力学常数大小,筛选抑制剂.结果:选择pH4.5,10 mmol· L-1的乙酸缓冲液、质量分数为10 mg·L-1的EGFR为其最佳的固定条件,最终固定量为250 RU.相互作用结果显示4种单体中,β,β-二甲基丙烯酰紫草素与EGFR有明显的结合作用,其他3种单体无明确响应.动力学参数计算结果显示,EGFR与β,β-二甲基丙烯酰紫草素相互作用的结合速率常数ka为1.27×104 L·mol-1·s-1,解离速率常数kd为2.92×10-2s-1,解离平衡常数KD为2.31×10-6 mol·L-1,卡方值(Chi2)为3.25.KD＜1 ×10-5mol· L-1,表明他们有较强的亲和力.结论:β,β-二甲基丙烯酰紫草素可能为EGFR的一种抑制剂.

目的:建立高效液相色谱法同时测定紫草油中左旋紫草素、欧前胡素、异欧前胡素和绿原酸含量.方法:以Waters Symmetry C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm)为色谱柱,流动相为甲醇(A)-1％甲酸(B)梯度洗脱,流速1.0 ml·min-1,检测波长为300 nm和516 nm,柱温30℃,进样量10μl.结果:左旋紫草素、欧前胡素、异欧前胡素、绿原酸分别在10～120μg·ml-1(r=0.9989)、50～500μg·ml-1(r=0.9997)、50～500μg·ml-1(r=0.9996)、5～60μg·ml-1(r=0.9996)范围呈良好的线性关系.平均加样回收率分别为96.14％(RSD=1.02％)、95.38％(RSD=1.22％)、94.94％(RSD=0.96％)、90.64％(RSD=1.01％)(n=6).结论:所建立的方法简单、准确、稳定,可用于同时测定紫草油中4种成分的含量.

目的 采用HPLC法测定新疆软紫草属4种植物(新疆紫草、黄花软紫草、天山软紫草、硬萼软紫草)根中7种萘醌类成分(左旋紫草素、乙酰紫草素、β-乙酰氧基异戊酰阿卡宁、去氧紫草素、异丁酰紫草素、β,β'-二甲基丙烯酰阿卡宁、2-甲基丁基酰紫草素)的含有量.方法 该药材石油醚提取物的分析采用Agilent-C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相乙腈-0.05％甲酸;体积流量l mL/ min;柱温30℃;检测波长275 nm.结果 7种成分在各自范围内线性关系良好,平均加样回收率为97.37％～ 99.75％,RSD为0.42％～1.94％.结论 该方法准确稳定,重复性好,可用于软紫草的质量控制.

目的研究紫草素钠脂质体的制备工艺并考察其性质,旨在开发一种安全高效的紫草新型制剂.方法利用碱溶酸提法纯化紫草提取物,并采用乙醇注入法制备紫草素钠脂质体,测定其形貌、粒径和Zeta电位.利用高效液相建立左旋紫草素含量测定方法,并考察了脂质体包封率和体外释放性能.结果紫草素钠脂质体平均粒径为104.2nm左右,且大小均一,成正态分布;Zeta电位为-14.8mV;左旋紫草素在5～50mg/L范围与峰面积呈良好的线性关系,相关系数为0.999 9;紫草素钠脂质体的包封率为43.67％,药物累积释放量为65.82％.结论成功制备了紫草素钠脂质体,具有较高的包封率和体外释放率.

目的 建立定性鉴别紫草总色素β-环糊精包合物有效成分的薄层色谱(TLC)法和测定左旋紫草素含量的高效液相色谱(HPLC)法.方法 采用TLC法进行定性鉴别,展开系统为环己烷-甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5:5:0.5:0.1,V/V/V/V);采用HPLC法测定包合物中有效成分左旋紫草素的含量,流动相为甲醇-0.025 mol/L磷酸(82:18,V/V).结果 TLC鉴别中,供试品溶液与对照品溶液在相应位置上显相同颜色斑点,且斑点清晰,阴性对照无干扰;HPLC图中,供试品溶液与对照品溶液色谱出峰时间一致,分离度好,阴性对照无干扰,含量测定中有效成分的线性关系良好,平均加样回收率为102.09％,RSD为1.87％(n=6).结论 该方法操作简便、结果准确、专属性强、重复性好,可用于该产品的质量控制.

目的:建立液相色谱串联质谱法测定紫草中醇溶性成分和水溶性成分(左旋紫草素,β,β’-二甲基丙烯酰阿卡宁,β-乙酰氧基异戊酰阿卡宁,紫草酸,咖啡酸,迷迭香酸)的含量,用于紫草的质量控制.方法:采用Agilent ZORBAX SB C18色谱柱(4.6 mm×50 mm,1.8 μm),以0.1％甲酸乙腈(A)-0.1％甲酸水溶液(B)为流动相,梯度洗脱(0～3 rmin,5％～95％A;3～7 min,95％A;7～7.01 min,95％～5％A;7.01 ～ 8.50 min,5％A);流速0.2 mL· min-1,柱温35℃,进样量5 μL;采用负离子电离模式,MRM扫描模式进行定量.结果:左旋紫草素,β,β'-二甲基丙烯酰阿卡宁,β-乙酰氧基异戊酰阿卡宁,紫草酸,咖啡酸,迷迭香酸分别在10.12～1012 μg· L-1(r=0.9981),10.88～1088 μg·L-1 (r=0.9912),10.08～806.4 μg·L-1(r =0.9976),20.32～1016 μg·L-1(r =0.9966),10.37～1037μg·L-1(r=0.9996),10.26 ～1026 μg·L-1(r =0.9978)均有良好线性关系(r≥0.9912);平均加样回收率分别为95.8％(RSD 3.2％),103.5％ (RSD2.3％),105.3％(RSD 2.1％),96.1％ (RSD 3.3％),98.9％(RSD 2.7％),100.8％(RSD 3.4％).13批次紫草样品中6个种成分含量存在较大差异.结论:所建立的方法合理可行,为综合评价紫草质量提供一定依据.

目的 建立蒙药拉哈如各贡斯勒散的定性鉴别及含量测定方法.方法 采用TLC法对方中栀子苷进行定性鉴别.运用HPLC法对紫草中左旋紫草素进行含量测定,色谱条件为Kromasil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以甲醇-0.025 mol·L-1磷酸溶液(85:15)为流动相;检测波长为516 nm;流速为1.0 mL·min-1;进样量为20μL;柱温为30℃.结果 薄层色谱中栀子苷斑点清晰,重复性好,易于鉴别.左旋紫草素质量浓度在0.61～39.00μg·mL-1范围内与峰面积线性关系良好(r=0.9999),平均回收率为98.3％(RSD=2.73％).结论 该法操作简便可行、重复性好、准确度高,可用于拉哈如各贡斯勒散的质量控制.