目的:评价右美托咪定减轻七氟烷诱发幼鼠中枢神经毒性作用与钠离子-钾离子-氯离子共转运体1(NKCC1)/钾离子-氯离子共转运体2(KCC2)的关系。方法:健康雄性SD大鼠80只，7日龄，采用随机数字表法分为4组( n＝20)：对照组(C组)、七氟烷麻醉组(S组)、右美托咪定对照组(D组)、七氟烷+右美托咪定组(SD组)。S组置于2.5%七氟烷培养箱6 h构建七氟烷麻醉模型。SD组腹腔注射右美托咪定1.0 μg/kg，随后行七氟烷麻醉。于麻醉结束后24 h时，采用Western blot法检测海马cleaved caspase-3、NKCC1和KCC2的表达水平；于麻醉结束后35 d时，采用Y迷宫实验检测认知功能，采用尼式染色法进行海马CA1区神经元计数。 结果:与C组比较，S组和SD组新异臂停留时间百分比和海马CA1区神经元计数降低，海马cleaved casepase-3和NKCC1表达上调，KCC2表达下调，NKCC1/KCC2比值升高( P<0.05)，D组上述指标差异无统计学意义( P>0.05)；与S组比较，SD组新异臂停留时间百分比和海马CA1区神经元计数升高，海马cleaved casepase-3和NKCC1表达下调，KCC2表达上调，NKCC1/KCC2比值降低( P<0.05)。 结论:右美托咪定减轻七氟烷诱发幼鼠中枢神经毒性的机制可能与维持NKCC1/KCC2表达相对稳定有关。

美国胸科学会 American Thoracic Society(ATS)蒙特利尔认知评价量表Montreal Cognitive Assessment(MoCA)梦境演绎行为 dream enactment behaviors(DEBs)目标温度管理 targeted temperature management(TTM)钠-钾-氯协同转运蛋白1 Na+-K+-2Cl-cotransporter 1(NKCC1)脑电双频指数 bispectral index(BIS)脑灌注压 cerebral perfusion pressure(CPP)脑深部电刺激术 deep brain stimulation(DBS)脑室-腹腔分流术 ventriculo-peritoneal shunt(VPS)脑室内出血 intraventricular hemorrhage(IVH)脑室外引流术 extraventricular drainage(EVD)

目的:探讨督脉电针对脑缺血再灌注后肢体痉挛大鼠大脑皮层氯离子(Cl-)稳态及γ-氨基丁酸(GABA)和钠-钾-氯协同转运蛋白1(NKCC1)表达的影响,探讨督脉电针缓解脑卒中后肢体痉挛的作用机制.方法:SD大鼠随机分为正常组9只、假手术组9只,其余采用大脑中动脉栓塞法复制脑缺血后再灌注痉挛大鼠模型,造模成功大鼠随机分为模型组、督脉电针组和巴氯芬组,每组9只.督脉电针组电针"大椎""脊中""后会",每次30 min;巴氯芬组灌胃巴氯芬(0.4 mg/kg),两组均每日1次,连续治疗7 d.应用神经功能缺损评分对各组大鼠神经功能进行评估,采用改良Ashworth量表和电生理描记检测各组大鼠肌肉反应对张力传感器的作用力;采用TTC染色检测各组大鼠脑梗死体积百分比;采用干湿重法检测各组大鼠脑含水量;采用比色法检测各组大鼠大脑皮层中Cl-和GABA含量;采用Western blot法和实时荧光定量PCR法分别检测大脑皮层中NKCC1蛋白和mRNA表达.结果:造模后,模型组、督脉电针组、巴氯芬组较正常组和假手术组神经功能缺损评分和改良Ashworth评分升高、肌肉反应对张力传感器的作用力降低(P<0.01).治疗后,督脉电针组、巴氯芬组较同组治疗前神经功能缺损评分和改良Ashworth评分降低、肌肉反应对张力传感器的作用力升高(P<0.05,P<0.01);与同时间点模型组比较,督脉电针组、巴氯芬组神经功能缺损评分和改良Ashworth评分降低、肌肉反应对张力传感器的作用力升高(P<0.05).与正常组和假手术组比较,模型组脑含水量、脑梗死体积百分比升高(P<0.01);与模型组比较,督脉电针组、巴氯芬组脑含水量、脑梗死体积百分比降低(P<0.01).与正常组和假手术组比较,模型组大脑皮层中Cl-含量升高(P<0.01),GABA含量降低(P<0.01);与模型组比较,督脉电针组、巴氯芬组Cl-含量降低(P<0.05,P<0.01),GABA含量升高(P<0.05,P<0.01).与正常组和假手术组比较,模型组大脑皮层NKCC1蛋白和mRNA表达均上调(P<0.01);与模型组比较,督脉电针组、巴氯芬组NKCC1蛋白和mRNA表达下调(P<0.01,P<0.05);督脉电针组较巴氯芬组NKCC1蛋白和mRNA表达上调(P<0.01,P<0.05).结论:督脉电针可改善脑卒中后大鼠的肢体痉挛程度,其机制可能与调控大脑皮层中Cl-稳态、增加GABA含量、下调NKCC1蛋白和mRNA表达有关,从而减轻脑水肿和梗死程度,改善神经功能缺损症状,降低肌张力.

目的:探讨重型颅脑损伤(sTBI)患者脑脊液中Na+-K+-Cl-协同转运蛋白1(NKCC1)基因启动子甲基化的临床意义.方法:招募92例sTBI患者,根据格拉斯哥预后量表(GOS)将患者分为预后良好组(GOS＞3分)63例与预后不良组(GOS≤3分)29例,选取同一时间段行腰椎内固定术后脑脊液漏的51例患者作为对照组.收集2组脑脊液样本,采用亚硫酸氢盐测序法(BSP)测定NKCC1启动子区域CpG位点的甲基化状态.采用Logistic回归分析影响sTBI患者预后的风险因素.采用受试者工作特征(ROC)曲线评估启动子甲基化的预测价值.采用定量反转录聚合酶链式反应法检测NKCC1在sTBI患者脑脊液中mRNA的表达水平.采用Pearson相关系数对启动子甲基化水平与其mRNA表达水平进行相关性分析.结果:预后不良组患者NKCC1的CpG_30.31、CpG_39.40.41位点的甲基化水平低于预后良好组(P均＜0.05).Logistic回归分析显示CpG_30.31、CpG_39.40.41位点甲基化水平是影响sTBI患者预后的独立风险因素(P均＜0.05).ROC曲线分析结果显示CpG_30.31、CpG_39.40.41位点甲基化水平预测 sTBI 患者预后的曲线下面积(AUC)为 0.7085、0.7315(P=0.0014,0.0004).NKCC1 的 CpG_30.31、CpG_39.40.41 位点甲基化水平与 NKCC1 的 mRNA 水平呈负相关(r=-0.2574、-0.1328,P=0.0138、0.0325).结论:NKCC1启动子甲基化状态对评估sTBI患者预后有价值.

目的 观察安神补脑液(ASBN)对失眠大鼠海马体γ-氨基丁酸受体(GABA)、钠-钾-氯协同转运蛋白表达的影响及其催眠作用机制.方法 采用腹腔注射对氯苯丙氨酸(PCPA)复制大鼠失眠模型,将复制成功的失眠模型大鼠随机分为氟西汀(Fluoxetine)组,模型组,ASBN高、中、低剂量(ASBN-H、M、L)组,另取15只正常大鼠作为正常组.各给药组连续7 d给予相应药物口服灌胃,模型组和正常组连续灌胃7 d 0.9％生理盐水,观察各组大鼠的一般活动状态.采用qPCR检测海马体中GABA_ARγ2和Na+-K+-Cl-协同转运蛋白(NKCC1)的表达,采用免疫组化染色(IHC)-P检测大鼠海马体中GABA_ARα1的表达.结果 ASBN可提高海马体中GABA_ARα1、GABA_ARγ2表达,降低NKCC1表达.结论 ASBN可以通过调节失眠大鼠海马体中GABA_ARα1、GABA_ARγ2和NKCC1表达量来改善大鼠的睡眠状态.

目的 观察黄连温胆汤对氯苯丙氨酸(PCPA)致失眠小鼠的睡眠改善作用及对γ-氨基丁酸(GABA)能系统通路相关受体及递质的影响,探讨其治疗失眠的作用机制.方法 将48只雄性KM小鼠随机分为空白组、模型组、地西泮组(2 mg·kg-1)及黄连温胆汤低、中、高剂量组(8.45、16.90、33.80 g·kg-1).除空白组外,其余各组小鼠均腹腔注射450 mg·kg-1PCPA(每日1次,连续2 d)建立小鼠失眠模型.造模成功后,各组小鼠灌胃给予相对应药物,每日1次,连续灌胃7 d.观察记录各组小鼠的活动次数、体质量及戊巴比妥钠阈上剂量诱导的睡眠潜伏期、睡眠时间;采用ELISA法测定小鼠脑组织中谷氨酸(GLU)、GABA含量,计算GLU/GABA比值;采用免疫组织化学法测定脑组织中谷氨酸脱羧酶65/67(GAD65/67)、γ-氨基丁酸转运蛋白亚型1(GAT-1)、γ-氨基丁酸A受体α1亚型(GABA ARα1)、γ-氨基丁酸A受体γ-2亚型(GABA ARγ-2)及Na+-K+-Cl-协同转运蛋白1(NKCC1)的表达情况;采用Western Blot法测定小鼠脑组织中GAD65/67、GABA ARα1及NKCC1蛋白的表达情况.结果 与空白组比较,模型组小鼠戊巴比妥钠阀上剂量诱导的睡眠潜伏期显著延长(P＜0.01),睡眠时间显著缩短(P＜0.01),活动次数显著增加(P＜0.01),体质量显著降低(P＜0.01),脑组织中的GABA含量明显下降(P＜0.05),GLU含量及GLU/GABA比值显著升高(P＜0.01),脑组织中GAD65/67、GABA ARα1蛋白表达显著下调(P＜0.01),NKCC1蛋白表达显著上调(P＜0.01).与模型组比较,黄连温胆汤可有效缩短戊巴比妥钠阀上剂量诱导的小鼠睡眠潜伏期(P＜0.05,P＜0.01),并延长小鼠睡眠时间(P＜0.01),减少造模后小鼠活动次数(P＜0.01),使体质量显著上升(P＜0.05,P＜0.01),升高脑组织中的GABA含量(P＜0.01),降低GLU含量及GLU/GABA比值(P＜0.01),并显著上调脑组织中GAD65/67、GAT-1、GABA ARα1、GABA ARγ-2蛋白表达(P＜0.01),下调NKCC1蛋白表达(P＜0.01).结论 黄连温胆汤具有较好的镇静催眠作用,对PCPA致失眠小鼠有睡眠改善作用,可能与其调节小鼠脑内GABA能系统通路神经递质含量及受体表达有关.