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心脏钠通道Nav1.5翻译后修饰的研究进展
编辑人员丨5天前
心脏钠通道Nav1.5是负责心肌细胞动作电位形成及冲动传导的关键蛋白,其功能状态受遗传因素及翻译后修饰的共同调控。包括磷酸化、糖基化、乙酰化、棕榈酰化、泛素化修饰等在内的多种翻译后修饰手段可单独或协同调控Nav1.5的表达、定位及通道动力学特性。Nav1.5翻译后修饰的异常也是触发心律失常的重要机制,为心律失常的病因分析及治疗提供了新的思路。
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编辑人员丨5天前
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第三代表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂相关心脏毒性研究进展
编辑人员丨5天前
奥希替尼(osimertinib)、阿美替尼(almonertinib)和伏美替尼(furmonertinib)等第三代表皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶抑制剂(TKI)是 EGFR基因突变晚期非小细胞肺癌的重要治疗手段,其心脏毒性不容忽视。目前发现的该类药物的心脏毒性以校正的QT间期延长为主,其次可见左心室射血分数下降和心力衰竭。这些心脏毒性症状可单独出现,也可同时发生。第三代EGFR-TKI心脏毒性的相关机制尚不明确,可能与抑制人表皮生长因子受体-2(HER-2)信号通路、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/Akt通路、hERG钾通道(即由 hERG基因编码的钾离子通道)、电压门控钠离子通道(Nav1.5)和L型钙离子通道等相关。临床需谨慎应用第三代EGFR-TKI,提前识别心脏毒性高风险人群并做好治疗药物监测。
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编辑人员丨5天前
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SCN10A/Nav1.8与心血管疾病关系的机制和临床研究进展
编辑人员丨5天前
Nav1.5通道是经典的心肌细胞特异型钠通道,由SCN5A基因编码。SCN5A是负责调控多种心脏功能的主要基因,在心脏发育和疾病的发生中有着重要的作用。但近年来,陆续有研究报道了神经型钠通道基因SCN10A及其编码的Nav1.8通道不仅与多种心律失常的发生有关,还与心力衰竭和肥厚心肌的离子通道重构有关,提示SCN10A/Nav1.8可能是除SCN5A/Nav1.5外,潜在的参与心脏疾病发生的钠通道。这不仅更新了以往对心脏钠通道种类的经典认识,同时也为相关疾病的治疗提供了一个新的靶点。本文就SCN10A/Nav1.8在心血管疾病中的研究进展进行综述。
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编辑人员丨5天前
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LncRNA-CCRR通过调控UBA6影响钠通道泛素化进而调控心梗后心律失常
编辑人员丨1个月前
目的 探讨心梗后心律失常钠通道泛素化的调节机制,深入研究lncRNA-CCRR在心肌梗死后调控心脏电生理重构的机制,对心梗后心律失常的防治具有重要意义.方法 应用lncRNA-CCRR转基因鼠,C57BL/6小鼠在体注射ln-cRNA-CCRR过表达腺相关病毒,感染4周后结扎冠状动脉左前降支12 h构建小鼠急性心肌梗死模型,程序性电刺激检测心律失常发生率.将lncRNA-CCRR过表达/敲减腺相关病毒、阴性对照转染至原代乳鼠心肌细胞中,缺氧12 h.FISH检测lncRNA-CCRR表达,Western blot和实时荧光定量PCR检测Nav1.5和UBA6蛋白以及Nav1.5的mRNA表达,免疫荧光检测Nav1.5和UBA6表达,RIP检测lncRNA-CCRR与UBA6作用关系,全细胞膜片钳检测细胞CCRR过表达及敲减后INa电流密度.结果 心梗小鼠心肌梗死边缘区lncRNA-CCRR表达降低,心律失常发生率升高,CCRR和Nav1.5 mRNA表达下调,Nav1.5蛋白表达下调,UBA6蛋白表达上调;过表达CCRR可逆转上述变化.转染AAV-CCRR可逆转缺氧后下调的CCRR和Nav1.5 mRNA水平,改善Nav1.5和UBA6蛋白表达,且lncRNA-CCRR与UBA6蛋白具有相互结合作用;转染AAV-CCRR后INa密度增加;转染AAV-si-CCRR后INa密度降低.结论 心梗后lncRNA-CCRR表达降低;lncRNA-CCRR可通过抑制UBA6,增加Nav1.5蛋白表达和INa电流密度改善心梗后心律失常.
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编辑人员丨1个月前
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不同温度条件对药物作用于钠通道Nav1.5的比较研究
编辑人员丨2024/2/3
由于一些离子通道药物作用具有温度敏感性,测试温度可能是其安全性评价的重要影响因素.该研究在不同温度(29、33、35和37 ℃)条件下比较研究了药物对电压门控钠通道(Nav1.5)的作用.采用全细胞膜片钳技术记录不同温度下,温度敏感性药物(美西律、奎尼丁和雷诺嗪)作用于Nav1.5-人胚肾(HEK)293细胞后钠通道电流(INa)的变化,考察温度对INa的浓度依赖性和上述药物半数抑制浓度(IC50)的影响.结果显示,美西律、奎尼丁和雷诺嗪在不同温度(29、33、35和37 ℃)条件下均能浓度依赖性地抑制INa;与29 ℃相比,上述药物在35 ℃条件下对INa的抑制作用更加显著.该研究评价了 4种温度条件下3种药物对Nav1.5的影响,有助于提高药物临床前心脏毒性筛选和评价的准确性,为GLP机构开展离子通道药物评价试验提供了参考.
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编辑人员丨2024/2/3
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突变基因SCN5A-V1279I与LQTS的相关性分析
编辑人员丨2023/9/2
目的 对SCN5A-V1279I突变基因进行生物信息学分析和蛋白质功能研究,探究该突变基因与LQTS的相关性.方法 对SCN5A-V1279I的氨基酸序列进行同源比对分析,判断该突变位点在生物进化中的保守性;评估该突变的致病性并预测其蛋白质三级结构.构建野生型(WT)及突变型(V1279I)体外表达载体,细胞免疫荧光实验观察外源蛋白的表达情况;利用全细胞膜片钳技术分析研究该突变对Nav1.5 通道电生理功能的影响.结果 同源比对结果 表明SCN5A-V1279I突变位点具有生物进化保守性;致病性预测结果 表明Mutation Taster和PolyPhen-2 预测V1279I为致病性突变,而Mutation Assessor预测V1279I突变具有中度功能影响.Swiss-model和PyMOL-2.6.0两种软件的预测结果 一致表明,缬氨酸突变为异亮氨酸后可导致Nav1.5 通道蛋白DⅢ结构域的S3 段第 1279 号位点的氨基酸侧链发生延长折叠改变,而S3 段所在的α螺旋整体跨膜结构没有发生扭结和蛋白质错误折叠.免疫荧光实验结果 显示突变蛋白可顺利表达并整合到细胞膜上且荧光强度与WT组相比没有差异;全细胞膜片钳实验结果 表明,V1279I突变组的Nav1.5 通道电生理功能特性(I-V曲线、激活/失活曲线)与WT组相比没有明显差异.结论 基于目前对SCN5A-V1279I功能研究的实验结果 ,尚不能认定V1279I突变足以导致QT间期延长的发生.
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编辑人员丨2023/9/2
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Nav1.8在心律失常中的作用
编辑人员丨2023/8/6
心律失常是心血管疾病中的常见病症,严重威胁人类的健康.目前针对心律失常的治疗方法颇多,由于心律失常发生机制的复杂性以及认识的局限性,总体疗效仍不理想.近年SCN10A基因编码的电压门控性钠通道Nav1.8备受关注,越来越多的学者发现应用A-803467特异性阻断Nav1.8,可能通过抑制心脏自主神经,改善心脏电重构,与Nav1.5相互作用改变心肌的电生理特性等途径,在心律失常中发挥着重要作用,为心律失常的治疗提供了新的思路.
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编辑人员丨2023/8/6
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锚蛋白G对心脏钠通道影响的研究进展
编辑人员丨2023/8/6
心肌细胞中离子通道和运载体的调节活动对正常的兴奋收缩偶联和心脏收缩节律非常重要.锚蛋白是心血管系统离子通道和运载体信号复合物的重要组成部分,对兴奋性细胞钠离子通道(Nav)和运载体的正确表达及膜上的定位起关键作用.本文总结了锚蛋白的生物学特性、依赖性细胞途径、对心肌细胞兴奋性的调节作用、对心梗后钠电流重构的影响和以锚蛋白G为基础的Nav1.5通道靶向途径、Brugada综合征等研究进展,认为调控心肌细胞锚蛋白G的活动对心律失常和心肌梗死的治疗有重要作用.
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编辑人员丨2023/8/6
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Expression of voltage-gated sodium channel Nav1.5 in non-metastatic colon cancer and its associations with estrogen receptor(ER)-βexpression and clinical outcomes
编辑人员丨2023/8/6
Background: Voltage-gated sodium channel 1.5 (Nav1.5) potentially promotes the migratory and invasive behaviors of colon cancer cells. Hitherto, the prognostic significance of Nav1.5 expression remains undetermined. The present study aimed to explore the associations of Nav1.5 expression with clinical outcomes and estrogen receptor-β (ER-β) expression in non-metastatic colon cancer patients receiving radical resection. Methods: A total of 269 consecutive patients with pathologically confirmed stages Ⅰ–Ⅲ colon cancer who under-went radical resection were selected. Nav1.5 and ER-β expression was detected by using immunohistochemistry (IHC) on tissue microarray constructed from paraffin-embedded specimens. IHC score was determined according to the percentage and intensity of positively stained cells. Statistical analysis was performed with the X-tile method, k coef-ficient, Chi square test or Fisher's exact test, logistic regression, log-rank test, and Cox proportional hazards models. Results: We found that Nav1.5 was commonly expressed in tumor tissues with higher mean IHC score as compared with matched tumor-adjacent normal tissues (5.1 ± 3.5 vs. 3.5 ± 2.7, P < 0.001). The high expression of Nav1.5 in colon cancer tissues was associated with high preoperative carcinoembryonic antigen level [odds ratio (OR) = 2.980;95% confidential interval (CI) 1.163–7.632; P = 0.023] and high ER-β expression (OR = 2.808; 95% CI 1.243–6.343;P = 0.013). Log-rank test results showed that high Nav1.5 expression contributed to a low 5-year disease-free survival (DFS) rate in colon cancer patients (77.2% vs. 92.1%, P = 0.048), especially in patients with high ER-β expression tumor (76.2% vs. 91.3%, P = 0.032). Analysis with Cox proportional hazards model demonstrated that high Nav1.5 expression [hazard ratio (HR) = 2.738; 95% CI 1.100–6.819; P = 0.030] and lymph node metastasis (HR = 2.633; 95% CI 1.632–4.248; P < 0.001) were prognostic factors for unfavorable DFS in colon cancer patients. Conclusions: High expression of Nav1.5 was associated with high expression of ER-β and indicated unfavorable oncologic prognosis in patients with non-metastatic colon cancer.
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编辑人员丨2023/8/6
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同型半胱氨酸短期干预对大鼠心房肌细胞钙超载的作用及机制研究
编辑人员丨2023/8/6
目的 探讨同型半胱氨酸(Hcy)对乳鼠心房肌细胞(NRIC)钙超载的作用及其机制.方法 分离出生1~3 d的SD大鼠NRIC.NRIC接种后第3天分成以下几组:(1)对照组(不做任何处理):(2)Hcy不同浓度组:NRIC中分别加入终浓度为50、100、200、500 μmol/L的Hcy培养48 h;(3)抗氧化剂(NAC)组:NRIC中加入10 μmol/L NAC培养24 h;(4) Hcy+NAC组:NRIC中加入终浓度为500μ.mol/L的Hcy培养48 h,然后加入10 μmol/L NAC培养24 h;(5)钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡδ)抑制剂(KN-93)组:NRIC加入3 μmol/L的KN-93孵育5h;(6)特异性钠电流抑制剂(ELE):NRIC中加入1 μmol/L的ELE孵育5 h;(7)Hcy+KN-93组:NRIC加入终浓度为500 μmol/L的Hcy培养48 h,然后加入3μmol/L的KN-93孵育5 h;(8)Hcy +ELE组:NRIC中加入终浓度为500 μmol/L的Hcy培养48 h,后加入1μmol/L的ELE孵育5 h;(9) Hcy+KN-93+ELE组:NRIC中加入终浓度为500 μmol/L的Hcy培养48 h,然后加入3μmol/L的KN-93和1μmol/L的ELE孵育5h.慢病毒感染NRIC的分组及其干预:将NRIC以2×106个细胞/ml的密度接种于6孔板,培养48 h至细胞融合度达70%~80%.将包装的慢病毒载体原液加入完全培养基中,分别组成CaMKⅡδ-siRNA组和Nav1.5-siRNA组.阴性感染组仅加入含绿色荧光蛋白(GFP)的阴性慢病毒载体原液.3组MOI值均为10,感染24 h.在倒置荧光显微镜下观察感染后24 h各组细胞GFP荧光百分比,判断慢病毒感染效率,定期传代并进行Puro筛选,培养扩增稳转细胞,在构建成功的慢病毒干扰组的基础上加入Hcy处理,并分为Hcy+CaMKⅡδ-siRNA组、Hcy+Nav 1.5-siRNA组和Hcy+阴性感染组3组.采用Fluo-4/AM荧光探针检测NRIC内Ca2+浓度([Ca2+]i).采用以2′,7′-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)作为探针,用流式细胞仪检测NRIC内活性氧(ROS),硫代巴比妥酸比色法检测丙二醛(MDA)和黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶(SOD)活力.Western blot法和实时荧光定量PCR法分别检测NRIC中CaMKⅡδ和Nav1.5蛋白和mRNA的表达水平.结果 (1)各组NRIC内ROS水平和MDA、SOD活力:Hcy 50、100、200和500 μ mol/L组NRIC内ROS水平和MDA活力均明显高于对照组(P均<0.05),SOD活力则均明显低于对照组(P均<0.05),且均呈现一定的浓度依赖性.另外,NAC组NRIC内ROS水平与对照组比较差异无统计学意义.(2)各组NRIC[Ca2+]i:Hcy 50、100、200和500μmol/L组NRIC [Ca2+]i分别为(155.57±7.25)、(187.43±13.07)、(248.98±27.22)和(307.36±15.09)nmol/L,其中Hcy 500 μmol/L组明显高于对照组[123.18±7.24)nmol/L,P<0.01].另外,Hcy+NAC组NRIC[Ca2+]i明显低于Hcy 500μmol/L组[(222.87±23.71) nmol/L比(305.15±39.45) nmol/L,P<0.05],NAC组与对照组比较差异则无统计学意义.(3)各组NRIC内CaMKⅡδ和Nav1.5蛋白表达:Hcy 50、100、200和500 μmol/L组NRIC内CaMKⅡδ和Nav1.5蛋白表达水平均高于对照组,且后3组差异均有统计学意义(P均<0.01),Hcy对NRIC内CaMKⅡδ和Nav 1.5蛋白表达水平的影响呈现一定的浓度依赖性.另外,NAC组NRIC内CaMKⅡδ-Thr287蛋白表达水平明显低于Hcy 500 μmol/L组(P<0.01),NAC组与对照组NRIC内CaMKⅡδ-Thr287和Nav1.5蛋白表达水平差异均无统计学意义.(4)各组NRIC内CaMKⅡδ-Thr287蛋白表达水平和[Ca2+]i:Hcy+KN-93组和Hcy+KN-93+ELE组NRIC内CaMKⅡδ-Thr287蛋白表达水平均明显低于Hcy 500 μmol/L组(P均<0.05),且以Hcy+KN-93+ELE组为甚,Hcv+ELE组亦低于Hcy 500 μmol/L组,但差异无统计学意义.Hcy+KN-93组、Hcy+ ELE组和KN-93+ ELE+ Hcy组NRIC [Ca2+]i均明显低于Hcy 500 μmol/L (P均<0.05),且以KN-93+ELE+Hcy组为甚.(5)慢病毒感染各组NRIC内CaMKⅡδ、Nav1.5蛋白和mRNA表达:慢病毒感染NRIC 24 h时GFP表达最理想(可达90%),CaMKⅡδ-siRNA组和Nav1.5-siRNA组NRIC内CaMKⅡδ、Nav1.5蛋白和mRNA表达水平均明显低于阴性感染组(P均<0.05),而阴性感染组与对照组比较差异则均无统计学意义.另外,Hcy+Nav1.5-siRNA组NRIC内CaMKⅡδ-Thr287和CaMKⅡδ蛋白以及mRNA表达水平均明显低于Hcy+阴性感染组(P均<0.05),Hcy+CaMKⅡδ-siRNA组与Hcy+阴性感染组比较Nay 1.5蛋白和mRNA水平差异则均无统计学意义.结论 高Hcy可诱导NRIC内钙超载,其机制可能为高Hcy使机体处于高氧化应激状态,通过上调钠通道蛋白,激活晚钠电流,并磷酸化CaMKⅡδ,从而共同引起钙超载.
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编辑人员丨2023/8/6
