目的:基于细胞焦亡和JNK/NEK7/NLRP3通路,研究芍药苷(PF)对小鼠脓毒症相关急性肾损伤(SA-AKI)的作用和机制.方法:腹腔注射脂多糖(LPS)建立小鼠SA-AKI模型.雄性6～8周龄C57BL/6J小鼠24只,随机数字表法分为4组:对照(control,Con)组(在相同时间腹腔注射等量含DMSO的PBS);LPS组(腹腔注射LPS 15 mg/kg);LPS+PF组(造模前30 min腹腔注射PF 50 mg/kg),LPS+PF+anisomycin组(造模前30 min腹腔注射PF 50 mg/kg和JNK激动剂anisomycin 20 mg/kg).造模后24 h取材,HE染色观察肾组织病理变化,进行肾损伤Paller评分;ELISA检测肾损伤标志物:血肌酐(Scr)、肾损伤分子1(KIM-1)和炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)、IL-18水平;Western blot检测磷酸化JNK(p-JNK)、NIMA相关激酶7(NEK7)、Nod样受体蛋白3(NLRP3)、gasdermin D的N端片段(GSDMD-N)蛋白变化.结果:相较于Con组,LPS组HE染色显示肾组织发生充血水肿,肾小管扩张管腔内出现颗粒或细胞样管型,肾间质出现充血水肿,Paller评分升高,Scr、血清KIM-1水平升高(P<0.05),肾组织IL-1β、IL-18水平升高(P<0.05),p-JNK、NEK7、NLRP3、GSDMD-N表达上升(P<0.05).相较于LPS组,LPS+PF组HE染色及肾损伤Paller评分显示肾组织病理损伤情况减轻,Scr、血清KIM-1水平降低(P<0.05),肾组织IL-1β、IL-18水平降低(P<0.05),p-JNK、NEK7、NLRP3、GSDMD-N蛋白表达下降(P<0.05).相较于LPS+PF组,LPS+PF+anisomycin组HE染色及肾损伤Paller评分显示肾组织病理损伤加重,Scr、血清KIM-1水平升高(P<0.05),肾组织IL-1β、IL-18水平升高(P<0.05),p-JNK、NEK7、NLRP3、GSDMD-N表达上升(P<0.05).结论:芍药苷可能通过抑制JNK/NEK7/NLRP3信号通路,减轻细胞焦亡和炎症反应,改善SA-AKI.

目的:本研究探讨布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)对阿尔茨海默样病变及NIMA相关激酶7(NEK7)-核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)信号通路的调控作用.方法:选取2、4、6月龄的5xFAD阿尔茨海默病(AD)模型小鼠和野生型(WT)小鼠,采用Western blot检测脑内BTK、NEK7及NLRP3等蛋白水平,免疫荧光染色法检测BTK、NEK7及NLRP3等蛋白的表达,免疫沉淀法检测NEK7和NLRP3的相互作用;选取3月龄5xFAD小鼠,随机分为BTK抑制剂依鲁替尼处理组和溶剂对照组,腹腔注射依鲁替尼(10 mg/kg)或溶剂连续14 d,随后进行Morris水迷宫和Y迷宫行为学实验分析各组小鼠学习与记忆能力;采用β-淀粉样蛋白42(Aβ42)侧脑室注射法构建AD模型,注射14 d后进行Morris水迷宫实验,Western blot检测脑内BTK蛋白水平;在BV2细胞中分别使用依鲁替尼预处理脂多糖(LPS)诱导的神经炎症模型或者Aβ42刺激的AD细胞模型,Western blot检测细胞NEK7、NLRP3、BTK以及p-BTK(Y223)蛋白水平的变化,免疫荧光染色法检测炎症小体,包括ASC、caspase-1、NEK7及NLRP3等蛋白的表达.结果:与WT组小鼠相比,5xFAD小鼠脑内炎症小体通路相关蛋白表达增加,NEK7蛋白表达增加,NEK7与NLRP3之间存在相互作用,AD模型小鼠脑内BTK蛋白围绕4G8斑块表达,表达量增加,且与Iba1存在共定位现象;与AD模型组小鼠相比,BTK抑制剂依鲁替尼处理组小鼠学习记忆功能有所改善;细胞实验结果显示,依鲁替尼预处理有效的抑制了Aβ42刺激后BV2细胞NLRP3炎症小体通路相关蛋白以及NEK7的表达.结论:BTK能够通过NEK7-NLRP3相互作用介导神经炎症,抑制BTK可减轻神经炎症、从而改善阿尔茨海默样病变小鼠的学习记忆功能.

目的:评价NIMA相关激酶7/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NEK7/NLRP3)信号通路在小鼠脓毒症相关性脑病中的作用。方法:健康成年雄性C57BL/6小鼠150只，8~12周龄，体重20~25 g，采用随机数字表法分为5组( n＝30)：假手术组(Sham组)、脓毒症组(CLP组)、脓毒症+NLRP3抑制剂MCC950组(CLP+MCC950组)、脓毒症+NEK7 siRNA组(CLP+NEK7 siRNA组)和脓毒症+NC siRNA组(CLP+NC siRNA组)。采用经典的盲肠结扎穿孔法制备脓毒症模型。术后连续3 d，CLP+MCC950组每天腹腔注射MCC950 10 mg/kg，Sham组每天腹腔注射等量生理盐水。分别于术毕即刻和术后第3天，CLP+ NEK7 siRNA组脑室注射NEK7 siRNA 3 nmol/20 g，Sham组脑室注射相同剂量NC siRNA。术后第4天记录小鼠生存情况。分别于术后第4和7天，每组取10只小鼠行Y迷宫空间识别实验。术后第7天，每组随机处死5只小鼠，麻醉后取海马组织，采用ELISA法检测IL-1β、IL-18和TNF-α含量；每组随机处死6只小鼠，取海马组织，采用Western blot法检测NEK7、NLRP3、活化的半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶1(cleaved-caspase-1)和凋亡相关点样蛋白(ASC)的表达。 结果:术后第4天，Sham组、CLP组、CLP+MCC950组和CLP+NEK7 siRNA组、CLP+NC siRNA组小鼠生存率分别为100%、50%、73%、60%、53%。与Sham组相比，CLP组术后第4和7天时新异臂进入频次减少，停留时间缩短，术后第7天海马组织IL-1β、IL-18和TNF-α含量升高，NEK7、NLRP3、cleaved-caspase-1和ASC表达上调( P<0.05)；与CLP组相比，CLP+MCC950组和CLP+NEK7 siRNA组术后第4和7天新异臂进入频次增多，停留时间延长，术后第7天海马组织IL-1β、IL-18和TNF-α含量降低，CLP+MCC950组海马组织NLRP3、cleaved-caspase-1和ASC表达下调，CLP+NEK7 siRNA组海马组织NEK7、NLRP3、cleaved-caspase-1和ASC表达下调( P<0.05)，CLP+NC siRNA组上述各指标差异无统计学意义( P>0.05)。 结论:NEK7/NLRP3信号通路参与了小鼠SAE的过程，其机制可能与促进炎症反应有关。

目的:探讨NEK7在乳腺癌中的促癌作用及其潜在的作用机制。方法:qPCR法检测NEK7在乳腺癌组织和细胞中的表达，CCK-8法检测NEK7对乳腺癌细胞增殖的影响。生物学数据库筛查可与NEK7相互作用的蛋白，过表达NLRP3观察乳腺癌细胞增殖活性，在乳腺癌细胞中过表达NEK7，Western blot检测NLRP3蛋白表达水平，ELISA检测IL-1β和IL-18表达水平。结果:NEK7在乳腺癌组织和细胞中过表达并可促进乳腺癌细胞增殖[NEK7过表达组：24 h为（0.33±0.02）、48 h为（0.59±0.02）、72 h为（0.76±0.02）；空白对照组：24 h为（0.30±0.02）、48 h为（0.45±0.02）、72 h为（0.62±0.03）；NEK7空载组：24 h为（0.32±0.02）、48 h为（0.46±0.02）、72 h为（0.63±0.03）]。NEK7与NLRP3表达呈正相关（ R=0.13），过表达NLRP3可增强乳腺癌细胞增殖活性[NLRP3过表达组：24 h为（0.35±0.02）、48 h为（0.65±0.02）、72 h为（0.80±0.03）；空白对照组：24 h为（0.33±0.02）、48 h为（0.51±0.02）、72 h为（0.66±0.03）；NLRP3空载组：24 h为（0.34±0.02）、48 h为（0.52±0.03）、72 h为（0.66±0.03）]。NEK7可正调控NLRP3蛋白表达，及上调IL-1β[NEK7过表达组（129.96±7.62）pg/ml，空白对照组（19.80±2.42）pg/ml，NEK7空载组（21.30±1.77）pg/ml]和IL-18[NEK7过表达组（144.08±17.20）pg/ml，空白对照组（16.84±2.34）pg/ml，NEK7空载组（17.64±1.94）pg/ml]表达水平。 结论:高表达的NEK7通过激活NLRP3炎性小体参与乳腺癌发生发展，显示NEK7可作为乳腺癌治疗的潜在作用靶点。

目的:探讨百草枯（PQ）染毒肺泡上皮细胞内KCa3.1对NLRP3炎症小体的调控作用。方法:体外培养A549细胞，分为对照组、TRAM-34（KCa3.1的特异性抑制剂）组、PQ组及PQ+TRAM-34组。免疫荧光检测细胞中KCa3.1的变化。Western Blot检测NLRP3炎症小体相关蛋白及NIMA相关激酶7（NEK7）蛋白的表达。细胞钾离子浓度变化比色法定量检测试剂盒检测钾离子的变化。结果:免疫荧光结果提示A549细胞染毒后，KCa3.1表达明显增加。Western Blot结果提示PQ处理后，A549细胞内NLRP3炎症小体（相关蛋白NLRP3、ASC、Caspase-1）及NEK7蛋白表达明显升高；抑制KCa3.1后，NLRP3炎症小体及NEK7表达减少；且差异具有统计学意义[NLRP3蛋白（NLRP3/β-actin，对照组比抑制剂组比染毒组比染毒+抑制剂组）：[(0.02±0.00) vs (0.03±0.00) vs （0.74±0.00） vs （0.32±0.01）]；ASC蛋白（ASC/ β-actin，对照组比抑制剂组比染毒组比染毒+抑制剂组）: [（0.12±0.01） vs（0.11±0.03） vs（0.46±0.02） vs（0.17±0.03）]；Caspase-1蛋白（Caspase-1/ β-actin，对照组比抑制剂组比染毒组比染毒+抑制剂组）:[(0.05±0.00) vs 0.04±0.00) vs （0.34±0.03） vs（0.15±0.01）];NEK7蛋白（NEK7/ β-actin，对照组比染毒组比染毒+抑制剂组）：[(0.38±0.03) vs （0.83±0.02) vs (0.51±0.01)，均 P<0.01]。比色法检测结果提示PQ处理后细胞内钾离子明显下降，抑制KCa3.1后细胞内钾离子下降明显减少；且差异有统计学意义（对照组比染毒组比染毒+抑制剂组：[(1.00±0.00) vs （0.60±0.05） vs（0.86±0.02），均 P<0.01]。 结论:PQ中毒后，可能激活KCa3.1促使细胞内钾离子外流，上调NEK7表达，从而激活NLRP3炎症小体，促进肺纤维化的发生。

为了研究滇产南方红豆杉中紫杉烷二萜类成分及具骨髓瘤细胞毒活性,运用正相、反相以及排阻色谱等分离手段对南方红豆杉枝叶提取物的化合物进行分离和纯化,通过NMR等波谱手段鉴定化合物结构,并采用CCK-8法分析化合物体外抑制NEK2过表达骨髓瘤细胞增殖作用.从该植物中分离鉴定了 16个紫杉烷二萜类化合物,分别为13-肉桂酰基-1-脱羟基巴卡丁 Ⅳ(1)、紫杉素(2)、5α-桂皮酰氧基-9α,10,13α-三乙酰氧基紫杉-4(20),11-二烯(3)、紫杉宁 E(4)、hongdoushan A(5)、11-diene-2α,5α,9α,10β,13β-pentol-2α,9α,10β,13α-tetraacetate-5α-cinnamate(6)、taxezopidine H(7)、紫杉素 B(8)、taxuyunnanine C(9)、1-deoxybaccatin Ⅵ(10)、19-羟基巴卡丁 Ⅲ(11)、巴卡丁 Ⅲ(12)、7,9,13-三去乙酰基巴卡丁 Ⅵ(13)、10-脱乙酰基巴卡丁 Ⅲ(14)、紫杉醇(15)、7-表紫杉醇(16),其中化合物1为新化合物,化合物5、13为首次从南方红豆杉中分离得到,化合物2、6、7、11有明显的抑制NEK2过表达骨髓瘤细胞增殖作用(IC50=24.0、23.5、26.1、18.3 μmol/L),化合物 16 的抑制作用尤为显著(IC50=0.6 μmol/L).

目的 探讨黄芩汤通过调控NEK7-NLRP3/IL-1β炎症轴改善肥胖高血压大鼠管周脂肪炎性微环境,保护血管内皮功能.方法 选取 4 周龄雄性Wistar大鼠 50 只,随机选取 10 只为对照组,另 40 只喂高盐高脂饲料构建肥胖高血压模型,造模成功的大鼠(20 只)随机分为模型组,黄芩汤正常剂量组、高剂量组和IL-1β抑制剂组,每组 5 只.中药治疗组从第 12 周起,正常剂量组灌胃黄芩汤 2.835 g·kg-1,高剂量组灌胃 5.67 g·kg-1,IL-1β抑制剂组腹腔注射 1.5 mg·kg-1 AS101,每周 3 次,干预 8 周.末次给药 12 h后称质量并采血,分离胸主动脉及管周脂肪组织.检测血清炎症因子含量,观察病理变化,免疫荧光检测eNOS表达,Western blot和qPCR检测NEK7、NLRP3、Caspase-1、ASC、IL-1β的表达.结果 模型组大鼠体质量显著增加,管周脂肪脂滴面积增大,内皮损伤严重;模型组收缩压、舒张压,血清IL-1β、IL-6 和TNF-α显著升高,eNOS表达显著降低,NEK7、NLRP3、Caspase-1、ASC和IL-1β蛋白及mRNA表达水平显著升高.与模型组相比,黄芩汤和IL-1β抑制剂组大鼠体质量降低,内皮损伤减轻,收缩压和舒张压降低,血清IL-1β、IL-6 和TNF-α降低,eNOS表达升高.黄芩汤高剂量组和IL-1β抑制剂组NEK7、NLRP3、Caspase-1、ASC和IL-1β蛋白表达显著降低.另外,黄芩汤可保护肥胖高血压血管内皮功能,其中高剂量组效果较为明显.结论 黄芩汤能通过调节NEK7-NLRP3/IL-1β炎症轴,改善血管周围脂肪炎性微环境,保护肥胖高血压大鼠的血管内皮功能.

目的:基于永离有丝分裂基因A相关激酶9(NEK9)/转移相关肿瘤基因家族2(MTA2)信号通路泛素化修饰探讨胃癌(GC)的转移机制.方法:使用癌症基因组图谱(TCGA)和Kaplan-Meier Plotter数据库分析NEK9表达与GC分期、预后之间的关联.体外实验中,将GC细胞分为:对照组、shNC 组、shNEK9 组、shNC+NC-OE 组、shNEK9+NC-OE 组和 shNEK9+MTA2-OE 组.分别采用 MTT 和Transwell法测定细胞的增殖、迁移和侵袭,并通过 Western blot检测 NEK9、MTA2、上皮间充质转化(EMT)标记和PI3K/AKT信号通路蛋白表达.结果:TCGA数据库分析显示,NEK9 mRNA在肿瘤组织中的表达明显上调,并且与TNM分期较晚和NEK9高表达者的预后较差密切相关.此外,NEK9在7个GC细胞系中的表达明显高于正常胃上皮GES-1细胞(P＜0.05).与对照组相比,shNEK9组细胞活力、相对集落形成、EdU阳性细胞数、侵袭和迁移细胞数均显著降低(P＜0.05).此外,在shNEK9组细胞中,E-钙粘蛋白水平上调(P＜0.05),波形蛋白水平下调(P＜0.05).通过免疫共沉淀试验证明NEK9与MTA2有相互作用.NEK9敲低加速了 HGC-27细胞中MTA2的降解,并且 MTA2泛素化在NEK9沉默的细胞中增加.与shNEK9+NC-OE组组相比,shNEK9+MTA2-OE组相对集落形成、EdU阳性细胞数和迁移和侵袭数均显著增加(P＜0.05).结论:NEK9在GC中明显上调,其敲低在体外抑制GC细胞的生长和转移.NEK9可能通过去泛素化途径稳定 MTA2进而激活PI3K-AKT信号通路来对GC细胞产生促癌影响.

目的 探究脑出血患者脑组织中Nod样受体蛋白-3(NLRP3)、NIMA相关蛋白激酶7(NEK7)表达水平与疾病严重程度的相关性.方法 前瞻性选取2017年1月至2020年12月郑州颐和医院诊治的80例脑出血患者进行研究,取皮层造瘘通道靠近血肿0.5 cm处的脑组织为靠近组,另取远离血肿位置的脑组织为远离组.依据脑出血患者出血量将其分为少量组(出血量<15 mL)29例、中量组(出血量15～30 mL)27例和大量组(出血量>30 mL)24例;按美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分将患者分为轻型组(1～4分)30例、中型组(5～15分)27例和重型组(>15分)23例.采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法测定各组脑组织中NEK7 mRNA、NLRP3 mRNA表达水平;采用Pearson法分析脑出血患者血肿0.5 cm处脑组织中NEK7 mRNA表达水平与NLRP3 mRNA表达水平的相关性;比较不同出血量、不同严重程度的脑出血患者距离血肿0.5 cm处脑组织中NEK7 mRNA、NLRP3 mRNA表达水平.结果 靠近组患者脑组织中NEK7 mRNA、NLRP3 mRNA表达水平分别为1.72±0.58、1.69±0.57,明显高于远离组的1.03±0.34、1.01±0.33,差异均有统计学意义(P<0.05);脑出血患者血肿0.5 cm处脑组织中NEK7 mRNA表达水平与NLRP3 mRNA表达水平呈正相关(r=0.563,P<0.05);脑出血患者距离血肿 0.5 cm处脑组织中NEK7 mRNA、NLRP3 mRNA表达水平随着出血量的增加而升高,差异均有统计学意义(P<0.05);脑出血患者距离血肿0.5 cm处脑组织中NEK7 mRNA、NLRP3 mRNA表达水平随着NIHSS评分的增加而升高,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 脑出血患者距离血肿0.5 cm处脑组织中NEK7、NLRP3表达水平明显升高,两者均与出血量和疾病严重程度显著相关,检测距离血肿0.5 cm处脑组织NEK7、NLRP3有利于判断脑出血严重程度及出血情况.

目的:探索资生肾气丸对醋酸致小鼠扭体模型的镇痛作用.方法:将42只小鼠随机分为7组,分别给予相应药液灌胃,末次灌胃1h后造模,建立醋酸致小鼠扭体模型.观察小鼠扭体次数,计算其扭体抑制率,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组小鼠血清白细胞介素-1 β(IL-1 β)、前列腺素E2(PGE2)、神经生长因子(NGF)含量,采用实时PCR(RT-PCR)检测嘌呤配体P2X门控离子通道型受体7(P2X7R)mRNA、Nod样受体蛋白3(NLRP3)mRNA、NIMA相关激酶7(NEK7)mRNA的表达情况.结果:与模型组比较,随着时间的增加,资生肾气丸低剂量、中剂量、高剂量均可抑制小鼠扭体反应,降低扭体次数,增加小鼠扭体抑制率,降低小鼠血清中IL-1β、PGE2、NGF 的含量,降低P2X7RmRNA、NLRP3mRNA、NEK7mRNA的表达以抑制疼痛反应,以高剂量效果最优(P＜0.05),与吲哚美辛、痛风舒片疗效相近.结论:资生肾气丸高剂量对小鼠血清疼痛因子的降低效果显著,其机制可能与嘌吟配体P2X门控离子通道型受体7信号通路有关.