目的:评价NIMA相关激酶7/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NEK7/NLRP3)信号通路在小鼠脓毒症相关性脑病中的作用。方法:健康成年雄性C57BL/6小鼠150只，8~12周龄，体重20~25 g，采用随机数字表法分为5组( n＝30)：假手术组(Sham组)、脓毒症组(CLP组)、脓毒症+NLRP3抑制剂MCC950组(CLP+MCC950组)、脓毒症+NEK7 siRNA组(CLP+NEK7 siRNA组)和脓毒症+NC siRNA组(CLP+NC siRNA组)。采用经典的盲肠结扎穿孔法制备脓毒症模型。术后连续3 d，CLP+MCC950组每天腹腔注射MCC950 10 mg/kg，Sham组每天腹腔注射等量生理盐水。分别于术毕即刻和术后第3天，CLP+ NEK7 siRNA组脑室注射NEK7 siRNA 3 nmol/20 g，Sham组脑室注射相同剂量NC siRNA。术后第4天记录小鼠生存情况。分别于术后第4和7天，每组取10只小鼠行Y迷宫空间识别实验。术后第7天，每组随机处死5只小鼠，麻醉后取海马组织，采用ELISA法检测IL-1β、IL-18和TNF-α含量；每组随机处死6只小鼠，取海马组织，采用Western blot法检测NEK7、NLRP3、活化的半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶1(cleaved-caspase-1)和凋亡相关点样蛋白(ASC)的表达。 结果:术后第4天，Sham组、CLP组、CLP+MCC950组和CLP+NEK7 siRNA组、CLP+NC siRNA组小鼠生存率分别为100%、50%、73%、60%、53%。与Sham组相比，CLP组术后第4和7天时新异臂进入频次减少，停留时间缩短，术后第7天海马组织IL-1β、IL-18和TNF-α含量升高，NEK7、NLRP3、cleaved-caspase-1和ASC表达上调( P<0.05)；与CLP组相比，CLP+MCC950组和CLP+NEK7 siRNA组术后第4和7天新异臂进入频次增多，停留时间延长，术后第7天海马组织IL-1β、IL-18和TNF-α含量降低，CLP+MCC950组海马组织NLRP3、cleaved-caspase-1和ASC表达下调，CLP+NEK7 siRNA组海马组织NEK7、NLRP3、cleaved-caspase-1和ASC表达下调( P<0.05)，CLP+NC siRNA组上述各指标差异无统计学意义( P>0.05)。 结论:NEK7/NLRP3信号通路参与了小鼠SAE的过程，其机制可能与促进炎症反应有关。

目的:探讨百草枯（PQ）染毒肺泡上皮细胞内KCa3.1对NLRP3炎症小体的调控作用。方法:体外培养A549细胞，分为对照组、TRAM-34（KCa3.1的特异性抑制剂）组、PQ组及PQ+TRAM-34组。免疫荧光检测细胞中KCa3.1的变化。Western Blot检测NLRP3炎症小体相关蛋白及NIMA相关激酶7（NEK7）蛋白的表达。细胞钾离子浓度变化比色法定量检测试剂盒检测钾离子的变化。结果:免疫荧光结果提示A549细胞染毒后，KCa3.1表达明显增加。Western Blot结果提示PQ处理后，A549细胞内NLRP3炎症小体（相关蛋白NLRP3、ASC、Caspase-1）及NEK7蛋白表达明显升高；抑制KCa3.1后，NLRP3炎症小体及NEK7表达减少；且差异具有统计学意义[NLRP3蛋白（NLRP3/β-actin，对照组比抑制剂组比染毒组比染毒+抑制剂组）：[(0.02±0.00) vs (0.03±0.00) vs （0.74±0.00） vs （0.32±0.01）]；ASC蛋白（ASC/ β-actin，对照组比抑制剂组比染毒组比染毒+抑制剂组）: [（0.12±0.01） vs（0.11±0.03） vs（0.46±0.02） vs（0.17±0.03）]；Caspase-1蛋白（Caspase-1/ β-actin，对照组比抑制剂组比染毒组比染毒+抑制剂组）:[(0.05±0.00) vs 0.04±0.00) vs （0.34±0.03） vs（0.15±0.01）];NEK7蛋白（NEK7/ β-actin，对照组比染毒组比染毒+抑制剂组）：[(0.38±0.03) vs （0.83±0.02) vs (0.51±0.01)，均 P<0.01]。比色法检测结果提示PQ处理后细胞内钾离子明显下降，抑制KCa3.1后细胞内钾离子下降明显减少；且差异有统计学意义（对照组比染毒组比染毒+抑制剂组：[(1.00±0.00) vs （0.60±0.05） vs（0.86±0.02），均 P<0.01]。 结论:PQ中毒后，可能激活KCa3.1促使细胞内钾离子外流，上调NEK7表达，从而激活NLRP3炎症小体，促进肺纤维化的发生。

目的:探讨NEK7在乳腺癌中的促癌作用及其潜在的作用机制。方法:qPCR法检测NEK7在乳腺癌组织和细胞中的表达，CCK-8法检测NEK7对乳腺癌细胞增殖的影响。生物学数据库筛查可与NEK7相互作用的蛋白，过表达NLRP3观察乳腺癌细胞增殖活性，在乳腺癌细胞中过表达NEK7，Western blot检测NLRP3蛋白表达水平，ELISA检测IL-1β和IL-18表达水平。结果:NEK7在乳腺癌组织和细胞中过表达并可促进乳腺癌细胞增殖[NEK7过表达组：24 h为（0.33±0.02）、48 h为（0.59±0.02）、72 h为（0.76±0.02）；空白对照组：24 h为（0.30±0.02）、48 h为（0.45±0.02）、72 h为（0.62±0.03）；NEK7空载组：24 h为（0.32±0.02）、48 h为（0.46±0.02）、72 h为（0.63±0.03）]。NEK7与NLRP3表达呈正相关（ R=0.13），过表达NLRP3可增强乳腺癌细胞增殖活性[NLRP3过表达组：24 h为（0.35±0.02）、48 h为（0.65±0.02）、72 h为（0.80±0.03）；空白对照组：24 h为（0.33±0.02）、48 h为（0.51±0.02）、72 h为（0.66±0.03）；NLRP3空载组：24 h为（0.34±0.02）、48 h为（0.52±0.03）、72 h为（0.66±0.03）]。NEK7可正调控NLRP3蛋白表达，及上调IL-1β[NEK7过表达组（129.96±7.62）pg/ml，空白对照组（19.80±2.42）pg/ml，NEK7空载组（21.30±1.77）pg/ml]和IL-18[NEK7过表达组（144.08±17.20）pg/ml，空白对照组（16.84±2.34）pg/ml，NEK7空载组（17.64±1.94）pg/ml]表达水平。 结论:高表达的NEK7通过激活NLRP3炎性小体参与乳腺癌发生发展，显示NEK7可作为乳腺癌治疗的潜在作用靶点。

目的 探究脑出血患者脑组织中Nod样受体蛋白-3(NLRP3)、NIMA相关蛋白激酶7(NEK7)表达水平与疾病严重程度的相关性.方法 前瞻性选取2017年1月至2020年12月郑州颐和医院诊治的80例脑出血患者进行研究,取皮层造瘘通道靠近血肿0.5 cm处的脑组织为靠近组,另取远离血肿位置的脑组织为远离组.依据脑出血患者出血量将其分为少量组(出血量<15 mL)29例、中量组(出血量15～30 mL)27例和大量组(出血量>30 mL)24例;按美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分将患者分为轻型组(1～4分)30例、中型组(5～15分)27例和重型组(>15分)23例.采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法测定各组脑组织中NEK7 mRNA、NLRP3 mRNA表达水平;采用Pearson法分析脑出血患者血肿0.5 cm处脑组织中NEK7 mRNA表达水平与NLRP3 mRNA表达水平的相关性;比较不同出血量、不同严重程度的脑出血患者距离血肿0.5 cm处脑组织中NEK7 mRNA、NLRP3 mRNA表达水平.结果 靠近组患者脑组织中NEK7 mRNA、NLRP3 mRNA表达水平分别为1.72±0.58、1.69±0.57,明显高于远离组的1.03±0.34、1.01±0.33,差异均有统计学意义(P<0.05);脑出血患者血肿0.5 cm处脑组织中NEK7 mRNA表达水平与NLRP3 mRNA表达水平呈正相关(r=0.563,P<0.05);脑出血患者距离血肿 0.5 cm处脑组织中NEK7 mRNA、NLRP3 mRNA表达水平随着出血量的增加而升高,差异均有统计学意义(P<0.05);脑出血患者距离血肿0.5 cm处脑组织中NEK7 mRNA、NLRP3 mRNA表达水平随着NIHSS评分的增加而升高,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 脑出血患者距离血肿0.5 cm处脑组织中NEK7、NLRP3表达水平明显升高,两者均与出血量和疾病严重程度显著相关,检测距离血肿0.5 cm处脑组织NEK7、NLRP3有利于判断脑出血严重程度及出血情况.

目的:探索资生肾气丸对醋酸致小鼠扭体模型的镇痛作用.方法:将42只小鼠随机分为7组,分别给予相应药液灌胃,末次灌胃1h后造模,建立醋酸致小鼠扭体模型.观察小鼠扭体次数,计算其扭体抑制率,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组小鼠血清白细胞介素-1 β(IL-1 β)、前列腺素E2(PGE2)、神经生长因子(NGF)含量,采用实时PCR(RT-PCR)检测嘌呤配体P2X门控离子通道型受体7(P2X7R)mRNA、Nod样受体蛋白3(NLRP3)mRNA、NIMA相关激酶7(NEK7)mRNA的表达情况.结果:与模型组比较,随着时间的增加,资生肾气丸低剂量、中剂量、高剂量均可抑制小鼠扭体反应,降低扭体次数,增加小鼠扭体抑制率,降低小鼠血清中IL-1β、PGE2、NGF 的含量,降低P2X7RmRNA、NLRP3mRNA、NEK7mRNA的表达以抑制疼痛反应,以高剂量效果最优(P＜0.05),与吲哚美辛、痛风舒片疗效相近.结论:资生肾气丸高剂量对小鼠血清疼痛因子的降低效果显著,其机制可能与嘌吟配体P2X门控离子通道型受体7信号通路有关.

目前,Nod样受体蛋白3(nod-like receptor protein 3,NLRP3)炎性小体在免疫与人类疾病中的重要性已经得到公认,但NLRP3炎性小体的具体激活机制尚不清楚.NIMA相关蛋白激酶7(NIMA-relatedkinase 7,Nek7)参与NLRP3炎性小体激活,最终导致白介素IL-1β、IL-18的成熟及分泌.同时Nek7也被证实参与有丝分裂纺锤体形成和中心体的分离,且发现NLRP3炎性小体的激活和有丝分裂不能同时发生.因此,Nek7可能作为有丝分裂和NLRP3炎性小体激活两者之间的转换.本文就Nek7及NLRP3炎性小体的激活关系做一综述,以期为炎症性疾病提供新的治疗方向.

目的 探讨NLRP3炎性小体与急性胰腺炎病情的发展,以及与急性胰腺炎导致的胰腺原位和胰腺外损伤的关系.方法 对近年来国内外有关NLRP3炎性小体与急性胰腺炎病情发展,胰腺原位和胰腺外脏器损伤研究的相关文献进行综述.结果 急性胰腺炎发生时,NLRP3炎性小体激活参与了急性胰腺炎时各脏器的损伤,NLRP3炎性小体激活越多,对机体的损伤越严重,通过对NLRP3炎性小体激活机制的调节,可以减少NLRP3炎性小体的激活,并最终减轻各脏器的损伤.结论 NLRP3炎性小体的激活参与了急性胰腺炎的进程,但仍需进一步临床研究予以验证.

目的 探讨卵巢颗粒细胞中NIMA相关蛋白激酶7(NEK7)和Nod样受体蛋白3(NLRP3) mRNA表达量与多囊卵巢综合征(PCOS)患者炎症指标的相关性及其预测价值. 方法 选取2018年8月至2019年3月来山西省儿童医院/山西省妇幼保健院生殖中心就诊的30例PCOS患者为研究组和同期由于男方因素或输卵管因素就诊的34例非PCOS不孕症患者为对照组.取卵日收集行IVF/ICSI-ET患者的卵泡液和颗粒细胞,检测卵泡液中炎症因子白介素(IL)-1β、IL-18的表达以及颗粒细胞中NEK7、NLRP3 mRNA的表达,并将NEK7、NLRP3的mRNA表达量与各指标进行相关性分析.最后应用受试者工作特征曲线(ROC)分析NEK7、NLRP3 mRNA对PCOS的预测价值. 结果 研究组体重指数(BMI)和获卵数显著高于对照组,且LH、LH/FSH、睾酮(T)水平亦显著高于对照组(P均＜0.05).研究组卵泡液中炎症因子IL-1β、IL-18的表达显著高于对照组,卵巢颗粒细胞中NEK7、NLRP3 mRNA的表达亦显著高于对照组(P均＜0.05).相关性分析结果显示,研究组患者卵巢颗粒细胞中NEK7和NLRP3 mRNA水平与血清基础LH、LH/FSH、炎症因子IL-1β、IL-18均呈显著正相关(P均＜0.05).ROC分析结果显示,NEK7是PCOS的有效预测因子,预测炎症的曲线下面积为0.741,临界值为1.154.结论 NEK7、NLRP3可能通过促进IL-1β、IL-18的释放影响PCOS炎症的发生及发展,且NEK7是PCOS的有效预测因子,可能为PCOS的临床治疗提供新思路.

本研究通过观察高脂饮食及有氧运动干预后小鼠海马细胞焦亡及炎症相关蛋白的表达情况,探讨运动改善胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)的可能机制.选取6周龄C57BL/6J雄性小鼠38只,随机以正常饮食(n--12)或高脂饮食(n=26)喂养12周后进行葡萄糖和胰岛素耐量实验,根据结果将小鼠分为对照组(n=12)、IR组(n=l0)和IR有氧运动组(n=10).IR有氧运动组进行12周的渐增跑台训练.干预结束后麻醉处死小鼠并剥离海马组织,提取蛋白进行Western blot实验,检测细胞焦亡及炎症相关蛋白的表达情况.结果 显示:(1)与对照组相比,IR小鼠海马NFκB,炎症小体相关蛋白Nod样受体蛋白3(Nod-like receptor protein 3,NLRP3)、斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing CARD,ASC),细胞焦亡相关蛋白pro-Caspase-1、gasdermin D (GSDMD)、GSDMD-N及炎症因子IL-1β、IL-18均显著升高,而炎症小体相关蛋白NIMA相关蛋白激酶7 (NIMA-related kinase 7,NEK7)及焦亡相关蛋白Caspase-1有升高趋势,但无显著差异.(2)与IR组相比,渐增跑台训练能够显著降低IR小鼠海马NFκB、NLRP3、NEK7、ASC、pro-Caspase-1、GSDMD、GSDMD-N、IL-1β、IL-18的表达.以上结果提示,12周渐增跑台训练能够显著降低IR小鼠海马焦亡相关蛋白及炎症因子表达,抑制细胞焦亡.

检测乳腺癌组织中NIMA相关蛋白激酶2(Nek2)和Nek9基因表达的变化,探讨其临床意义.收集2017年7月至2019年5月我院外科手术治疗的乳腺癌女性患者112例,取癌旁>2 cm的乳腺组织作为对照.荧光定量PCR检测Nek2和Nek9基因表达.乳腺癌组织Nek2和Nek9基因的2-△△Ct值分别为0.32±0.08和0.38±0.09,显著高于癌旁组织的0.18±0.04和0.22±0.05(P<0.01).乳腺癌组织Nek2和Nek9基因表达与年龄和肿瘤大小无关(P>0.05);而与分化程度、淋巴结转移、TNM分期有关(P<0.01).乳腺癌肿瘤组织中Nek2和Nek9高表达,Nek2和Nek9可能参与了乳腺癌的发生、发展和转移过程.