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促凋亡分子Noxa介导依托泊苷引起的神经母细胞瘤细胞死亡的实验研究
编辑人员丨3天前
目的:研究化疗药物依托泊苷是否通过促凋亡分子Noxa引起儿童神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)细胞的死亡。方法:培养人NB TB3和TB8细胞,分别给予不同浓度的依托泊苷(0,0.125,0.25,0.5,0.75,1.0 mg/L)处理,并利用CCK8检测细胞存活的变化情况;收集处理不同时间的TB3和TB8细胞,提取RNA及蛋白,定量PCR方法检测Noxa的mRNA水平表达,Western Blot方法检测Noxa的蛋白水平表达,然后利用Noxa的siRNA转染细胞,观察依托泊苷对细胞存活率的影响情况。结果:经过浓度分别为0.125 mg/L、0.25 mg/L、0.5 mg/L、0.75 mg/L、1.0 mg/L的依托泊苷处理后,TB3细胞存活率分别为(73.13±8.45)%、(56.18±10.50)%、(33.90±4.17)%、(26.76±6.67)%、(13.49±0.58)%,差异有显著统计学意义( P均<0.01);TB8细胞存活率分别为(71.06±6.96)%、(37.45±0.68)%、(25.53±3.70)%、(20.28±2.75)%、(10.09±2.52)%,差异有显著统计学意义( P均<0.01)。依托泊苷处理的TB3和TB8细胞Noxa mRNA和蛋白质表达量明显升高,并且表达趋势有时间依赖性;Noxa的siRNA转染细胞后,能够降低Noxa在TB3和TB8细胞中的表达。依托泊苷浓度为0.5mg/L时,转染对照siRNA、Noxa siRNA1、Noxa siRNA2的TB3细胞存活率分别为(45.12±13.58)%、(72.70±21.34)%、(52.08±20.36)% ;TB8细胞存活率分别为(35.52±0.38)%、(63.94±0.10)%、(50.27±1.62)%,差异有显著统计学意义( P均<0.01)。依托泊苷浓度为1.0 mg/L时,转染对照siRNA、Noxa siRNA1、Noxa siRNA2的TB3细胞存活率分别为(13.26±1.84)%、(51.08±2.41)%、(42.80±1.42)%,差异有统计学意义( P均<0.05),TB8细胞存活率分别为(22.22±3.39)%、(58.00±11.37)%、(40.55±6.94)%,差异有统计学意义( P<0.05)。 结论:Noxa介导化疗药物依托泊苷能引起NB TB3和TB8细胞死亡。
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编辑人员丨3天前
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溴结构域蛋白4通过Noxa诱导骨肉瘤细胞凋亡的机制
编辑人员丨3天前
目的:探讨溴结构域蛋白4(BRD4)通过Noxa诱导骨肉瘤细胞凋亡的机制。方法:采用小分子干扰RNA(siRNA)沉默骨肉瘤细胞中BRD4的表达,通过蛋白质印迹法(Western blot)和实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测Noxa及凋亡相关分子表达;应用BRD4降解剂ARV-825处理骨肉瘤细胞,通过Western blot和RT-qPCR方法检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)家族蛋白成员Noxa及凋亡相关分子表达。siRNA沉默Noxa在骨肉瘤细胞中的表达后使用BRD4降解剂ARV-825处理骨肉瘤细胞,通过Western blot和RT-qPCR方法检测Noxa的表达,通过细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测骨肉瘤细胞的增殖,采用单因素方差分析比较各组间的差异。结果:siRNA沉默BRD4在MNNG/HOS和Saos-2骨肉瘤细胞中的表达后,Western blot实验显示,沉默组BRD4蛋白表达含量低于对照组(MNNG/HOS:0.332±0.076、0.175±0.059比1.000±0.128, F=67.550, P<0.01;Saos-2:0.264±0.038、0.023±0.005比1.000±0.043, F=703.600, P<0.01);沉默组超大B细胞淋巴瘤/白血病(bcl-XL,bcl-2家族蛋白成员)蛋白表达含量低于对照组(MNNG/HOS:0.580±0.100、0.432±0.044比1.000±0.200, F=15.120, P<0.05;Saos-2:0.397±0.102、0.420±0.083比1.000±0.215, F=16.550, P<0.05),沉默组Noxa蛋白表达含量高于对照组(MNNG/HOS:5.508±1.173、4.969±1.335比1.000±0.274, F=16.870, P<0.05;7.085±1.371、13.750±1.567比1.000±0.264, F=83.110, P<0.001),差异均有统计学意义;应用BRD4降解剂ARV-825处理骨肉瘤细胞,处理组Noxa蛋白及mRNA表达高于对照组(Western blot,MNNG/HOS:4.361±0.432、19.570±4.179、22.830±4.035、23.450±4.449比1.000±0.270, F=28.710, P<0.01;Saos-2:5.154±1.577、35.780±4.295、58.530±3.601、62.120±5.153比1.000±0.318, F=192.500, P<0.01;RT-qPCR:MNNG/HOS:2.957±0.803、7.656±1.539、7.258±1.523比1.000±0.026, F=24.01, P<0.01;Saos-2:4.081±0.463、9.594±2.667、7.412±2.300比1.000±0.025, F=13.520, P<0.01);处理组bcl-XL蛋白及mRNA表达水平低于对照组(Western blot,MNNG/HOS:0.864±0.191、0.677±0.155、0.512±0.166、0.365±0.077比1.000±0.189, F=7.646, P<0.05;Saos-2:0.958±0.270、0.799±0.223、0.686±0.234、0.422±0.121比1.000±0.299, F=2.883, P<0.05;RT-qPCR:MNNG/HOS:0.400±0.175、0.341±0.164、0.332±0.041比1.000±0.075, F=15.080, P<0.01;Saos-2:0.530±0.062、0.584±0.051、0.567±0.091比1.000±0.020, F=38.780, P<0.01)。使用siRNA沉默Noxa在Saoa-2骨肉瘤细胞中的表达,再使用BRD4降解剂ARV-825处理骨肉瘤细胞,Noxa蛋白表达水平低于对照组(0.088±0.025、0.183±0.015比1.000±0.112, F=169.900, P<0.01),ARV-825处理组对骨肉瘤细胞增殖的抑制作用低于对照组,ARV-825浓度为0.03 mol/L时效果明显(1.000±0.097、0.971±0.489比0.090±0.017, F=199.200, P<0.01),差异有统计学意义。 结论:BRD4通过抑制Noxa对骨肉瘤细胞发挥抗肿瘤作用。
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编辑人员丨3天前
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简易BH3分析法在血液肿瘤药敏筛选的初步探索
编辑人员丨2024/7/20
目的 建立一种血液肿瘤BCL-2抗凋亡蛋白抑制剂药敏筛选的简易BH3分析法.方法 建立基于显微镜和JC-1染色的BH3分析方法,通过BH3-only模拟肽描绘K562、NB4细胞系BCL-2家族抗凋亡蛋白依赖谱,应用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)加以验证;回溯临床治疗疗效,检验该方法对临床样本BH3药敏分析结果的符合情况.结果 BH3分析结果显示NB4对抗凋亡蛋白的依赖程度依次为BCL2>MC1-1>BCL-XL;K562的依赖程度依次为BCL-XL>MC1-1>BCL2.PCR分析BCL-2家族基因表达量显示,K562抗凋亡蛋白MCL-1、BCL2、BCL-XL相对表达程度较高,BH3-only促凋亡蛋白中BIM、PUMA、NOXA高表达而HRK低表达,细胞抗凋亡能力更依赖于BCL-XL;NB4抗凋亡蛋白BCL-XL表达明显低于MCL-1与BCL-2,BH3-only促凋亡蛋白NOXA低表达,细胞抗凋亡更依赖于MCL-1与BCL-2而非BCL-XL,与BH3分析结果相符.对连续6例血液肿瘤患者骨髓进行BH3分析,结果显示 6例患者均对HRK(BCL-XL抑制物)、VEN(BCL-2抑制物)不敏感;4例患者(例 1~3,例 5)对NOXA(MCL-1抑制物)表现为敏感,2例(例 4、例 6)的敏感度较低(<50%).药敏预测结果显示 6例患者均对BCL-2抑制剂耐药,例 1~3、例 5患者对MCL1抑制剂敏感,例 4和例 6对MCL1抑制剂可能耐药.回溯临床用药效果(4~6个疗程)显示例 1~5患者对BCL-2抑制剂相关方案治疗无效,考虑与BCL-2抑制剂不敏感有关,例 5更换西达苯胺治疗有效,例 4和例 6患者西达苯胺相关方案疗效不佳,考虑与MCL-1抑制物不敏感有关,上述临床结局与BH3预测结果一致.结论 基于荧光显微镜和JC-1染色的BH3分析是简便可行的,可用于检测血液肿瘤细胞对不同抗凋亡蛋白的依赖性,从而为BCL-2家族相关抑制剂的选择提供证据.
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编辑人员丨2024/7/20
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薯蓣皂苷对口腔鳞癌细胞增殖和凋亡的影响
编辑人员丨2024/4/27
目的:探讨薯蓣皂苷对人口腔鳞癌细胞SCC-4和SCC-25增殖和凋亡的影响.方法:不同浓度(0、0.1、0.3、1、3、10、30 μmol/L)薯蓣皂苷处理SCC-4和SCC-25细胞24、48、72 h后,CCK-8法检测薯蓣皂苷对SCC-4和SCC-25细胞存活的影响,根据IC50值筛选出后续实验浓度(0、1、2、4 μmol/L);EdU检测薯蓣皂苷对SCC-4和SCC-25细胞增殖的影响;流式细胞术检测薯蓣皂苷对SCC-4和SCC-25细胞凋亡的影响;Western Blot检测薯蓣皂苷处理48 h后,细胞中Noxa、Cleaved-Caspase 3蛋白的表达水平;qRT-PCR检测细胞中Noxa mRNA表达情况.结果:在一定浓度范围内,薯蓣皂苷可抑制口腔鳞癌细胞SCC-4和SCC-25的增殖,呈时间依赖性和剂量依赖性(P<0.05).同时,实验组(1、2、4 μmol/L)薯蓣皂苷干预48 h后可促进SCC-4和SCC-25细胞的凋亡(P<0.05),并上调细胞中Noxa、Cleaved-Caspase 3的表达水平,且SCC-4和SCC-25细胞中Noxa mRNA表达随浓度呈上升趋势(P<0.05).结论:一定浓度薯蓣皂苷可有效抑制口腔鳞癌细胞增殖,诱导口腔鳞癌细胞凋亡,其作用机制可能与薯蓣皂苷上调促凋亡蛋白Noxa的表达有关.
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编辑人员丨2024/4/27
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Ywhab通过靶向Hsp90aa1抑制小鼠B细胞淋巴瘤38B9细胞生长
编辑人员丨2024/4/27
目的:研究Ywhab在小鼠B细胞淋巴瘤发生发展中的作用,并探讨其可能的分子机制.方法:使用生物信息学分析Ywhab与弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)的相关性.在小鼠B细胞淋巴瘤38B9细胞中感染逆转录病毒构建Ywhab基因过表达细胞系,并采用RT-qPCR和Western blot验证Ywhab的mRNA及蛋白(14-3-3β)水平;通过细胞计数法、CCK-8法和小鼠皮下成瘤实验检测Ywhab过表达对38B9细胞在体内外生长的影响;RT-qPCR和Western blot检测细胞凋亡相关蛋白的表达;应用蛋白质免疫共沉淀联合蛋白质谱(CoIP-MS)筛选与14-3-3β特异性结合的蛋白并采用Western blot及分子对接分析进行验证.结果:Ywhab基因在DLBCL中低表达,其低表达预示DLBCL患者的临床预后较差.与正常小鼠骨髓B细胞相比,Ywhab在38B9细胞中低表达.Ywhab过表达能在体内外诱导38B9细胞凋亡,促进凋亡蛋白Puma、Noxa和Bax的mRNA及蛋白表达,抑制抗凋亡蛋白Bcl2的mRNA及蛋白表达(P<0.05).14-3-3β蛋白能特异性结合Hsp90aa1蛋白并抑制其表达,从而促进38B9细胞凋亡.结论:Ywhab能够显著诱导小鼠B细胞淋巴瘤38B9细胞凋亡,其机制可能是通过靶向抑制Hsp90aa1蛋白表达来实现的.
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编辑人员丨2024/4/27
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胃癌组织中circMAPK14的表达及意义研究
编辑人员丨2024/1/20
目的 研究丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)14环状RNA(circMAPK14)在胃癌组织中的表达及意义.方法 收集该院29例胃癌患者的组织样本,利用逆转录实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测胃癌及其癌旁组织、人胃癌细胞系SGC7901、正常胃黏膜上皮细胞GES-1中circMAPK14的表达水平.采用小干扰RNA(siRNA)降低circMAPK14的表达水平后,观察其对细胞增殖、凋亡、迁移情况的影响,以及对MAPK14和凋亡相关基因表达的影响.结果 胃癌患者癌灶组织中的circMAPK14 mRNA的表达水平明显低于癌旁组织(P<0.01),SGC7901 较 GES-1 的 circMAPK14 mRNA 表达水平明显降低(P<0.01);采用 siRNA 降低 circ-MAPK14的表达促进了 SGC7901细胞增殖、迁移,抑制了细胞凋亡;circMAPK14表达水平的降低增强了MAPK14磷酸化水平,降低了 Bax、Puma、Noxa等mRNA的表达水平(P<0.01).结论 circMAPK14可能通过影响MAPK14的活性来调控MAPK信号通路,进而调控凋亡相关基因的表达,最终影响胃癌进程.
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编辑人员丨2024/1/20
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术前多西他赛联合S-1化疗对进展期胃癌病灶内癌基因表达的影响
编辑人员丨2023/8/6
目的:研究术前多西他赛联合替吉奥(S-1)化疗对进展期胃癌病灶内癌基因表达的影响.方法:选择2O14年4月~2O17年1月在宜都市第一人民医院诊断为进展期胃癌的患者作为研究对象并随机分为两组,DS组接受术前多西他赛联合S-1新辅助化疗,对照组接受常规术前干预.取手术切除的胃癌标本并测定抑癌基因、原癌基因、侵袭基因的 mRNA 表达量.结果:DS组患者胃癌病灶内ING5、p16、Noxa、Bax的 mRNA 表达量显著高于对照组,PTP1B、CDC25B、UHRF1、HOXB7、c-myc、GOL-PH3、Vav2、ELM O、ZEB1、Rho-A的mRNA表达量显著低于对照组.结论:术前多西他赛联合S-1化疗用于进展期胃癌的治疗能够增加抑癌基因表达并抑制原癌基因、侵袭基因的表达.
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编辑人员丨2023/8/6
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胃癌患者血清中胃蛋白酶原Ⅰ/Ⅱ比值和胃泌素-17含量与癌细胞恶性增殖的相关性
编辑人员丨2023/8/6
目的:探讨胃癌患者血清中胃蛋白酶原Ⅰ/Ⅱ比值和胃泌素-17含量与癌细胞恶性增殖的相关性.方法:选择2016.8~2017.8月期间收集胃镜活检病理确诊的浅表性胃炎组247例、胃溃疡组159例、胃癌组94例,对比三者血清胃蛋白酶原Ⅰ /Ⅱ比值和胃泌素-17含量,病灶组织中增殖及凋亡基因表达量的差异.采用Pearson检验评估胃癌患者胃蛋白酶原Ⅰ/Ⅱ比值和胃泌素-17含量与癌细胞恶性增殖活性的相关关系.结果:胃癌组血清胃蛋白酶原Ⅰ/Ⅱ比值、胃泌素-17含量低于胃溃疡组、浅表性胃炎组.胃癌组增殖基因 EIF5A2、MACF1、PIK3CD mRNA 表达量高于胃溃疡组、浅表性胃炎组, SIRT1 mRNA表达量低于胃溃疡组、浅表性胃炎组;凋亡基因Livin mRNA 的表达量高于胃溃疡组、浅表性胃炎组,Bad、Noxa mRNA的表达量低于胃溃疡组、浅表性胃炎组;胃癌组血清中胃蛋白酶原Ⅰ /Ⅱ比值、胃泌素-17含量与 EIF5A2、M ACF1、PIK3CD、Livin mRNA 表达量呈负相关,与 SIRT1、Bad、Noxa mRNA表达量呈正相关.结论:胃癌患者血清中胃蛋白酶原Ⅰ /Ⅱ比值和胃泌素-17含量异常降低,且具体水平与胃癌细胞增殖、凋亡活性直接相关.
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编辑人员丨2023/8/6
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七氟烷预处理减轻小鼠脑组织缺血再灌注损伤的实验研究
编辑人员丨2023/8/6
目的:研究七氟烷(Sev)预处理对小鼠脑组织缺血再灌注损伤的影响.方法:选择C56 BL/6J小鼠作为实验动物,分为对照组、I/R组和Sev组.I/R组和Sev组采用线栓法建立脑组织缺血再灌注损伤模型,Sev组在造模前连续4 d给予七氟烷预处理.取缺血再灌注的脑组织,测定凋亡血管基因的mRNA表达量以及氧化应激指标的含量.结果:I/R组小鼠脑组织中Bcl-2、HAX-1、Mcl-1、Survivin的mRNA表达量以及Prdx6、SOD的含量显著低于对照组(P<0.05),NF-kB、p53、Noxa、PTEN、Fas的mRNA表达量以及Nox4、ROS、MDA 的含量显著高于对照组(P<0.05);Sev组小鼠脑组织中Bcl-2、HAX-1、Mcl-1、Survivin的mRNA表达量以及 Prdx6、SOD 的含量显著高于I/R组(P<0.05),NF-kB、p53、Noxa、PTEN、Fas的 mRNA 表达量以及Nox4、ROS、MDA 的含量显著低于 I/R组(P<0. 05).结论:七氟烷预处理能够通过抑制细胞凋亡及氧化应激反应的途径来减轻小鼠脑组织的缺血再灌注损伤.
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编辑人员丨2023/8/6
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SR1078激活RORα诱导卵巢癌细胞凋亡的机制研究
编辑人员丨2023/8/6
本文主要探讨RORα激动剂SR1078对卵巢癌细胞的作用及其分子机制.采用MTS法检测N-[4-[2,2,2-三氟-1-羟基-1-(三氟甲基)乙基]苯基]-4-(三氟甲基)苯甲酰胺(SR1078)对卵巢癌细胞HeyA8和Hey细胞活性的影响.通过流式细胞术检测SR1078对卵巢癌细胞HeyA8和Hey细胞周期和凋亡的影响.利用p53 siRNA或p53抑制剂PFT-α和PFT-β处理HeyA8和Hey细胞,流式细胞术检测干扰p53后对SR1078诱导卵巢癌细胞凋亡的影响.Western blot检测SR1078和p53 siRNA对p53蛋白表达的影响,以及p53抑制剂单独或联合SR1078对p53、p-p53及其调控的下游促凋亡蛋白Noxa表达的影响.实验结果显示,SR1078明显降低了HeyA8和Hey的细胞活性,且显著诱导HeyA8和Hey细胞凋亡;此外,SR1078能够上调p53和Noxa表达,而干扰p53能够显著抑制SR1078诱导卵巢癌细胞凋亡和Noxa的表达;综上所述,RORα激活剂SR1078通过活化p53信号通路诱导卵巢癌细胞凋亡.
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编辑人员丨2023/8/6
