目的 研究多巴胺能神经元SIRT3表达对小胶质细胞活化所致其炎症损伤的抵抗作用及相关机制.方法 建立多巴胺能神经元MN9D细胞与小胶质细胞BV-2共培养体外炎症损伤模型.将MN9D细胞分为对照组、模型组、SIRT3组、SIRT3+PJ34(PARP-1抑制剂)组.实时定量聚合酶链式反应分析mRNA水平,流式细胞术检测细胞凋亡率,JC-1法检测线粒体膜电位变化,酯化钙黄绿素与氯化钴共孵育法分析线粒体通透性转运孔(mPTP)开放情况,Western blot检测蛋白表达情况.结果 与模型组比较,SIRT3过表达则使SIRT3组MN9D细胞的凋亡率明显降低,SIRT3和SOD2基因表达明显增多,PARP-1、TNF-α及IL-1 β蛋白表达明显减少,p-NF-κB p65/NF-κB p65比值明显变小,线粒体膜电位上升,mPTP开放和ROS生成减少,组间比较差异均具有统计学意义(P＜0.05);SIRT3+PJ34 组 MN9D 细胞 PARP-1 活性抑制后,除SIRT3和IL-1β蛋白表达变化不明显外,其它考察指标的变化趋势在SIRT3组基础上进一步增大,两组间比较差异均具有统计学意义(P＜0.05).结论 SIRT3表达能够缓解小胶质细胞激活所致多巴胺能神经元的炎症损伤,机制可能与其改善线粒体功能,减少ROS生成抑制PARP-1活性及NF-κB信号通路有关.

目的 基于PARP-1/AIF信号通路分析针刺对急性缺血性卒中大鼠脑血流及行为学恢复的影响.方法 将40只健康成年雄性SPF级大鼠分为Sham组、模型组、针刺组及针刺+PJ34组,每组10只,除Sham组外均建立动物模型,针刺组及针刺+PJ34组大鼠均进行针刺治疗,针刺+PJ34组以10 μmoL/g腹腔注射多聚腺苷二磷酸核糖转移酶-1(PARP-1)抑制剂PJ34,Sham组及模型组不进行针刺干预,均注射相同体积的0.9％生理盐水.11分制单盲评分评价建模后、干预第1、2、3天行为学评分;多普勒仪探头记录软脑膜微循环血流量;HE染色观察脑组织病理形态;TUNEL法检测各组神经细胞凋亡率;免疫组化检测Bax、Bcl-2阳性表达;免疫印迹检测PARP-1、凋亡诱导因子(AIF)蛋白含量.结果 建模后,模型组、针刺组及针刺+PJ34组的行为学评分均升高,与Sham组比较差异有统计学意义(P＜0.05),干预第1、2、3天时与模型组相比,针刺组行为学评分均降低(P＜0.05),针刺+PJ34组上述时间行为学评分均降低,与针刺组比较差异有统计学意义(P＜0.05);Sham组、模型组、针刺组及针刺+PJ34组的软脑膜微循环血流量分别为(756.35±102.33)、(233.06±45.17)、(416.40±63.55)、(560.80±72.04)AU,组间比较差异均有统计学意义(F=90.390,P＜0.001);HE染色示Sham组大鼠脑组织及神经细胞排列整齐,模型组脑组织紊乱且神经细胞数目减少,针刺组及针刺+OJ34组神经细胞存活较多,排列整齐;Sham组、模型组、针刺组及针刺+PJ34组的神经细胞凋亡率分别为(3.30％±0.21％)、(30.04％±4.52％)、(16.30％±2.25％)、(11.69％±1.33％),组间比较差异均有统计学意义(F=90.390,P＜0.001);与Sham组比较,模型组大鼠Bax阳性细胞数降低,Bcl-2阳性细胞数、PARP-1、AIF蛋白升高(均P＜0.05),与模型组相比,针刺组及针刺+PJ34组的Bax阳性细胞数及Bcl-2阳性细胞数、PARP-1、AIF蛋白升高(均P＜0.05),针刺组及针刺+PJ34组上述指标比较差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 急性缺血性卒中大鼠采用针刺干预后能够改善行为学,增加脑血流灌溉的同时可通过调节细胞凋亡因子而减少神经细胞凋亡,研究机制可能与抑制PARP-1、AIF活性相关.

目的 探讨PARP-1介导的自噬流受阻在大鼠心肌缺血再灌注损伤(MIRI)中的作用.方法 采用大鼠心肌细胞H9c2制备缺血再灌注细胞模型.实验分为对照组、缺氧/复氧处理模型组、PARP-1抑制剂组、PARP-1抑制剂+模型组(PJ34+H/R组).取各组处理后的6孔板H9c2细胞提取总蛋白后Western blot分别检测PARP-1活性蛋白pADPr,凋亡相关蛋白Bax,细胞DNA损伤标记蛋白p-γH2ax的表达,细胞自噬流相关蛋白:LC3BII/LC3I、Beclin-1、P62的表达量.通过GraphPad Prism 6统计软件对数据进行分析,比较各组间差异.结果 与对照组比较,MIRI模型组PARP-l活性标记物pADPr表达更高表示PARP-1激活增多,细胞凋亡损伤增加,DNA损伤(p-γH2ax)也增多(P＜0.05).LC3B II、beclin-1表达增高,同时p62表达也增高(P＜0.05),表示自噬流受阻.与模型组比较,加入PARP-1抑制剂后(H/R+PJ34组)可明显抑制心肌细胞内PARP-l活性(pADPr),细胞凋亡减少,细胞DNA损伤也减轻(P＜0.05);自噬相关蛋白LC3B II、beclin-1表达无明显变化,而p62表达降低(P＜0.05),表明自噬流受阻情况得到缓解(P＜0.05).结论 PARP-1激活介导的自噬流受阻在大鼠MIRI中发挥着作用,通过抑制PARP-l活性后可明显逆转自噬流受阻隋况,减轻MIRI.

目的 探讨PARP-1在鱼藤酮(rotenone)诱导大鼠PC12细胞线粒体DNA(mtDNA)损伤中的作用.方法 不同浓度(0、0.1、0.5、1.0、1.5μmol/L)鱼藤酮处理PC12细胞,TaqMan探针法PCR检测mtDNA缺失,qPCR法检测mtDNA拷贝数,Western blot检测PARP-1蛋白在PC12细胞内和线粒体内的表达水平.PARP-1选择性抑制剂PJ34预处理鱼藤酮染毒的PC12细胞,采用CCK-8法检测细胞增殖活力,TaqMan探针法PCR检测mtDNA缺失,qPCR法检测mtDNA拷贝数,四甲基罗丹明乙酯(TMRM)染色检测线粒体膜电位,DCFH-DA探针检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平.结果 TaqMan探针法PCR和qPCR法检测结果显示,与对照组(0μmol/L鱼藤酮)比较,鱼藤酮处理可引起PC12细胞线粒体DNA缺失增加和线粒体DNA拷贝数降低(P＜0.05).同时,细胞和线粒体内的PARP-1蛋白表达被激活,Western bolt检测结果显示,PARP-1蛋白表达水平随鱼藤酮浓度增加而增加.与鱼藤酮单独处理组比较,PJ34预处理可提高鱼藤酮染毒引起的PC12细胞的活力下降(P＜0.05),并降低线粒体DNA缺失和提高线粒体DNA拷贝数水平(P＜0.05).TMRM染色结果显示,PJ34预处理后线粒体膜电位水平提高(P＜0.05);DCFH-DA探针检测结果显示,PJ34预处理后细胞内ROS水平下降(P＜0.05).结论 鱼藤酮可诱导PC12细胞线粒体DNA的损伤,激活PC12细胞和线粒体内PARP-1蛋白的表达,PARP-1选择性抑制剂PJ34对鱼藤酮诱导的多巴胺神经元PC12细胞线粒体DNA的损伤具有保护作用.

目的 研究多聚ADP核糖聚合酶-1(poly-ADP ribose polymerase-1,PARP-1)抑制剂PJ34能否改善脑缺血再灌注大鼠应用重组人组织型纤溶酶原激活物(recombinant tissue plasminogen activator,rt-PA)后的血脑屏障完整性.方法 将60只大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注(ischemia-reperfusion,IR)组、rt-PA组及PJ34组.IR组:采用改良Zea Longa线栓法,制备局灶性脑缺血2h再灌注模型.PJ34组及rt-PA组:缺血2h拔出鱼线,同时给予尾静脉注射rt-PA 10 mg/kg,腹腔注射PJ34或生理盐水3rmg/kg.进行神经功能缺损评分、伊文氏蓝测定血脑屏障通透性、免疫组化分析MMP-9、Claudin-5、ZO-1的表达.结果 rt-PA组的神经功能缺损评分、伊文氏蓝含量及MMP-9表达均高于IR组,PJ34组低于rt-PA组,但高于IR组(P＜0.05);rt-PA组的Claudin-5、ZO-1表达低于IR组,PJ34组高于rt-PA组,但低于IR组(P＜0.05).结论 P J34通过抑制MMP-9的表达,增加Claudin-5、ZO-1的表达,可以有效改善脑缺血再灌注后应用rt-PA的大鼠血脑屏障完整性.

目的 评价聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(PARP-1)在大鼠肺缺血再灌注损伤中的作用及其与自噬的关系.方法 清洁级健康雄性成年SD大鼠24只,体重200～240 g,8～12周龄,采用随机数字表法分为3组(n=8):假手术组(S组)、缺血再灌注组(I/R组)和缺血再灌注+PARP-1抑制剂组(I/R+PJ34组).S组仅开胸不阻断左肺门;I/R组和I/R+PJ34组采用阻断左侧肺门45 min,再灌注120 min的方法制备大鼠肺缺血再灌注损伤模型;I/R+PJ34组于缺血前30 min腹腔注射PJ3410 mg/kg,S组和I/R组给予等容量生理盐水.于再灌注120 min时取左肺组织,称重并计算湿重/干重(W/D)比值;采用HE染色法观察肺组织病理学结果;采用TUNEL法观察细胞凋亡情况,计算细胞凋亡指数;采用Western blot法检测缺血区肺组织PARP-1活化产物PAR、Bcl-2、Bax、微管相关蛋白1轻链3(LC3)和Beclin-1的表达,计算Bcl-2/Bax比值和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值.结果 与S组比较,I/R组和I/R+PJ34组肺组织W/D比值、病理学损伤评分、细胞凋亡指数和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值升高,PAR和Beclin-1表达上调,Bcl-2/Bax比值降低(P＜0.05);与I/R组比较,I/R+PJ34组肺组织W/D比值、肺组织病理学损伤评分、细胞凋亡指数和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值降低,PAR和Beclin-1表达下调,Bcl-2/Bax比值升高(P＜0.05).结论 PARP-1的激活参与了大鼠肺缺血再灌注损伤的过程,其机制可与增加自噬诱发细胞凋亡有关.

目的:观察聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1[poly(ADP-ribose)polymerase-1,PARP-1]抑制剂PJ34对前列腺癌PC-3细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭等生物学行为的影响.方法:使用不同浓度PJ34处理PC-3细胞后,CCK-8法检测细胞增殖,Western blot检测PARP-1蛋白表达,annexin V-FITC/IP双染法检测细胞凋亡,Transwell法检测细胞迁移、侵袭等相关生物学行为的变化.结果:PJ34组分别作用72 h、48 h、24 h 后,PARP-1 蛋白水平均明显低于control组(t=4.647,P=0.009 7;t=4.816,P=0.008 5;t=17.28,P＜0.000 1).PJ34组凋亡率为(17.64±4.49)％,与control组凋亡率的(3.83±0.74)％相比,差异有统计学意义(t=5.261,P=0.006).Control组和PJ34组细胞迁移差异有统计学意义(t=23.67,P＜0.000 1),细胞侵袭差异有统计学意义(t=29.31,P＜0.000 1).结论:PJ34通过抑制PARP-1的表达抑制前列腺癌细胞PC-3的增殖、迁移和侵袭能力.