为了克隆努比亚山羊(Capra nubiana)同源异形盒转录因子1(prospero-related homeobox protein 1,PROX1)基因和检测过表达PROX1基因对努比亚山羊骨骼肌成肌细胞分化和肌纤维类型转化相关基因mRNA表达的影响,为研究PROX1基因在骨骼肌发育中的调控作用提供参考,本研究以努比亚山羊背最长肌组织cDNA为模板克隆PROX1基因,构建pEGFP-N1-PROX1真核表达载体,转染至努比亚山羊骨骼肌成肌细胞,24 h后更换分化培养基,收集分化6 d的细胞,通过RT-qPCR检测过表达PROX1基因后细胞分化标志基因、NOTCH信号通路相关基因以及骨骼肌肌纤维类型相关基因的表达情况.研究结果表明努比亚山羊PROX1基因编码区(coding sequence,CDS)序列长度为2 214 bp,编码含737个氨基酸的多肽.RT-qPCR结果表明PROX1基因可以通过抑制NOTCH信号通路,上调细胞分化标志基因表达水平进而促进成肌细胞的分化(P＜0.05),并介导CaN/NFAT信号通路,显著下调MYH2和MYH4基因的mRNA表达水平(P＜0.05).本研究初步确定努比亚山羊PROX1基因参与调控骨骼肌成肌细胞的分化和肌纤维类型的转化,研究结果为进一步丰富肌肉生长发育的分子机制提供理论数据.

目的:评估术前对胃癌淋巴结转移预测价值较高的分子标志物的临床预后意义。方法:选择2013年1月至2015年12月北京大学第三医院术前胃镜活组织检查证实为胃癌并接受胃癌根治术的患者85例，有淋巴结转移34例，无淋巴结转移51例。采用免疫组织化学法检测巨噬细胞加帽蛋白G(CapG)、酪氨酸激酶受体B(TrkB)、同源盒基因转录因子1(Prox-1)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、血管内皮生长因子C(VEGF-C)和血管内皮生长因子受体3(VEGFR3)在胃癌术前病理组织中的表达。采用卡方检验分析不同标志物的表达与各临床病理特征之间的关系，应用ROC曲线比较不同标志物对胃癌淋巴结转移的预测价值，绘制Kaplan-Meier生存曲线评估不同标志物对胃癌患者预后的影响。结果:有淋巴结转移组CapG、TrkB、Prox-1、MMP-2、VEGF-C和VEGFR3的阳性表达率均高于无淋巴结转移组[分别为85.3%(29/34)比35.3%(18/51)、76.5%(26/34)比29.4%(15/51)、67.6%(23/34)比11.8%(6/51)、64.7%(22/34)比33.3%(17/51)、61.8%(21/34)比29.4%(15/51)、52.9%(18/34)比23.5%(12/51)]，差异均有统计学意义( χ2＝20.631、18.093、28.342、8.086、8.746、7.727， P均<0.01)。CapG、Prox-1、TrkB、MMP-2、VEGF-C、VEGFR3预测胃癌术前淋巴结转移的AUC值(95% CI)分别为0.787(0.687～0.880)、0.772(0.656～0.860)、0.761(0.661～0.883)、0.724(0.618～0.830)、0.687(0.571～0.803)、0.583(0.452～0.715)，其中CapG、Prox-1和TrkB的AUC值相对较高。CapG、Prox-1表达均与胃癌的浸润深度和TNM分期相关( χ2＝4.792、13.664、4.204、19.948， P均<0.05)，TrkB表达与胃癌的TNM分期有关( χ2＝12.036， P<0.05)。Kaplan-Meier生存曲线显示，CapG、TrkB、Prox-1阳性表达组患者的总生存率低于阴性表达组[分别为70.2%(33/47)比94.7%(36/38)、70.7%(29/41)比90.9%(40/44)、69.0%(20/29)比87.5%(49/56)]，差异均有统计学意义( χ2＝9.820、4.909、4.683， P均<0.05)。 结论:CapG、TrkB和Prox-1是对胃癌术前淋巴结转移预测价值相对较高的分子标志物，均与胃癌的进展和不良预后有关。

目的:探讨发生于浅表软组织的单纯性普通淋巴管畸形（common lymphatic malformation，CLM）临床病理学特征、分型和遗传学特征，以及分型与上述特征间的相关性。方法:回顾性收集河南省人民医院2019年8月至2022年8月手术切除CLM病例110例，分析临床及病理学信息，并行相关免疫组织化学染色及PIK3CA基因荧光定量PCR检测，随访患者。结果:110例患者中男性53例，女性57例，65例（65/110，59.1%）为≤2岁时首次发现，常见于头颈部（41/110，37.3%），102例（102/110，92.7%）为单灶，83例（83/110，75.5%）为肤色肿块，69例（69/110，62.7%）边界不清，10例（10/110，9.1%）为弥漫性大面积重症表现。CLM的分型中，巨囊型52例（52/110，47.3%），微囊型23例（23/110，20.9%），混合型35例（35/110，31.8%）。巨囊型CLM大体上表现为柔软半透明肿块，切面可见大囊腔；镜下由大的不规则扩张管壁组成，管壁较厚，常有不规则平滑肌及淋巴细胞浸润。微囊型CLM大体上表现为皮肤表面疣状突起或半透明水泡，切面多呈细小蜂窝状结构；镜下由圆形或成角的扩张小淋巴管组成，管壁少或无平滑肌。混合型兼具巨囊型和微囊型的形态学表现。免疫组织化学染色显示淋巴管内皮细胞呈LYVE-1、D2-40、PROX1、CD31、VEGFR3阳性，CD34阴性；巨囊型及局灶混合型淋巴管壁呈平滑肌肌动蛋白阳性。13例CLM中8例存在PIK3CA基因点突变。所有患者获随访，24例（24/110，21.8%）术后复发，其多见于混合型，其次为微囊型。结论:CLM是异常淋巴管扩张形成的先天性脉管畸形，存在PIK3CA基因突变；不同分型间临床病理学表现存在差异，鉴于微囊型和混合型较易复发，病理诊断应尽可能给予精准分型以指导疾病治疗和预后判断。

目的 观察正常及损伤后小鼠脊髓中淋巴管的分布及特点,探讨脊髓损伤修复过程中有无淋巴管的参与.方法 成年雄性KM小鼠39只,小鼠随机分为两组:正常组6只和损伤组33只.将损伤组小鼠随机分为术后1 d组、术后3 d组、术后5 d组、术后7 d组和术后14 d组,每组6只.损伤组部分小鼠针刺损伤后死亡3只,后随机补充样本.正常组不损伤脊髓,损伤组采用针刺法制备脊髓损伤.通过免疫组织化学方法检测脊髓中淋巴管内皮细胞的分布,观察正常及针刺损伤后小鼠脊髓中淋巴管内皮细胞标记物同源异型盒基因转录因子1(prox-1)、淋巴管内皮细胞透明质酸受体-1(lyve-1)、平足蛋白(podoplanin)以及血管内皮细胞标记物CD34的表达情况.通过对脊髓样本进行免疫荧光染色,观察lvye-1/prox-1、lyve-1/podoplanin及CD34/prox-1的共表达情况,探讨新生淋巴管内皮细胞的来源.结果 正常成年小鼠脊髓中存在淋巴管样结构,并呈节段性分布,横向走行于白质与灰质间;针刺损伤处的脊髓出现新生淋巴管样结构,同时表达prox-1、podoplanin、lyve-1和CD34;脊髓损伤处瘢痕化后,新生的淋巴管样结构消失.结论 正常成年小鼠脊髓中存在节段性横向分布的淋巴管样结构;脊髓损伤处重建过程中有新生淋巴管样结构的参与,新生淋巴管内皮细胞可能来源于周围既存的淋巴管或血管内皮细胞.

目的:探讨推拿促进大鼠眼内前列腺素的生成,诱导大鼠眼部睫状体内淋巴管的增生,进而降低青光眼眼压的作用机制.方法:将48只SD大鼠造模后随机分为青光眼模型组、推拿组、拉坦前列腺素组和推拿结合拉坦前列腺素组,每组12例.治疗过程中分别抽取各组不同时间段房水进行酶联免疫吸附试验(ELISA),采用蛋白质印迹法、定量聚合酶链反应、免疫荧光法、免疫组织化学法检测同源盒基因转录因子1(Prox-1)、5'-核苷酸酶(5'-Nase)表达水平,淋巴管酶组织化学染色法检测各组睫状体内淋巴管的增生情况.结果:推拿结合拉坦前列腺素组眼压均低于其他组(P＜0.05);推拿结合拉坦前列腺素组中Prox-1、5'-Nase表达水平均高于其他组(P＜0.05);推拿结合拉坦前列腺素组睫状体组织淋巴增殖均高于其他组.结论:推拿可以有效促进睫状体淋巴管的增生,而增生的淋巴管能吸收多余的房水导致眼压下降.

目的 探究同源盒蛋白1(PROX1)的表达水平与脑胶质瘤患者预后的关系及其生物学作用.方法 利用基因表达谱交互分析(GEPIA)数据库进行脑胶质瘤患者中PROX1的表达水平分析和生存分析.选择2015年5月至2021年12月在中国人民解放军空军军医大学第一附属医院神经外科收治的75例脑胶质瘤患者,分别收集患者肿瘤组织标本以及肿瘤旁正常组织标本,采用免疫组化染色检测组织中PROX1表达,根据随访数据进行患者生存分析.将U251细胞分为对照组、si-NC组和si-PROX1组.si-NC组和si-PROX1组U251细胞分别转染si-NC和si-PROX1,对照组U251不做转染处理.通过EdU实验检测U251细胞增殖水平,通过流式细胞术实验检测U251细胞凋亡,通过Transwell实验检测U251细胞迁移和侵袭水平,采用qRT-PCR和Western blot分别检测U251细胞中PROX1、血管内皮生长因子C(VEGFC)和血管内皮生长因子受体3(VEGFR3)的mRNA和蛋白表达水平.结果 GEPIA数据库分析结果显示,PROX1在胶质母细胞瘤(GBM)组织中高表达.临床组织标本分析结果显示,PROX1在脑胶质瘤组织中高表达,且PROX1高表达患者的生存期低于PROX1低表达患者(P＜0.01).与对照组和si-NC组比较,si-PROX1组U251细胞中PROX1的mRNA和蛋白表达水平均降低(P＜0.01).与对照组和si-NC组比较,si-PROX 1组U251细胞增殖能力降低(P＜0.01),凋亡水平升高(P＜0.01),U251细胞迁移和侵袭数量均降低(P＜0.05).与对照组和si-NC组比较,si-PROX1组U251细胞中PROX1、VEGFC和VEGFR3的mRNA和蛋白表达水平均降低(P＜0.05).结论 PROX1高表达是脑胶质瘤患者预后的不良因素,PROX1通过抑制GBM细胞凋亡,促进GBM细胞增殖、迁移和侵袭,进而促进GBM的恶性发展.

目的 探讨老年胃癌患者血清整合素β6 和组织中同源异型盒基因转录因子(Prox)-1、脂肪非典型钙黏蛋白(FAT)4 表达变化及对淋巴结转移的预测价值.方法 选取老年胃癌患者 80 例为胃癌组,老年健康志愿者 48 例为对照组.采集空腹肘静脉血4 ml,双抗体夹心酶联免疫吸附试验检测血清整合素β6 浓度;术中采集老年胃癌患者的胃癌组织标本和癌旁正常组织标本,免疫组化法检测Prox-1、FAT4 表达.结果 胃癌组血清整合素β6 浓度明显高于对照组(P<0.01).胃癌组织中Prox-1 表达阳性率明显高于癌旁正常组织,FAT4 表达阳性率明显低于癌旁正常组织(P<0.01).肿瘤淋巴结转移分类(TNM)分期Ⅲ～Ⅳ期、肿瘤直径>4 cm、分化程度未分化或低分化、有淋巴结转移的老年胃癌患者血清整合素β6 浓度明显高于TNM分期Ⅰ～Ⅱ期、肿瘤直径≤4 cm、分化程度中分化或高分化、无淋巴结转移的患者(P<0.05);TNM分期Ⅲ～Ⅳ期、肿瘤直径>4 cm、分化程度未分化或低分化、有淋巴结转移的老年胃癌患者Prox-1 阳性率明显高于TNM分期Ⅰ～Ⅱ期、肿瘤直径≤4 cm、分化程度中分化或高分化、无淋巴结转移的患者,FAT4 阳性率明显低于TNM分期Ⅰ～Ⅱ期、肿瘤直径≤4 cm、分化程度中分化或高分化、无淋巴结转移的患者(P<0.05).受试者工作特征(ROC)曲线分析显示,血清整合素β6 及组织中Prox-1、FAT4 表达水平单独和联合检测对老年胃癌患者淋巴结转移均具有较高的预测价值(P<0.05),其中血清整合素β6 及组织中Prox-1、FAT4 表达水平联合检测的预测价值最高[曲线下面积(AUC)= 0.941],特异度和阳性预测值明显高于各指标单独检测(P<0.05).结论 老年胃癌患者血清整合素β6 浓度升高,组织中Prox-1 高表达、FAT4 低表达,且与病理指标相关,联合检测可用于对患者淋巴结转移的预测.

目的:探讨动态增强M RI检查对肺癌病灶内细胞增殖、血管和淋巴管新生的评估价值.方法:选择在本院接受手术治疗的肺部小结节患者519例,根据术后病理结果分为NSCLC组410例、良性病变组109例.对比两组术前病灶动态增强M RI参数水平,病灶组织中增殖基因、血管新生相关基因、淋巴管新生相关基因表达量的差异.采用Pearson检验评估NSCLC患者病灶动态增强M RI参数水平与肿瘤细胞恶性程度的相关关系.结果:NSCLC组患者病灶动态增强M RI参数Ktrans、Kep水平高于良性病变组;NSCLC组病灶组织中增殖基因Axin、FHIT mRNA 的表达量低于良性病变组,RACK1、HMGN5、MIF mRNA 的表达量高于良性病变组;NSCLC 组病灶组织中血管新生相关基因 VEGF、COX-2、EGFR、MACC1 mRNA的表达量高于良性病变组;NSCLC组病灶组织中淋巴管新生相关基因Akt1、HIF-1α、Prox-1、PTTG mRNA的表达量高于良性病变组.相关性分析发现,NSCLC患者动态增强MRI参数Ktrans、Kep水平与病灶内细胞增殖、血管和淋巴管新生程度直接相关.结论:NSCLC患者病灶组织动态增强M RI参数水平异常改变,具体水平与肿瘤细胞恶性程度密切相关.

目的:探讨淋巴管内皮透明质酸受体1(lymphatic vessel endothelial hyaluronan receptor 1,LYVE-1)、同源异型盒基因转录因子1(prospero-related homeobox 1,Prox-1)的表达与子宫内膜癌临床病理特征的关系.方法:选取子宫内膜癌石蜡切片标本57例,留取新鲜子宫内膜癌组织及癌旁组织标本共38例.采用免疫组织化学、蛋白质印迹(Western blotting)、实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(Realtime RT-PCR)检测LYVE-1、Prox-1在癌组织及癌旁组织中的表达,分析这2种蛋白在癌组织与癌旁组织中的表达差异与临床病理特征的关系.结果:①免疫组化显示,组织学分级Ⅰ级患者癌灶内的Prox-1阳性表达率高于Ⅱ级、Ⅲ级患者,差异有统计学意义(P＜0.05);淋巴脉管间隙浸润(lymph vascular space invasion,LVSI)阳性患者癌旁组织的LYVE-1阳性表达率高于LVSI阴性者,差异有统计学意义(P＜0.05);LVSI阳性、晚期患者子宫内膜癌旁组织Prox-1表达的阳性率升高,与LVSI阴性及早期患者比较差异有统计学意义(P＜0.05).②Realtime RT-PCR及Western blotting检测显示,相对于无淋巴结转移组的癌旁组织,淋巴结转移组癌旁Prox-1蛋白表达量为1.250 0±0.008 2(P＜0.05),LYVE-1蛋白表达量为1.860 0±0.012 4(P＜0.05);相对于癌旁组织,淋巴结转移组癌组织中Prox-1 mRNA表达量为0.693±0.083(P＜0.05),LYVE-1 mRNA表达量为0.42±0.16(P＜0.05).结论:LYVE-1、Prox-1可能是子宫内膜癌淋巴转移的潜在标志物,子宫内膜癌癌旁组织中淋巴管生成可能与淋巴转移有关.

目的 探讨人胚胎干细胞(hESC)定向分化为晶状体小体(LB)过程中晶状体发育相关转录因子的表达特点和规律. 方法 通过“三阶段法”体外诱导hESC定向分化为LB.取hESC(D0)和诱导分化不同时间点的细胞,应用高通量测序技术,通过生物信息学方法分析晶状体发育相关的转录因子及其亚型的表达变化特点和规律.采用Western blot法和免疫荧光染色技术对相关基因在蛋白水平的表达进行检测.结果 光学显微镜下,未分化的hESC呈圆形;分化后0～6 d(D0 ～ D6)的细胞更圆且排列更紧密;D7～D18细胞由圆形逐渐延长变为梭形;D19 ～ D32,形成有三维立体结构的透明结构,即LB.荧光定量PCR结果显示,干细胞标记基因的表达在分化过程显著降低,而晶状体特异性基因的表达明显升高.免疫荧光染色结果显示,LB表达晶状体特异性蛋白α-crystallin和β-crystallin.高通量测序聚类分析结果显示,D0与D32之间的转录因子基因表达谱差异最为显著,而D6和D18之间的差异最小.前基板基因DLX3、DLX5、DLX6、HES1、HES4、OTX2和EYA1在分化第一阶段表达显著升高,随后下降;晶状体特异性基因中SOX2蛋白表达逐渐降低,而后升高,而PAX6蛋白的表达随分化时间延长逐渐增加;晶状体分化基因MAB21L1、CMAF、PROX1及PITX3等在分化早期变化不显著,在分化第三阶段表达明显增加. 结论 体外定向分化的3个阶段依次对应体内晶状体发育的前基板外胚层(PPE)阶段、前晶状体外胚层(PLE)和晶状体外胚层(LE)阶段、晶状体泡(LV)和晶状体细胞分化阶段,提示hESC体外定向分化过程很好地模拟了体内晶状体的胚胎发育过程,为研究晶状体发育和先天性晶状体疾病的分子机制提供了理想的模型.