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持续光照致昼夜节律紊乱小鼠糖脂代谢及多组织器官形态学的变化
编辑人员丨1周前
目的:观察持续光照致昼夜节律紊乱小鼠糖脂代谢及多组织器官形态学的变化并探讨其内在联系。方法:将60只非特定病原体级健康雄性C57BL/6J小鼠按照随机数字表法分为正常光照(LD)组和24 h持续光照(LL)组。行腹腔内注射葡萄糖耐量实验,检测小鼠空腹血糖(FPG),测量小鼠体重,ELISA法测定游离脂肪酸(FFA)、甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、空腹胰岛素(FINS)及尿6-羟基硫酸褪黑素(6-SML)水平,计算葡萄糖曲线下面积(AUCG)和胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),磁共振成像评价体脂分布。实时荧光定量PCR检测骨骼肌及肝脏核心生物钟基因Nr1D1核受体亚家族1,组D,成员1( Rev-erbα)mRNA,光学显微镜及透射电镜观察小鼠脂肪、骨骼肌、心肌、肾脏的病理细微结构。组间昼夜节律性差异分析采用双因素方差分析,其余数据比较采用 t检验。 结果:与LD组相比,LL组小鼠夜间尿6-SML水平降低( P<0.05);小鼠骨骼肌及肝脏中 Rev-erbα mRNA表达节律发生改变;LL组小鼠体重、血清FFA、TG、TC、IL-6、TNF-α、FPG、FINS、内脏脂肪体积、AUCG、HOMA-IR均增加( P<0.05)。进一步光学显微镜及透射电镜显示,持续光照可使小鼠脂肪、骨骼肌、心肌、肾脏均发生不同程度的病理损伤。 结论:持续光照导致小鼠糖脂代谢及多器官形态学改变,昼夜节律紊乱可从多层面对机体造成不良影响。
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编辑人员丨1周前
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生物钟调控呼吸道过敏性疾病的研究新进展
编辑人员丨1周前
变应性鼻炎、支气管哮喘等呼吸道过敏性疾病呈现24 h波动特点,与生物钟的调控密切相关。经典免疫细胞如树突状细胞、T细胞、肥大细胞(MC)、嗜酸性粒细胞等,可周期性表达多种时钟基因Clock、Bmal1、Per、Rev-erbα,参与IgE介导的呼吸道过敏性疾病的昼夜节律性发作。在现代社会中,机体内在生物钟与外界生物钟“失同步”产生的生物节律紊乱,有可能加重呼吸道过敏性疾病的发展进程。药理性上调MC中Per2基因或重设内外时钟节律活动,可以“迟滞”呼吸道过敏性疾病的时相反应,从而抑制其症状发作。本文重点介绍生物钟调控呼吸道过敏性疾病的作用机制和临床新进展,以期为呼吸道过敏性疾病的“时间生物学疗法”提供科学依据和理论参考。
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编辑人员丨1周前
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Rev-erbα/Bmal1信号通路在糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用及其与自噬的关系
编辑人员丨1周前
目的:评价Nr1D1核受体亚家族1,组D,成员1(Rev-erbα)/芳香烃受体核转位蛋白样1受体(Bmal1)信号通路在糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用及其与自噬的关系。方法:SPF级成年雄性SD大鼠,6~8周龄,体重200~220 g,腹腔注射链脲佐菌霉素60 mg/kg建立1型糖尿病模型,糖尿病造模成功后继续饲养8周。取糖尿病大鼠30只,采用随机数字表法分为3组:糖尿病假手术组(DS组, n=6)、糖尿病心肌缺血再灌注组(DI/R组, n=12)和糖尿病心肌缺血再灌注+Rev-erbα拮抗剂SR-8278组(DI/R+SR组, n=12)。另取非糖尿病大鼠18只,采用随机数字表法分为2组:非糖尿病假手术组(NS组, n=6)和非糖尿病心肌缺血再灌注组(NI/R组, n=12)。采用结扎左冠状动脉前降支30 min再灌注120 min的方法建立心肌缺血再灌注损伤模型。DI/R+SR组于缺血前1 h时经股静脉注射SR-8278 2 mg/kg。再灌注结束即刻采集颈动脉血标本,采用ELISA法检测血清cTnI、CK-MB和LDH水平;然后处死大鼠,取心肌组织,采用TTC法测定心肌梗死面积百分比,透射电镜下计数自噬小体,采用RT-PCR检测Rev-erbα和Bmal1的mRNA表达水平,Western blot法检测Rev-erbα、Bmal1、微管相关蛋白1轻链3(LC3)Ⅱ和LC3 Ⅰ的表达水平,并计算LC3 Ⅱ/LC3Ⅰ比值。 结果:与NS组比较,NI/R组心肌梗死体积百分比、血清cTnI、CK-MB和LDH水平和自噬小体计数升高,心肌组织Rev-erbα及其mRNA表达上调,Bmal1及其mRNA表达下调,LC3 Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高,DS组血清cTnI、CK-MB和LDH水平升高,自噬小体计数降低,心肌组织Rev-erbα及其mRNA表达上调,Bmal1及其mRNA表达下调,LC3 Ⅱ/LC3Ⅰ比值降低( P<0.05);与NI/R组比较,DI/R组心肌梗死体积百分比、血清cTnI、CK-MB和LDH水平升高,自噬小体计数降低,心肌组织Rev-erbα及其mRNA表达上调,Bmal1及其mRNA表达下调,LC3 Ⅱ/LC3Ⅰ比值降低( P<0.05);与DS组比较,DI/R组心肌梗死体积百分、血清cTnI、CK-MB和LDH水平和自噬小体计数升高,心肌组织Rev-erbα及其mRNA表达上调,Bmal1及其mRNA表达下调,LC3 Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高( P<0.05);与DI/R组比较,DI/R+SR组心肌梗死体积百分比、血清cTnI、CK-MB和LDH水平降低,自噬小体计数降低,心肌组织Rev-erbα及其mRNA表达下调,Bmal1及其mRNA表达上调,LC3 Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高( P<0.05)。 结论:Rev-erbα/BMAL1信号通路可通过调节细胞自噬水平,参与糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤的过程。
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编辑人员丨1周前
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心房颤动与昼夜节律的相关性研究进展
编辑人员丨1周前
昼夜节律是指以24 h为周期的生理振荡过程。大多数研究表明心房颤动(房颤)的发作存在昼夜节律,呈现单峰或双峰分布,但其昼夜节律的分布规律仍存在着争议。昼夜节律可能通过一系列机制,如调节离子通道、缝隙连接、心房纤维化、脂质代谢等,对房颤产生影响。生物钟相关的转录因子CLOCK及BMAL1、振荡器Klf15、核受体Rev-erb等可能会成为干预房颤发作或房颤相关血栓事件的新靶点。该文综述了房颤与昼夜节律的相关性。
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编辑人员丨1周前
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海马REV-ERBα在大鼠术后认知功能障碍中的作用
编辑人员丨1周前
目的:评价海马REV-ERBα在大鼠术后认知功能障碍(POCD)中的作用。方法:SPF级健康雄性SD大鼠32只,体重360~380 g,12~14周龄,采用随机数字表法分为4组( n=8):对照组(C组)、手术组(S组)、手术+二甲基亚砜组(SD组)和手术+SR9009组(SS组)。S组、SD组和SS组在七氟烷麻醉下进行剖腹探查术;SD组于剖腹探查术前1 h时于海马CA1区注射含0.1%二甲基亚砜的生理盐水,每侧2 μl;S+SR9009组于剖腹探查术前1 h时于海马CA1区注射REV-ERBα激动剂SR9009(溶于含0.1%二甲基亚砜的生理盐水中),每侧2 μl。分别于术后1和3 d时行Morris水迷宫实验。术后3 d水迷宫实验结束后1 h时处死大鼠,取海马组织,采用Western blot法检测REV-ERBα、脑和肌肉ARANT样蛋白1(BMAL1)、突触素(SYN)、突触后密度蛋白95(PSD95)和N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基(GRIN2B)表达水平;采用尼氏染色观察海马神经元及尼氏小体形态,并行存活神经元计数。 结果:与C组比较,S组和SD组术后1和3 d时目标象限停留时间百分比降低,穿越平台次数减少,海马REV-ERBα、BMAL1、PSD95、SYN和GRIN2B表达下调,CA1区存活神经元计数降低( P<0.05);与S组和SD比较,SS组术后1和3 d时目标象限停留时间百分比升高,穿越平台次数增多,海马REV-ERBα和PSD95表达上调,CA1区存活神经元计数升高( P<0.05),BMAL1、SYN和GRIN2B表达无统计学意义( P>0.05)。S组和SD组上述各指标比较差异无统计学意义( P>0.05)。 结论:REV-ERBα激活可改善大鼠POCD,其机制可能与上调海马PSD95表达,减轻神经元损伤有关。
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编辑人员丨1周前
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Bmal1对糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响及其相关机制
编辑人员丨1周前
目的:探讨Bmal1对糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响及其相关机制。方法:选择健康雄性清洁级SD大鼠65只,采用数字表法随机纳入非糖尿病假手术组(N-S组)10只、非糖尿病缺血再灌注组(N-I/R组)10只、非糖尿病+SR8278缺血再灌注组(NS-I/R组)10只;剩余35只采用高脂饲料喂养+腹腔注射链脲佐菌素方法制备2型糖尿病模型,取造模成功的大鼠30只,采用数字表法随机分为糖尿病假手术组(DM-S组)、糖尿病缺血再灌注组(DM-I/R组)、糖尿病+SR8278缺血再灌注组(DMS-I/R组),每组10只。6组大鼠按观察项目不同随机分为A、B亚组,每组5只。各组大鼠制备心肌缺血再灌注模型,其中N-S组和DM-S组仅模拟手术过程,不结扎前降支;NS-I/R组、DMS-I/R组大鼠于心肌缺血再灌注模型制备前7天开始腹腔注射孤儿核受体Rev-erbα拮抗剂SR8278(50 mg/kg),每天1次×7 d。心肌缺血再灌注模型成功后维持灌注24 h,取各组A亚组大鼠,分离出左心室行病理染色检查和心肌超微结构透射电镜观察,分离左心室后的心脏制备病理切片进行心肌梗死灶体积的测定;各组B亚组大鼠,取心尖区心肌组织行Western blot测定心肌Bmal1、Sirt3、Nlrp3及Bnip3蛋白的表达。结果:(1)N-S组和DM-S组未见心肌梗死灶,N-I/R组、NS-I/R组、DM-I/R组、DMS-I/R组心肌梗死灶体积分别为(0.48±0.08)cm 3、(0.34±0.05)cm 3、(0.65±0.06)cm 3、(0.46±0.06)cm 3。与N-I/R组比较,NS-I/R组心肌梗死灶体积较小,DM-I/R组较大,差异均有统计学意义( P值均<0.05);与NS-I/R组比较,DM-I/R组、DMS-I/R组心肌梗死灶体积均较大,差异均有统计学意义( P值均<0.05);与DM-I/R组比较,DMS-I/R组心肌梗死灶体积较小,差异有统计学意义( P<0.05)。(2)心肌组织病理检查:N-S组心肌组织结构完整,心肌细胞排列整齐、致密,细胞质染色均匀;DM-S组心肌纤维排列稍紊乱,细胞质有轻度的肿胀,可见轻度炎性细胞浸润;N-I/R组细胞形态不规则,心肌纤维排列紊乱或断裂,细胞质有不同程度的肿胀甚至破裂,胞核排列不齐、碎裂和溶解;DM-I/R组心肌病理损伤程度较N-I/R组更重,心肌纤维断裂,心肌细胞崩解,细胞核溶解,染色加深,可见大量炎细胞浸润。与N-I/R组和DM-I/R组相比,NS-I/R组和DMS-I/R组心肌细胞形态和心肌纤维排列有所恢复,炎性细胞浸润大大减少。(3)电子显微镜下心肌组织超微结构:N-S组线粒体形态及数量正常,未见自噬体;DM-S组较N-S组出现自噬小体;N-I/R组心肌细胞中正常线粒体数量减少,线粒体明显肿胀并含有大量自噬体,一些自噬体显示出封装未降解的线粒体结构和残留的细胞成分。与N-I/R组相比,NS-I/R组线粒体结构较完整,线粒体轻度肿胀,损伤较轻;DM-I/R组线粒体嵴结构异常,线粒体嵴分隔、肿胀和溶解,线粒体面积/周长比增加,线粒体自噬功能受损,自噬体增加。与DM-I/R组比较,DMS-I/R组肌纤维排列较为整齐,线粒体中结构异常的线粒体嵴减少,自噬体数量减少。(4)心肌组织Bmal1、Sirt3、Nlrp3及Bnip3蛋白表达水平。与N-S组比较,N-I/R组、NS-I/R组、DM-S组、DM-I/R组、DMS-I/R组Bmal1、Sirt3蛋白的表达呈下降趋势,Nlrp3、Bnip3蛋白的表达呈上升趋势,差异均有统计学意义( P值均<0.05)。与DM-S组比较,DM-I/R组Bmal1、Sirt3蛋白表达下调,Nlrp3、Bnip3蛋白表达上调;DMS-I/R组Nlrp3蛋白表达下调,Bnip3蛋白表达上调:差异均有统计学意义( P值均<0.05)。与DM-I/R组比较,DMS-I/R组Bmal1、Sirt3、Bnip3蛋白表达上调,Nlrp3蛋白表达下调,差异均有统计学意义( P值均<0.05)。 结论:Bmal1在大鼠糖尿病心肌缺血再灌注损伤中对心肌有保护作用,其保护机制可能与激活Sirt3途径诱导线粒体自噬和抑制炎性反应有关。
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编辑人员丨1周前
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REV-ERBα对睡眠剥夺大鼠剖腹探查手术后工作记忆的调控作用及其机制研究
编辑人员丨1周前
目的:探讨REV-ERBα激动剂SR9009对急性快速眼球运动(REM)睡眠剥夺模型大鼠行剖腹探查手术后海马工作记忆的保护作用及其可能的机制。方法:90只SD大鼠采用随机数字表法分为对照组、睡眠剥夺组、剖腹探查手术组、睡眠剥夺+剖腹探查手术组、睡眠剥夺+剖腹探查手术+SR9009组,每组18只。睡眠剥夺组、剖腹探查手术组、睡眠剥夺+剖腹探查手术组大鼠分别给予快速眼球运动(REM)睡眠剥夺96 h或(和)剖腹探查手术;睡眠剥夺+剖腹探查手术+SR9009组大鼠给予REM睡眠剥夺96 h后行剖腹探查手术,术后当天到术后第5天每天腹腔注射100 mg/kg SR9009。术后第1~5天行对位空间探索训练记录大鼠的对位逃避潜伏期。术后第5天行对位空间探索实验记录大鼠穿越原平台位置的次数;术后第3天Western blotting实验检测5组大鼠海马REV-ERBα和BMAL1蛋白的表达;酶联免疫吸附实验检测5组大鼠海马炎性因子白介素(IL)-1β和IL-6的水平;免疫荧光染色检测海马神经元核蛋白(NeuN)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。结果:(1)术后第1、2、3、4、5天睡眠剥夺组、剖腹探查手术组、睡眠剥夺+剖腹探查手术组大鼠对位逃避潜伏期长于对照组;睡眠剥夺组和睡眠剥夺+剖腹探查手术组大鼠的对位逃避潜伏期长于剖腹探查手术组;术后第2、3、4、5天睡眠剥夺+剖腹探查手术+SR9009组大鼠的对位逃避潜伏期短于睡眠剥夺+剖腹探查手术组,差异均有统计学意义( P<0.05)。睡眠剥夺组、剖腹探查手术组、睡眠剥夺+剖腹探查手术组大鼠穿越原平台位置的次数少于对照组;睡眠剥夺+剖腹探查手术组大鼠穿越原平台位置的次数少于剖腹探查手术组,睡眠剥夺+剖腹探查手术+SR9009组大鼠穿越原平台的次数多于睡眠剥夺+剖腹探查手术组,差异均有统计学意义( P<0.05)。(2)与对照组比较,剖腹探查手术组、睡眠剥夺组和睡眠剥夺+剖腹探查手术组海马组织中REV-ERBα、BMAL1蛋白的表达降低,IL-1β和IL-6的水平增高;与睡眠剥夺+剖腹探查手术组比较,睡眠剥夺+剖腹探查手术+SR9009组大鼠海马组织中REV-ERBα、BMAL1蛋白的表达增加,IL-1β和IL-6的水平降低,差异均有统计学意义( P<0.05)。(3)与对照组比较,剖腹探查手术组、睡眠剥夺组、睡眠剥夺+剖腹探查手术组大鼠海马CA3区神经元数量减少、星形胶质细胞活化增加;与睡眠剥夺+剖腹探查手术组比较,睡眠剥夺+剖腹探查手术+SR9009组大鼠海马CA3区神经元数量增加、星形胶质细胞活化减弱。 结论:急性REM睡眠剥夺模型大鼠行剖腹探查手术可导致海马工作记忆的损伤,其可能与海马REV-ERBα、BMAL1表达的下降和炎症反应的增加有关,使用SR9009可降低损害。
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编辑人员丨1周前
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异氟烷对小鼠海马和大脑皮层中 RORα、 Rev-erbα基因转录及节律相位的调控作用
编辑人员丨1周前
目的:探讨异氟烷麻醉对小鼠海马和大脑皮层中时钟基因 RORα、 Rev-erbα的转录水平及节律相位的影响。 方法:将36只7周龄雄性C57BL/6J小鼠按随机数字表法分为正常对照组与麻醉组( n=18),并于12 h光照/12 h黑暗环境中持续适应1周。麻醉组于实验前一晚22:00 pm起以1.2%异氟烷麻醉维持6 h。麻醉结束4 h后,以8:00 am光照时间为授权时间起点(ZT0),并每间隔8小时(ZT8、ZT16、ZT24、ZT32、ZT40)采集2组小鼠的大脑皮层和海马标本,应用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测 RORα、 Rev-erbα mRNA的表达,以及采用Chronos-Fit软件进行 RORα、 Rev-erbα mRNA表达的余弦曲线节律分析。 结果:组间因素主效应分析显示,与正常对照组相比,麻醉组小鼠海马中 RORα mRNA的表达明显下降,大脑皮层中 RORα mRNA的表达明显上升,大脑皮层中 Rev-erbα mRNA的表达明显下降,差异均有统计学意义( P<0.05)。正常对照组小鼠海马和大脑皮层中 RORα、 Rev-erbα mRNA的表达呈现周期约24 h的节律性,而麻醉组小鼠海马中 RORα mRNA的峰值相位时间较正常对照组向右偏移5.41 h, Rev-erbα mRNA的峰值相位时间向左偏移0.89 h;大脑皮层中 RORα mRNA的峰值相位时间向右偏移0.35 h, Rev-erbα mRNA的峰值相位时间向左偏移0.56 h。 结论:异氟烷麻醉可引起小鼠海马及大脑皮层中 RORα、 Rev-erbα基因的转录水平及节律相位发生改变。
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编辑人员丨1周前
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糖尿病大鼠心肌缺血再灌注时Rev-erbα与NLRP3炎症小体的关系
编辑人员丨1周前
目的:评价糖尿病大鼠心肌缺血再灌注时Nr1D1核受体亚家族1,组D,成员1(Rev-erbα)与NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3 (NLRP3)炎症小体的关系。方法:SPF级健康成年雄性SD大鼠,体重210~240 g,采用腹腔注射1%链脲佐菌素60 mg/kg制备1型糖尿病模型。取非糖尿病大鼠18只,采用随机数字表法分为2组:非糖尿病假手术组(NS组, n=6)和非糖尿病心肌缺血再灌注组(NIR组, n=12)。取糖尿病大鼠30只,采用随机数字表法分为3组:糖尿病假手术组(DS组, n=6)、糖尿病心肌缺血再灌注组(DIR组, n=12)和糖尿病心肌缺血再灌注+ Rev-erbα抑制剂SR8278组(DIR+SR组, n=12)。采用结扎左冠脉前降支30 min后再灌注120 min的方法建立心肌缺血再灌注损伤模型。DIR+SR组于缺血前1 h时经股静脉注射SR8278 2 mg/kg。再灌注结束时经采用ELISA法检测血清CK-MB、LDH和cTnI浓度,TTC法测心肌梗死面积百分比,HE染色法观察心肌组织病理学结果,Western blot法检测心肌组织Rev-erbα、NLRP3和IL-1β的表达水平。 结果:与假手术大鼠比较,心肌缺血再灌注大鼠血清CK-MB、LDH和cTnI浓度升高,心肌组织Rev-erbα、NLRP3和IL-1β表达上调( P<0.05),心肌组织病理学损伤明显;与NIR组比较,DIR组心肌梗死面积百分比、血清CK-MB、LDH和cTnI浓度升高,心肌组织Rev-erbα、NLRP3和IL-1β表达上调( P<0.05),心肌组织病理学损伤加重;与DIR组比较,DIR+SR组心肌梗死面积百分比、血清CK-MB、LDH和cTnI水平降低,心肌组织Rev-erbα、NLRP3和IL-1β表达下调( P<0.05),心肌组织病理学损伤减轻。 结论:Rev-erbα可促进NLRP3炎症小体活化,参与糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤的病理生理机制。
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编辑人员丨1周前
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辛伐他汀预防小鼠高脂血症合并脑缺血损伤及其对时钟基因的调控
编辑人员丨1个月前
目的 探讨辛伐他汀对小鼠高血脂合并脑缺血再灌注损伤(CIRI)的预防作用及机制.方法 将60只C57BL/6J小鼠分为假手术组、CIRI组[采用大脑中动脉阻塞再灌注法(MCAO/R)制备小鼠CIRI模型]、高脂组(ip给予泊洛沙姆407)、高脂+CIRI组(ip给予泊洛沙姆407,24 h后MCAO/R造模)、高脂+CIRI+辛伐他汀5和10 mg·kg-1组(先ig给予辛伐他汀连续7d,后按照高脂+CIRI组处理).再灌注24h后,对各组小鼠进行神经功能缺损评分;转棒实验测定掉落潜伏期;自主活动测试小鼠活动次数;TTC染色测定脑梗死体积;激光散斑血流成像检测小鼠脑血流量;取全血分离血清,并测定总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)含量;实时荧光定量PCR和Westen印迹法检测小鼠右脑皮质时钟基因Rev-erbα和Bmal1 mRNA及蛋白表达水平.结果 与假手术组相比,CIRI组小鼠神经功能缺损评分升高(P<0.01),掉落潜伏期缩短(P<0.01),活动次数减少(P<0.01).与CIRI组相比,高脂+CIRI组小鼠神经功能损伤加重(P<0.01);脑梗死体积显著增加(P<0.01);脑血流量显著降低(P<0.01);血清中TC,TG,LDL-C及MDA含量显著升高(P<0.01),GSH-PX水平显著降低(P<0.01);脑皮质Rev-erbα mRNA和蛋白表达水平显著下调(P<0.01);Bmal1 mRNA和蛋白表达水平显著上调(P<0.01).与高脂+CIRI组相比,高脂+CIRI+辛伐他汀5和10 mg·kg-1组小鼠神经功能损伤减轻(P<0.01);脑梗死体积显著减小(P<0.01);脑血流量显著增加(P<0.01);血清中TC,TG,LDL-C及MDA含量显著降低(P<0.01),GSH-PX水平显著升高(P<0.01);脑皮质Rev-erbα mRNA和蛋白表达水平显著上调(P<0.01);Bmal1 mRNA和蛋白表达水平显著下调(P<0.01).结论 辛伐他汀预防性给药能有效减轻小鼠高脂血症合并CIRI,其机制与其降血脂及调节时钟基因表达有关.
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编辑人员丨1个月前
