目的:探讨CLOCK mRNA及蛋白表达水平与鼻咽癌患者临床特征的关系。方法:收集2018—2019年贵州医科大学附属肿瘤医院33例鼻咽癌患者的冰冻组织标本，收集2019年贵州医科大学附属医院17例鼻咽部慢性炎症组织标本，收集2008—2014年贵州医科大学附属肿瘤医院鼻咽癌组织蜡块68例及鼻咽慢性炎症组织蜡块37例。采用实时荧光定量PCR方法和Western blot法检测CLOCK mRNA和蛋白的表达情况。培养鼻咽癌细胞CNE1、CNE2、5-8F与正常鼻咽上皮细胞NP69，采用实时荧光定量PCR法检测各细胞中CLOCK mRNA在ZT2、ZT6、ZT10、ZT14、ZT18、ZT22时间点的表达水平，采用余弦法拟合CLOCK mRNA在鼻咽癌中表达的节律性。采用免疫组化法检测68例鼻咽癌和37例鼻咽慢性炎症组织蜡块中CLOCK蛋白的表达。生存分析采用Kaplan-Meier法和Log rank检验，影响因素分析采用Cox回归模型。结果:CNE1、CNE2和5-8F细胞中CLOCK mRNA表达水平(分别为0.63±0.07、0.91±0.02和0.33±0.04)均低于NP69细胞(1.00±0.00，均 P<0.05)。CNE1、CNE2和5-8F细胞中CLOCK蛋白表达水平(分别为0.79±0.06、0.57±0.05和0.74±0.10)均低于NP69细胞(1.00±0.00，均 P<0.05)。鼻咽癌细胞CEN1、CNE2、5-8F和正常鼻咽上皮细胞NP69中CLOCK mRNA在不同时间点表达不同，存在时相性波动。CLOCK mRNA在CNE1、CNE2、5-8F、NP69细胞中的波动周期分别为16、14、22和24 h，其波峰和波谷时间分别为ZT10：40和ZT18：40、ZT10和ZT3、ZT14：30和ZT3：30、ZT12：39和ZT0：39。鼻咽癌组织中CLOCK mRNA和蛋白表达水平(分别为0.37±0.20和0.20±0.26)均低于鼻咽慢性炎症组织(分别为1.00±0.00和0.51±0.41，均 P<0.05)。CLOCK蛋白高表达组(CLOCK蛋白表达水平≥0.178)患者1、3、5年生存率分别为96.2%、92.1%和80.1%，高于低表达组(CLOCK蛋白表达水平<0.178，分别为92.9%、78.6%和57.1%， P＝0.009)。CLOCK蛋白高表达组患者1、3、5年无进展生存率分别为96.2%、87.8%和87.7%，高于低表达组(分别为92.7%、82.2%和70.8%， P＝0.105)。CLOCK蛋白高表达组患者1、3、5年无复发生存率(分别为100.0%、95.7%和95.7%)与低表达组(分别为100.0%、96.9%和90.0%)比较，差异无统计学意义( P＝0.514)。CLOCK蛋白高表达组1、3、5年无远转转移生存率(分别为96.2%、92.0%和92.0%)与低表达组(分别为92.7%、82.2%和79.3%)比较，差异无统计学意义( P＝0.136)。CLOCK蛋白表达和T分期为总生存的独立影响因素(均 P<0.05)。 结论:鼻咽癌细胞及鼻咽癌组织中的CLCOK基因均为低表达，时钟基因CLOCK在鼻咽癌细胞与正常鼻咽上皮细胞中均呈节律性表达；相比于正常鼻咽上皮细胞，鼻咽癌细胞的波动周期均缩短，CLOCK蛋白高表达组的总生存情况优于低表达患者，CLOCK蛋白的表达是影响总生存的独立影响因素，CLOCK基因在鼻咽癌中可能是一个潜在的抑癌基因。

变应性鼻炎、支气管哮喘等呼吸道过敏性疾病呈现24 h波动特点，与生物钟的调控密切相关。经典免疫细胞如树突状细胞、T细胞、肥大细胞（MC）、嗜酸性粒细胞等，可周期性表达多种时钟基因Clock、Bmal1、Per、Rev-erbα，参与IgE介导的呼吸道过敏性疾病的昼夜节律性发作。在现代社会中，机体内在生物钟与外界生物钟“失同步”产生的生物节律紊乱，有可能加重呼吸道过敏性疾病的发展进程。药理性上调MC中Per2基因或重设内外时钟节律活动，可以“迟滞”呼吸道过敏性疾病的时相反应，从而抑制其症状发作。本文重点介绍生物钟调控呼吸道过敏性疾病的作用机制和临床新进展，以期为呼吸道过敏性疾病的“时间生物学疗法”提供科学依据和理论参考。

目的:构建适用于评估和校准人类生物学年龄的表观遗传学时钟模型。方法:于2019年7月1日至11月30日从广西壮族自治区长寿队列选取186名研究对象，于2020年10月1日至12月31日从解放军总医院第七医学中心体检人群选取124名研究对象。采用自制问卷收集人口学特征、家族疾病史等资料，通过体格检查测量对象的心率和血压，采集空腹外周静脉血，分别检测空腹血糖（FBG）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）和端粒长度，采用靶向甲基化位点测序检测EDARADD cg09809672、IPO8 cg19722847、NHLRC1 cg22736354、P2RX6 cg05442902和SCGN cg06493994基因位点的甲基化水平。排除DNA甲基化和端粒长度检测质量控制不合格的54名对象，最终对256名对象资料进行分析。分析不同年龄段甲基化水平变化情况，采用多重线性回归法构建生物学年龄预测模型，采用Kendal秩相关分析评价年龄差值［即（公历年龄-生物学年龄）］与端粒长度的相关性，比较各年龄组不同年龄差值对象的健康相关指标。结果:对象年龄的 M（ Q1， Q3）为67（51，91）岁，其中女性166名（64.84%）。随年龄增加，基因位点甲基化水平分别呈下降（EDARADD cg09809672、IPO8 cg19722847和P2RX6 cg05442902）和上升趋势（NHLRC1 cg22736354和SCGN cg06493994）（均 P<0.05）。所构建的生物学年龄预测模型为： Y=-53.121×EDARADD cg09809672-137.564×IPO8 cg19722847+141.040×NHLRC1 cg22736354-67.893×P2RX6 cg05442902+149.547×SCGN cg06493994+4.592×sex+64.185（ R2=0.86， P<0.001），式中 Y为生物学年龄，方程各项依次为5个基因位点甲基化水平、性别（男性=1，女性=2）和截距。年龄差值与端粒长度Kendall秩相关系数为0.731（ P<0.001）。与年龄差值<0的对象相比，年龄差值≥0的对象未成年期收缩压较高［分别为（88.50±8.89）和（109.83±9.48）mmHg，1 mmHg=0.133 kPa］，青壮年期TC较低［分别为（5.48±0.23）和（3.98±0.54）mmol/L］，TG较低［分别为（3.51±0.32）和（3.41±0.20）mmol/L］，中年期FBG较低［分别为（6.17±0.67）和（5.37±0.79）mmol/L］，高龄老年期舒张压较高［分别为（76.99±6.78）和（83.97±9.36）mmHg］（均 P<0.05）。 结论:所构建的表观遗传学时钟模型可用于评估和校准人类生物学年龄。

肺癌是全球发病率和死亡率最高的恶性肿瘤之一，严重危害人类的健康。本文对2022年1月1日至12月10日国内外肺癌流行病学领域的研究进展进行综述。研究发现，随着肺癌病因学研究的深入和精准医学的开展，全球肺癌的发病率和死亡率得到了一定程度的控制；大规模人群队列和生物银行的建设推动了肺癌的病因学研究，阐明肺癌发病与吸烟、空气污染、慢性病共病、饮食和生活习惯等因素的关联对肺癌一级预防策略的制定具有积极意义；高通量组学检测技术的发展推动了罕见胚系变异、嵌合基因组变异、“表观时钟”、循环细胞游离DNA（cfDNA）甲基化和血浆代谢物等新型生物标志物的发现，有助于优化肺癌个体化风险评估模型和提高肺癌早期筛查效果；深度学习等人工智能算法可揭示影像组学特征与临床诊疗数据之间的深层关系，提升肺癌的筛查效能。上述研究发现为肺癌精准防治工作的有效开展提供了技术支撑和理论依据。

目的:探讨大骨节病和骨性关节炎的软骨细胞是否存在过早衰老。方法:收集大骨节病、骨性关节炎和对照组的膝关节软骨样本各5例，样本均来源于西安交通大学第二附属医院。提取膝关节软骨样本DNA，采用Illumina Infinium HumanMethylation450 BeadChip芯片技术对其进行DNA甲基化分析。同时，基于全基因组甲基化数据，利用线上DNA甲基化衰老时钟计算器（https：//dnamage.genetics.ucla.edu/home）计算样本的DNA甲基化年龄，并与实际年龄进行比较。结果:在大骨节病组与对照组的比较中，发现1 212个差异甲基化CpG位点，包括497个高甲基化CpG位点和715个低甲基化CpG位点，分别对应264个高甲基化基因和368个低甲基化基因；在骨性关节炎组与对照组的比较中，发现656个差异甲基化CpG位点，包括343个高甲基化CpG位点和313个低甲基化CpG位点，分别对应177个高甲基化基因和174个低甲基化基因。在上述比较中，检测到367个重叠CpG位点（对应182个基因），这些位点在大骨节病组与对照组以及骨性关节炎组与对照组的比较中均存在差异甲基化表达。DNA甲基化衰老时钟结果表明，大骨节病、骨性关节炎以及对照组DNA甲基化年龄与实际年龄的平均年龄加速度差异分别为2.549、0.017、- 5.364岁，大骨节病组和骨性关节炎组DNA甲基化年龄均大于实际年龄。结论:大骨节病和骨性关节炎的软骨细胞均存在过早衰老。

目的:探索可能影响肾脏衰老的相关基因，并验证时钟基因 Arntl在衰老肾脏中的表达变化。 方法:通过全转录组测序鉴定C57BL/6雄性24月龄小鼠（衰老组）和3月龄小鼠（年轻组）的差异表达基因，并通过生物信息学方法分析其所富集的生物学通路及关键蛋白。应用实时荧光定量PCR和Western印迹验证Arntl的mRNA及蛋白表达量。结果:（1）全转录组测序结果显示在C57BL/6衰老组小鼠及年轻组小鼠中共筛选出119个显著差异表达基因。差异表达基因主要富集于节律过程、昼夜节律、基因表达的昼夜调控等生物学过程（均 P<0.001）。蛋白质互作网络分析结果显示，Nfil3、Hspa8、Arntl、Hlf、Rorc、Per3、Npas2等是差异表达基因中的关键蛋白。时钟基因 Arntl、 Nfil3、 Npas2、 Per3在衰老组及年轻组小鼠之间的mRNA表达差异（均 P<0.05）与测序结果一致。（2）相较于C57BL/6年轻组小鼠和SAMR1快速老化小鼠，Arntl蛋白表达量在衰老组小鼠和SAMP8快速老化小鼠肾脏组织中均有下降趋势。 结论:时钟基因及其参与的昼夜节律生物学通路可能在肾脏衰老过程中发挥重要作用。Arntl在衰老肾脏中表达量有下降趋势。

帕金森病是中老年人常见的神经性退行性疾病，证据表明帕金森病患者存在多种生物节律紊乱相关症状，但其机制以及病理生理过程仍不明确。生物节律受到体内外环境的共同调节，通过亮光疗法、褪黑素的应用对生物节律系统进行干预可能成为未来治疗帕金森病的潜在治疗手段。本文主要从帕金森病临床表现中生物节律相关参数异常变化的现象，到帕金森病生物节律可能的发生机制进行文献复习和综述，为进一步探索生物节律在帕金森病治疗中的意义提供依据。

目的:比较分析5种甲基化年龄加速指标与生活方式和心血管代谢因素间的相关性。方法:基于中国慢性病前瞻性研究中有基线外周血全基因组甲基化检测数据的研究对象980人，计算Horvath时钟、Hannum时钟、DNAm PhenoAge、GrimAge和Li时钟5种甲基化年龄。根据甲基化年龄对实足年龄回归的残差值计算甲基化年龄加速。研究的生活方式因素包括吸烟、饮酒、饮食习惯、体力活动、经BMI和腰围联合定义的体型。心血管代谢因素包括血压、血糖和TC。利用一般线性模型分析生活方式和心血管代谢因素与各甲基化年龄加速指标的相关性［ β值（95% CI）］。 结果:GrimAge加速指标与吸烟、饮酒、体力活动水平及BMI存在关联。与不吸烟、不饮酒或BMI为18.5~23.9 kg/m 2 者相比，吸烟者（每天吸烟1~14、15~24、≥25支者对应的 β值依次为0.71（95% CI：0.57~0.86）、0.88（95% CI：0.73~1.03）、0.99（95% CI：0.81~1.18）、重度饮酒者［每日纯乙醇量≥60 g：0.33（95% CI：0.11~0.55）］、BMI<18.5 kg/m 2者［0.23（95% CI：0.03~0.43）］表现为加速衰老；与体力活动水平低者相比，中、较高、高体力活动者表现为减速衰老［ β值依次为-0.14（95% CI：-0.27~-0.00）、-0.12（95% CI：-0.26~0.02）、-0.13（95% CI：-0.26~0.01）］。随着健康生活方式数量的增加，GrimAge加速指标呈现下降趋势（ P<0.001）；与具有0~1个健康生活方式者相比，具有2、3、或4~5个健康生活方式者的 β值依次为-0.30（95% CI：-0.47~-0.12）、-0.47（95% CI：-0.65~-0.30）、-0.72（95% CI：-0.90~-0.53）。其他4个指标与多数生活方式因素不存在有统计学显著性的关联。5种甲基化年龄加速指标与血压、血糖和TC均不存在关联。 结论:生活方式不健康者表现出表观遗传年龄的加速，即DNA甲基化预测年龄老于实足年龄。

目的:观察生物钟基因在非酒精性脂肪肝大鼠发病中的作用以及利拉鲁肽的影响。方法:构建SD大鼠(湖南斯莱克景达实验动物有限公司)非酒精性脂肪肝模型，分为对照组、脂肪肝模型组、利拉鲁肽干预组；于给药后的第2周和第4周进行取样，每次取样按各时点(0、12、24 h)分成3组；苏木精-伊红(HE)染色观察肝脏变化；检测肝脏组织甘油三酯含量；检测各组时钟昼夜调节因子(Clock)、隐花色素抑制因子(Cry1)、Fas的相对表达及Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)的相对表达。多组资料间的比较采用单因素方差分析(ANOVA)，两两比较采用LSD法。结果:高脂饮食2周后大鼠肝细胞中出现大量脂滴，利拉鲁肽可减少脂滴；模型组肝脏甘油三酯含量升高，利拉鲁肽干预后可使其含量下降；模型组肝脏Clock基因表达最高为第2周12 h，为3.094 7±0.484 8，经干预后下降至1.578 6±0.368 8( F＝28.385， P<0.05)，Cry1基因在第2周24 h表达最高，为5.508 4±0.851 8，而干预后进一步升高，达20.775 7±1.939 1( F＝215.516， P<0.05)，Fas表达第2周24 h在3.288 1±0.299 4，干预组有所下降，为1.501 9±0.281 2( F＝77.128， P<0.05)。高脂饮食诱导大鼠肝脏中Clock和Cry1显著升高，增大Clock和Cry1以及Fas节律变化振幅范围，利拉鲁肽可抑制该变化。高脂饮食诱导大鼠肝脏Wnt/β-catenin蛋白高表达，可被利拉鲁肽抑制。 结论:利拉鲁肽或可通过调控生物钟基因以及Wnt/β-catenin信号通路来抑制非酒精性脂肪肝进展。

患儿男，1个月8天。因外院发现早产儿视网膜病变（ROP）1 d，于2019年12月14日到济南市儿童医院眼科就诊。患儿为35 +6周早产儿，第三胎第三产。母亲因羊水少、胎儿宫内发育受限在当地医院行剖宫产，患儿出生后有短暂吸氧史（约30 min），出生体重1 750 g，矫正胎龄41 +2周。其父母及两个姐姐均身体健康。全身及神经系统检查无明显异常。眼部检查：双眼眼前节无明显异常。眼底检查：双眼视盘颜色淡红、边界清楚，后极部视网膜动脉无明显纡曲；周边视网膜360°可见视网膜白色条带状渗出，且双眼颞侧渗出明显增宽，并可见无血管区。右眼颞上和颞下视网膜静脉扩张明显，9点时钟位黄斑区颞侧可见纤维增生和点片状视网膜出血，纤维增生深入玻璃体腔，局部牵拉视网膜浅脱离；左眼9点和3点时钟位可见大片视网膜出血（ 图1）。实验室检查：血常规测得红细胞2.60×10 12个/L（正常值4.30~5.80× 10 12个/L），轻度贫血；白细胞和血小板计数均正常；血凝五项及生物化学检测结果正常。颅脑磁共振成像检查，双侧额颞叶部分髓质呈较长T2信号；髓鞘化不足1月龄。诊断：双眼ROP。