目的:通过生物信息挖掘技术对前列腺癌基因表达谱进行分析后得到差异基因及所涉及生物学信号通路。方法:使用生物信息挖掘技术对GSE46602、GSE55945、GSE69223基因表达谱芯片数据集进行分析后取交集得到差异表达基因(DEGs)，后使用DAVID数据库对DEGs进行基因本体论(GO)及生物信号通路(KEGG)富集分析，使用STRING数据库及Cytoscape的cytoHubba应用程序得到蛋白互作(PPI)网络及关键基因并进行排序，最后将所得关键基因在TCGA数据库中进行验证。结果:通过对GEO数据库前列腺癌的3个数据集使用R软件等工具进行分析，总共发现了225个DEGs，其中55个表达上调、170个表达下调。通过GO功能富集分析及KEGG通路分析发现这些基因富集在细胞迁移调节和血管生成等功能中，以及磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶(PI3K/Akt)和p53等信号上。构建DEGs的PPI互作网络并通过cytoHubba筛选出最重要的10个基因并与TCGA数据库数据进行对比，发现碱性螺旋环螺旋转录因子1(TWIST1)、Snail家族转录抑制因子2(SNAI2)、血管内皮生长因子受体2(KDR)等在前列腺癌发生发展中起重要作用的关键基因。结论:通过深层次的生物信息挖掘或许可以让人们进一步了解前列腺癌的发生发展，为将来前列腺癌的诊断及治疗提供新的靶点。

目的:探讨沉默细胞分裂周期相关基因(NUF2)对食管鳞癌细胞增殖及转移能力的影响以及其相关的分子机制。方法:回顾性分析癌症基因组图谱(TCGA)数据库中食管癌患者原发病灶及其癌旁组织的NUF2基因表达差异，采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法分析食管鳞癌细胞系的NUF2基因表达，设计靶向NUF2基因的沉默RNA(siRNA)序列，构建慢病毒载体，Celigo法、噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖，荧光激活细胞分选法(FACS)法检测细胞凋亡，Transwell方法检测细胞迁移和侵袭能力，蛋白质印迹法(Western blot)检测蛋白表达，慢病毒转染过表达变化最明显的五个下游基因，再检测细胞增殖、迁移和侵袭能力的变化。组间比较采用 t检验。 结果:MTT法表明，沉默NUF2基因后细胞增殖低于对照组(0.33±0.01比0.55±0.07， t＝25.90， P<0.01)，Transwell法提示沉默NUF2基因后细胞迁移低于对照组(KYSE-150：9.00±1.67比36.00±4.84， t＝35.53， P<0.01；TE-1：52±1.86比246.00±9.79， t＝45.73， P<0.01)，沉默NUF2的食管癌细胞中、过表达SNAI1基因后，增殖、迁移和侵袭能力又有所恢复。 结论:NUF2基因在食管鳞癌中高表达，沉默其表达能够通过下调SNAI1基因来抑制细胞增殖、迁移和侵袭。

目的:筛选Ⅰ型神经纤维瘤病(NF1)中参与神经性纤维瘤发生和恶变的调控基因。方法:从GEO公开数据库获取NF1相关的基因表达数据集(GSE14038)和甲基化表达数据集(E-GEOD21714), 其中GSE14038包含正常对照组10例、良性神经纤维瘤组48例和恶性外周神经鞘膜瘤组19例，E-GEOD21714包含正常对照组6例、良性神经纤维瘤组10例、恶性外周神经鞘膜组10例。对不同样本的基因表达进行分析，寻找差异表达的基因，并使用基因注释(GO)、通路富集分析和蛋白质互作分析(PPI)工具对数据进行处理。结果:在结合比对了数据库中的差异表达基因和甲基化差异后，与正常对照组相比，良性神经性纤维瘤组中有14个基因可能为神经纤维瘤发生相关调控基因，恶性外周神经鞘膜瘤组中有105个基因可能为恶变相关调控基因。GO分析结果显示，良性神经性纤维瘤组差异基因主要功能为以DNA为模板的转录正向调控、转录因子结合，并主要定位于纺锤体微管，恶性神经性纤维瘤组差异基因主要功能为细胞增殖调控、特定DNA序列的结合，并主要定位于神经源细胞胞体。通路富集分析显示，良性神经性纤维瘤组差异基因主要富集于鞘脂代谢，恶性神经性纤维瘤组差异基因主要富集于轴索导引。针对差异基因的PPI分析示编码蛋白主要位于干细胞发育，其中 PAX3、 PTGS2、 SNAI2、 MBP和 NOG是排名前5的关联节点基因。 结论:PAX3可能与神经纤维瘤的发生有关，而 PTGS2、SNAI2、MBP和 NOG可能与恶性外周神经鞘膜瘤的恶变有关。

目的:探讨小分子糖蛋白丝甘蛋白聚糖(SRGN)在非小细胞肺癌(NSCLC)化疗耐药中的作用。方法:在非小细胞肺癌H1299细胞株中，采用shRNA技术干扰SRGN的表达并建立稳定干扰细胞株，并用Western blot技术和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)验证敲低效率；采用MTS方法检测稳定敲低SRGN的肺癌细胞株对化疗药物顺铂和奥沙利铂的药物敏感性；采用ELISA、Western blot及qRT-PCR检测转化生长因子β(TGFβ)对SRGN表达的影响，以及SRGN介导TGFβ细胞外分泌的作用；采用Western blot检测SRGN对上皮间质转化(EMT)相关分子的影响，以及采用在线数据生物信息学分析SRGN与EMT相关分子表达的相关性；此外采用在线预后分析软件(kmplot)分析SRGN、TGFβ与肺癌患者预后的相关性。结果:与对照组比较，敲低SRGN可明显增强NSCLC细胞对化疗药物顺铂( P＝0.032 7)和奥沙利铂( P＝0.014 2)的敏感性；TGFβ可促进NSCLC细胞中SRGN的表达，并且SRGN可促进TGFβ的细胞外分泌；SRGN可通过Snail1促进NSCLC细胞的EMT改变，分析TCGA数据库，发现在NSCLC癌组织标本中SRGN表达与CDH1(编码Ecadherin蛋白)表达呈负相关( r＝－0.25)，而与SNAI1表达呈正相关( r＝0.37)；SRGN低表达的NSCLC患者相比高表达的患者总生存期明显延长( P＝0.007 7，平均中位生存时间延长15.9个月)，而同时SRGN与TGFβ1或TGFβ2低表达的患者中位生存时间分别延长73个月或42.8个月。 结论:SRGN与TGFβ1相互作用，促进肺癌细胞EMT改变，进而促进肺癌细胞的化疗耐药。SRGN与TGFβ1或TGFβ2同时低表达可显著延长非小细胞肺癌患者总生存期。

目的:研究抗纤维化四肽N-乙酰基-丝氨酰-天冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸（Ac-SDKP）对矽肺大鼠纤维化肺组织中磷酸化热休克蛋白27（P-HSP27）及锌指家族核转录因子1（SNAI1）表达的调控，以探讨Ac-SDKP抗矽肺纤维化作用。方法:于2014年12月，采用一次性支气管灌注二氧化硅（SiO 2）粉尘的方法制备大鼠矽肺动物模型，选取80只SPF级健康成年Wistar大鼠，根据随机数字表法将大鼠分为8组，每组10只。模型对照4周组（饲养4周）、模型对照8周组（饲养8周）：支气管灌注生理盐水1.0 ml/只；矽肺模型4周组（饲养4周）、矽肺模型8周组（饲养8周）：支气管灌注50 mg/ml的SiO 2混悬液1.0 ml/只；单独Ac-SDKP给药4周组（饲养4周）、单独Ac-SDKP给药8周组（饲养8周）：Ac-SDKP 800 μg·kg -1·d -1腹腔泵给药；Ac-SDKP预防治疗组：Ac-SDKP 800 μg·kg -1·d -1给药48 h后，支气管灌注SiO 2混悬液1.0 ml/只，饲养8周；Ac-SDKP抗纤维化治疗组：支气管灌注SiO 2混悬液1.0 ml/只4周后，给予Ac-SDKP 800 μg·kg -1·d -1治疗4周。蛋白免疫印迹（Western blotting）检测各组P-HSP27、SNAI1、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA），以及Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白的表达，免疫组织化学技术检测P-HSP27和SNAI1的表达，激光共聚焦显微镜检测P-HSP27和α-SMA共定位表达。 结果:与模型对照组比较，矽肺模型组大鼠矽肺纤维化区域P-HSP27、SNAI1、α-SMA、Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白表达增强，差异均有统计学意义（ P<0.05）。给予Ac-SDKP干预后，与矽肺模型8周组比较，Ac-SDKP预防和抗纤维化治疗组大鼠P-HSP27、SNAI1、α-SMAⅠ型和Ⅲ型胶原蛋白表达明显降低，差异均有统计学意义（ P<0.05）。而单独Ac-SDKP给药组与模型对照组P-HSP27、SNAI1、α-SMA、Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白表达无明显变化，差异均无统计学意义（ P>0.05）。激光共聚焦结果显示，矽肺模型组大鼠肺组织表达P-HSP27和α-SMA的阳性细胞多于模型对照组；与矽肺模型组比较，Ac-SDKP预防和抗纤维化治疗组表达P-HSP27和α-SMA的阳性细胞减少；与模型对照8周组比较，矽肺模型8周组结节中有部分P-HSP27和α-SMA表达的双阳性细胞。 结论:Ac-SDKP可能通过调节P-HSP27/SNAI1通路发挥抗矽肺纤维化的作用。

目的:分析和验证盐诱导激酶2 (SIK2)在三阴性乳腺癌(TNBC)中的表达并探究其对TNBC细胞迁移侵袭能力的影响及机制。方法:利用Ualcan在线分析工具探索SIK2在TNBC中表达情况，结合8对TNBC组织标本运用荧光定量PCR技术进行验证。构建SIK2重组过表达质粒(GV703-SIK2)并包装重组慢病毒。分别感染TNBC细胞株MDA-MB-231和HCC1937，经嘌呤霉素筛选构建SIK2稳定过表达细胞株和阴性对照细胞株。用蛋白质印迹法(Western blot)检测转染后TNBC细胞株中SIK2表达水平，通过划痕实验和Transwell小室实验观察SIK2过表达对TNBC细胞迁移侵袭能力的影响；采用Western blot分析SIK2过表达后对上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、锌指转录因子SNAI1蛋白(Snail)、锌指转录因子SNAI2(Slug)、磷酸化SMAD家族成员2(p-SMAD2)蛋白、磷酸化SMAD家族成员3(p-SMAD3)蛋白表达水平的影响。组间比较采用 t检验。 结果:SIK2 mRNA在TNBC组织中表达明显低于其配对癌旁组织( t＝2.199， P<0.05)。SIK2过表达组MDA-MB-231、HCC1937细胞SIK2蛋白表达水平(2.105±0.148、0.942±0.204)明显高于其对照组(0.053±0.007、0.024±0.007)，差异有统计学意义( t＝24.030、7.792， P<0.01)。划痕实验结果显示SIK2过表达组MDA-MB-231、HCC1937细胞划痕愈合率[(61.700±5.126)%、(58.360±14.380)%]均明显低于其对照组[(87.870±1.097)%、(91.410±7.486)%]，差异有统计学意义( t＝8.645、3.530， P<0.05)。Transwell小室实验结果显示SIK2过表达组MDA-MB-231、HCC1937细胞穿过小室数量[(111.700±15.310)、(101.700±14.220)个]明显低于其对照组[(183.000±19.970)、(187.000±15.100)个]，差异有统计学意义( t＝4.909、7.125， P<0.01)。SIK2过表达组E-cadherin表达水平(0.754±0.186)明显高于对照组(0.298±0.066)，差异有统计学意义( t＝3.995， P<0.05)；而Vimentin、Snail、Slug、p-SMAD2蛋白、p-SMAD3蛋白的表达水平(0.595±0.144、0.429±0.179、0.609±0.125、0.198±0.090、0.659±0.088)均明显低于对照组(1.112±0.201、0.959±0.198、0.920±0.140、0.497±0.059、1.248±0.148)，差异有统计学意义( t＝3.624、3.439、2.872、4.804、5.926， P<0.05)。 结论:SIK2在TNBC中呈低表达，推测SIK2是通过调控转化生长因子-β(TGF-β)/上皮-间充质转化(EMT)通路抑制TNBC细胞的EMT、迁移和侵袭过程。

目的:研究三氧化二钐（Sm 2O 3）微粒对大鼠肺组织的影响，并与相同剂量的二氧化硅（SiO 2）微粒比较，以期寻找尘肺病的早期筛检参考指标。 方法:于2018年10月，将72只SPF级健康雄性大鼠以完全随机分组法分为对照组、SiO 2组、Sm 2O 3组，采用一次性非暴露式气管灌注法分别向各组大鼠肺部灌注2.0 ml/kg生理盐水和280 mg/kg的SiO 2、Sm 2O 3微粒悬浮液。用苏木精-伊红（HE）染色法染色大鼠肺脏，观察大鼠肺组织病理改变。采用酶联免疫吸附法检测大鼠血清中SNAIL同源物1（SNAI1）、SNAIL同源物2（SNAI2）、热休克蛋白-27（HSP-27）浓度。取染尘56 d Sm 2O 3组、对照组大鼠肺组织0.5 g进行长链非编码RNA（lncRNA）、环状RNA（circRNA）筛检。 结果:染尘7 d时，SiO 2组和Sm 2O 3组大鼠肺泡排列紊乱，围绕支气管壁可见淋巴组织聚集增生；14 d时SiO 2组有大量淋巴细胞浸润，Sm 2O 3组分散存在少量含Sm 2O 3的巨噬细胞及纤维化结节；28 d时SiO 2组出现少量淋巴细胞浸润，Sm 2O 3组部分区域可见纤维化结节；56 d时SiO 2组有少量纤维母细胞增生，Sm 2O 3组可见大量含灰黑色物质的纤维化结节。不同染尘时间各组大鼠肺脏系数差异均无统计学意义（ P>0.05）。染尘14 d时SiO 2组大鼠血清中SNAI1、SNAI2含量低于对照组，Sm 2O 3组血清中SNAI2含量低于对照组，但SNAI1、SNAI2含量高于SiO 2组（ P<0.05）；染尘28 d时SiO 2组HSP-27含量低于对照组（ P<0.05）。染尘56 d后，Sm 2O 3组HSP-27含量低于对照组（ P<0.05）。染尘56 d后，Sm 2O 3组lncRNA上调148个、下调725个，circRNA上调16个、下调153个。 结论:Sm 2O 3可致大鼠肺损伤，早期即可检测到SNAI2含量的改变，可以作为尘肺病的早期筛检参考指标。大鼠染尘56 d后lncRNA、circRNA表达有差异，可能与尘肺病的发病机制有关。

目的:探讨老年非小细胞肺癌组织缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor 1α，HIF-1α)/上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)通路相关蛋白表达及其意义。方法:回顾性分析2017年1月至2020年5月连云港市第一人民医院收治的450例老年非小细胞肺癌患者的临床资料，取癌组织和远癌组织。采用免疫组化法检测HIF-1α、波形蛋白(Vimentin)、锌指转录因子1(Snai1)、上皮钙黏附蛋白(E-cadherin)、β-连环素(β-catenin)蛋白表达。对比癌组织和远癌组织HIF-1α/EMT通路相关蛋白阳性表达率及不同临床病理特征患者癌组织HIF-1α/EMT通路相关蛋白阳性表达率。随访并统计1年生存率，采用COX回归分析癌组织HIF-1α/EMT通路相关蛋白阳性表达与1年生存情况的关系。结果:癌组织HIF-1α、Vimentin、Snai1蛋白阳性表达率均显著高于远癌组织，E-cadherin、β-catenin蛋白阳性表达率均显著低于远癌组织，差异均有统计学意义[%：(55.33比8.67)，(57.33比13.33)，(48.00比9.33)，(26.00比85.33)，(51.33比75.33)， χ2＝184.48、171.95、148.41、210.29、45.21， P值均<0.001]。不同临床病理特征中临床肿瘤淋巴结转移(tumor node metastasis，TNM) Ⅲ~Ⅳ期患者癌组织HIF-1α、Vimentin、Snai1蛋白阳性表达率均显著高于TNMⅠ~Ⅱ期患者癌组织，E-cadherin、β-catenin蛋白阳性表达率均显著低于TNM Ⅰ~Ⅱ期患者癌组织，差异均有统计学意义[%：(84.62比50.36)，(92.31比54.01)，(84.62比44.53)，(7.69比27.74)，(30.76比53.28)， χ2＝19.26、23.63、25.76、8.41、7.53， P值均<0.05]。随访1年，老年非小细胞肺癌患者生存370例，1年生存率为82.22%(370/450)，死亡组患者低/未分化、TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、HIF-1α、E-cadherin、Vimentin、β-catenin、Snai1蛋白阳性表达的占比均显著高于生存组，差异有统计学意义[%：(25.00比8.38)，(22.50比6.49)，(72.50比50.00)，(38.75比23.24)，(77.50比52.97)，(68.75比47.57)，(63.75比44.59)， χ2＝18.09、19.93、13.41、8.22、16.18、11.81、9.67， P值均<0.05]。单因素及COX多因素分析显示，HIF-1α、E-cadherin、Vimentin、β-catenin、Snai1蛋白阳性表达均是影响老年非小细胞肺癌患者1年生存的独立危险因素( P值均<0.05)。 结论:老年非小细胞肺癌患者癌组织HIF-1α、Vimentin、Snai1蛋白阳性表达率高于远癌组织，E-cadherin、β-catenin蛋白阳性表达率低于远癌组织，且HIF-1α/EMT通路相关蛋白阳性表达与老年非小细胞肺癌患者1年生存情况有关。

Background::Ovarian cancer is one of the most widespread malignant diseases of the female reproductive system worldwide. The plurality of ovarian cancer is diagnosed with metastasis in the abdominal cavity. Epithelial-mesenchymal transition (EMT) exerts a vital role in tumor cell metastasis. However, it remains unclear whether long non-coding RNA (lncRNA) are implicated in EMT and influence ovarian cancer cell invasion and metastasis. This study was designed to investigate the impacts of lncRNA AC005224.4 on ovarian cancer.Methods::LncRNA AC005224.4, miR-140-3p, and snail family transcriptional repressor 2 ( SNAI2) expression levels in ovarian cancer and normal ovarian tissues were determined using real-time quantitative polymerase chain reaction (qRT-PCR). Cell Counting Kit-8 (CCK-8) and Transwell (migration and invasion) assays were conducted to measure SKOV3 and CAOV-3 cell proliferation and metastasis. E-cadherin, N-cadherin, Snail, and Vimentin contents were detected using Western blot. Nude mouse xenograft assay was utilized to validate AC005224.4 effects in vivo. Dual-luciferase reporter gene assay confirmed the targeted relationship between miR-140-3p and AC005224.4 or SNAI2. Results::AC005224.4 and SNAI2 upregulation and miR-140-3p downregulation were observed in ovarian cancer tissues and cells. Silencing of AC005224.4 observably moderated SKOV3 and CAOV-3 cell proliferation, migration, invasion, and EMT process in vitro and impaired the tumorigenesis in vivo. miR-140-3p was a target of AC005224.4 and its reduced expression level was mediated by AC005224.4. miR-140-3p mimics decreased the proliferation, migration, and invasion of ovarian cancer cells. SNAI2 was identified as a novel target of miR-140-3p and its expression level was promoted by either AC005224.4 overexpression or miR-140-3p knockdown. Overexpression of SNAI2 also facilitated ovarian cancer cell viability and metastasis. Conclusion::AC005224.4 was confirmed as an oncogene via sponging miR-140-3p and promoted SNAI2 expression, contributing to better understanding of ovarian cancer pathogenesis and shedding light on exploiting the novel lncRNA-directed therapy against ovarian cancer.

目的:探讨同源结构域相互作用蛋白激酶2(HIPK2)在人脑胶质瘤中的表达及前神经元－间质亚型转化(PMT)中的作用。方法:分析美国国立生物信息技术中心基因表达数据库(NCBI-GEO：GSE16011)中HIPK2 mRNA在低级别和高级别胶质瘤中的表达。基于GSE16011数据库进一步分析HIPK2 mRNA在前神经元型、间质型和经典型胶质瘤样本中的表达。根据HIPK2 mRNA的表达量将胶质瘤患者分为HIPK2低表达组和高表达组，并绘制Kaplan-Meier生存曲线，采用log-rank检验比较HIPK2低表达组与高表达组患者的生存差异。体外实验以人星形胶质细胞(NHA)为对照，通过蛋白质免疫印迹法(WB)验证HIPK2蛋白在胶质瘤细胞株H4、A172、U87和U251中的表达。在U87细胞中采用携带HIPK2 cDNA序列的过表达慢病毒载体构建过表达HIPK2的细胞株，以空载慢病毒载体构建对照细胞株。在H4细胞中采用siRNA转染敲低HIPK2的表达。通过划痕实验和Transwell实验探讨HIPK2表达改变对胶质瘤细胞迁移和侵袭能力的影响。以WB实验检测HIPK2表达改变对FN1、CD44和SNAI2蛋白表达的影响。采用Pearson相关分析探讨HIPK2与FN1、CD44和SNAI2表达的相关性。结果:HIPK2 mRNA在高级别胶质瘤中的表达水平低于低级别胶质瘤( t＝6.86， P<0.001)，且HIPK2 mRNA在间质型和经典型胶质瘤中的表达水平均低于前神经元型胶质瘤(均 P<0.001)。对GSE16011数据库数据的分析显示，HIPK2高表达组患者的总体生存期长于低表达组[分别为(40.8±3.9)个月和(24.9±3.2)个月， P<0.001]。WB结果显示，与NHA比较，H4、A172、U87和U251细胞中HIPK2蛋白的表达水平均降低(均 P<0.05)。U87细胞HIPK2过表达组HIPK2蛋白的表达较对照组显著上调( t＝24.88， P<0.05)，H4细胞HIPK2敲低组的HIPK2蛋白表达水平较对照组明显下调( t＝26.72， P<0.001)。划痕实验结果显示，U87细胞HIPK2过表达组的细胞划痕修复率低于对照组[分别为(18.1±2.0)%和(45.6±4.2)%， t＝10.23， P<0.001]；而H4细胞HIPK2敲低组的细胞划痕修复率高于对照组[分别为(60.5±5.4)%和(37.9±4.0)%， t＝5.83， P＝0.004]。Transwell实验结果显示，U87细胞HIPK2过表达组的穿膜细胞数少于对照组[分别为(92.0±11.9)个和(193.1±16.2)个， t＝8.75， P<0.001]；而H4细胞HIPK2敲低组的穿膜细胞数高于对照组[分别为(204.0±16.9)个和(135.1±15.0)个， t＝5.27， P＝0.006]。WB实验结果表明，U87细胞HIPK2过表达组细胞中FN1、CD44和SNAI2蛋白的表达水平均低于对照组(均 P<0.001)；H4细胞HIPK2敲低组中FN1、CD44和SNAI2蛋白的表达水平均高于对照组(均 P<0.001)。Pearson相关分析结果显示，胶质瘤中HIPK2的表达与FN1、CD44和SNAI2表达均呈负相关(均 P<0.05)。 结论:HIPK2在高级别胶质瘤和间质型胶质瘤中呈低表达，低表达的HIPK2可能通过影响胶质瘤PMT促进胶质瘤细胞的迁移和侵袭。