目的:探讨SOC通道的相关基因STIM1 和STIM2 在人循环纤维细胞中的表达模式鉴定及功能.方法:比较STIM1 和STIM2 在人各部位的表达模式.采集人外周静脉血,分离出单个核细胞,体外培养分化为循环纤维细胞.采用RT-PCR以及western blotting检测循环纤维细胞中STIM1 和STIM2 的表达情况.并检测SOC通道促进剂IL-4 和抑制剂SKF-96365 对循环纤维细胞分化的影响及对STIM1 和STIM2 表达的影响.结果:STIM1 和STIM2 在人体组织组成型表达,且STIM1 的表达量均高于STIM2.RT-PCR和western blotting检测显示循环纤维细胞表达STIM1 和STIM2,并且SOC通道促进剂 IL-4 对循环纤维细胞分化成熟具有促进作用,SOC通道抑制剂SKF96365 对循环纤维细胞分化成熟具有抑制作用.结论:人循环纤维细胞中表达STIM1 和STIM2,其中STIM1 可能起主导作用,且人循环纤维细胞中STIM1 和STIM2 的mRNA和蛋白表达水平受IL-4 和SKF的影响.

目的 研究瞬时受体电位通道1(TRPC1)及钙释放激活钙通道调节分子1(Orai1)在人脐静脉内皮细胞(HUVEC)经钙池操纵性钙通道(SOC)和受体操纵性钙通道(ROC)介导的Ca2+内流和一氧化氮(N0)生成中的作用.方法 取2～3代HUVEC进行随机分组,将构建的TRPC1、Orai1干扰质粒(shTRPC1、shOrai1)分别转染入HUVEC,采用real-time PCR和Western blot检测TRPC1、Orai1 mRNA和蛋白的表达及转染抑制效率.将各组细胞分别与钙敏感受体(CAR)激动剂精胺、ROC模拟剂(TPA) +CaR负性变构调节剂Calhex231、蛋白激酶C(PKC)抑制剂Ro31-8220与经典型PKCs和PKCμ抑制剂Go6967孵育后,荧光探针Fura-2/AM及DAF-FM负载方法同步检测[Ca2+]i和NO生成的变化.结果 与对照组比较,shTRPC1组和shOrai1组mRNA表达(抑制率分剐为84.50％、76.10％)和蛋白的表达(抑制率分别为83.98％、71.73％)明显降低(P＜0.05).在4种不同药物作用下,shTRPC1组和shOrai1组[Ca2+]i△ratio值和NO净荧光强度值均明显降低(P＜0.05).结论 TRPC1、Orai1参与了人脐静脉内皮细胞SOC和ROC介导的钙内流和NO生成.

本研究旨在探讨Ca2+感受蛋白经典瞬时感受器电位蛋白1 (canonical transient receptor potential channel 1,TRPCl)与钙释放激活钙通道调节分子1 (calcium release-activated calcium modulator 1,Orail)的相互作用在人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)钙敏感受体(Ca-sensing receptor,CaR)介导的Ca2+内流和一氧化氮(NO)生成中的作用.取2～3代HUVECs,单独或联合用CaR激动剂精胺[Spermine,激活钙库活化的钙通道(store-operated calcium channels,SOC)和受体活化的钙通道(receptor-operated calcium channels,ROC)]、ROC模拟剂12-O-十四烷酰佛波醇-13-乙酸酯(TPA)+CaR负性变构调节剂Calhex231(阻断SOC,激活ROC)、PKC抑制剂Ro31-8220(激活SOC,阻断ROC)以及经典型PKCs和PKCμ抑制剂Go6967(激活SOC,阻断ROC)处理.用免疫荧光技术检测HUVECs中TRPC1和Orai1的蛋白表达、共定位;用免疫共沉淀法检测TRPC1和Orai1之间的相互作用模式;随后用TRPC1和Orai干扰质粒联合转染HUVECs,采用荧光探针同时检测HUVECs中[Ca2+]i和NO生成的变化.结果显示,HUVECs中TRPC1和Orai1蛋白表达共定位于胞膜.与Spermine+Ca2+组相比,Calhex231+TPA+Spermine+Ca2+组、Ro31-8220+Spermine+Ca2+组和Go6976+Spermine+Ca2+组HUVECs中定位于胞浆中的TRPC1、Orai1蛋白表达均显著降低,二者的结合也减少.免疫共沉淀结果显示,Calhex23 1+TPA+Spermine+Ca2+组、Ro31-8220+Spermine+Ca2+组和Go6976+Spermine+Ca2+组TRPC 1/Orai1和Orai 1/TRPC1相对比值百分数均明显低于对照组以及Spermine+Ca2+组(均P＜0.05),表明Orai1和TRPC1相互作用均减弱.联合转染质粒敲低TRPC1和Orai1显著降低Spermine+Ca2+组、Calhex231+TPA+Spermine+Ca2+组、Ro31-8220+Spermine+Ca2+组和Go6976+Spermine+Ca2+组的HUVECs中[Ca2+]i和NO生成.以上结果提示,TRPC1与Orai1以二元复合物的形式激活SOC和ROC,介导Ca2+内流及NO生成.

目的 探究模拟微重力效应下骨细胞钙池操纵Ca2+通道(store-operated calcium channels,SOC)的活性变化以及其可能机制,阐明失重性骨丢失的发生机制.方法 以小鼠骨细胞(MLO-Y4)为对象,分为回转模拟微重力效应组(simulated microgravity,SM)和正常重力组(control,CON).分别旋转培养24、48 h后,激光共聚焦显微镜检测毒胡萝卜素引发细胞内质网钙库耗竭后胞内Ca2+浓度水平,以反映SOC通道的活性;免疫荧光染色法观察膜骨架spectrin和内质网膜蛋白IP3R的分布情况,研究SOC通道功能变化的可能机制.结果 在内质网钙库释放Ca2+时期,24、48 h SM组的胞内Ca2+浓度水平与CON组相比均无显著差异,而在胞外Ca2+经SOC通道内流时期,24hSM组只在前4 min比CON组有显著性下降,48 h SM组在整个时期均比CON组有显著性下降.与CON组相比,SM组膜骨架spectrin向细胞边缘聚集,而ER膜蛋白IP3R则向ER核被膜区域聚集,且48 h组更为显著.结论 模拟微重力效应可抑制骨细胞SOC通道活性.骨细胞膜骨架spectrin以及内质网膜上蛋白IP3R位置分布变化,可能影响SOC通道激活过程中蛋白间的构象耦合,进而降低骨细胞SOC通道的活性.

Rcn2(Reticulocalbin2)是一种普遍存在于哺乳动物细胞中的分泌蛋白,它不仅是细胞维持正常生理功能所必需的,更参与了肿瘤细胞的生长侵袭,并且与动脉粥样硬化易感基因、乳头瘤病毒结合蛋白E6、丝氨酸/苏氨酸激酶40、维生素D受体等生物分子相互作用,在动脉粥样硬化、宫颈癌、维生素D吸收异常等疾病中发挥着重要的调控作用.该文就Rcn2对人乳头瘤病毒、Taipoxin蛇毒摄入突触机制、SOC钙离子通道、EGFR-ERK信号通路、ERK-MAPK信号通路的影响及分子作用机制等方面的最新研究进行概述,总结了Rcn2及其相互作用分子的重要功能,为结直肠癌、肝癌、动脉粥样硬化等疾病的诊断和治疗提供重要的科学依据.

目的 探讨钙调控参与糖尿病小鼠冠状动脉收缩反应性变化的机制.方法 C57BL/6小鼠腹腔注射链脲佐菌素诱导糖尿病模型.通过小血管张力技术,测定收缩剂诱导糖尿病小鼠冠状动脉的张力变化及不同阻断剂对其的影响.结果 冠脉的平滑肌收缩主要由经L-型钙通道内流和肌浆网钙释放的钙离子介导,SOC通道不参与其收缩.5-HT和U46619呈浓度依赖性诱导冠脉收缩,与对照组相比,模型组明显减弱(P<0.01);硝苯地平孵育后,5-HT和U46619诱导冠脉的收缩反应均明显减小(P<0.01),且对模型组的抑制幅度明显低于对照组(P<0.01).在无Ca2+K-H溶液状态下,硝苯地平孵育后,与对照组相比,模型组对不同收缩剂引发的收缩反应性明显减弱(P<0.01).高钾刺激模型组冠脉引起的收缩反应明显低于对照组(P<0.01).结论 糖尿病小鼠冠状动脉对血管收缩剂的反应性明显减弱,与L-型钙通道和肌浆网钙释放功能下调有关.

针对东北稻田长期过度依赖化肥的问题,通过田间定位试验研究有机肥替代部分氮肥对土壤酶活性及酶群生态指数的影响,以期为氮肥减施技术途径提供理论依据.试验设常规施肥(对照,CF)和有机肥替代(MS)两个处理,采用微孔板荧光法测定7种土壤碳、氮、磷转化有关酶活性.结果表明:有机肥替代处理较对照显著增加了有机碳(SOC)和速效磷(AP)含量、团聚体稳定性以及土壤C ∶ N;显著提高了与碳转化有关的α-葡糖苷酶(AG)、β-葡萄糖苷酶(BG)、纤维二糖酶(CBH)、木糖苷酶(XYL)活性和氮转化有关的乙酰氨基葡萄糖苷酶(NAG)活性.酶群生态指数分析结果显示,有机肥替代降低了BG/(NAG+LAP)(LAP:亮氨酸氨基肽酶),表明土壤氮素有效性的相对不足;提高了NAG/LAP,说明有机肥替代促进底物的分解可能相对以真菌通道为主;酶活性均匀度指数没有明显变化,说明其在指示微生物多样性方面可能存在一定的局限性.本研究表明,东北稻田有机肥替代部分化肥在维持水稻高产的同时,有利于改善土壤理化性质和提高土壤酶活性,是实现氮肥减施和培肥地力的有效技术措施.

目的 探讨钙非依赖性磷脂酶A2(calcium-independent phospholipase A2,iPLA2)在肾内动脉平滑肌收缩钙调控中的作用.方法 利用离体小动脉张力测定方法,研究iPLA2特异性抑制剂溴烯醇内酯(bromoenol lactone,BEL)对不同钙通道诱导小鼠肾内动脉张力影响,同时利用激光共聚焦测钙技术,探索BEL对花生四烯酸调节钙(arachidonate-regulated Ca2+,ARC)通道介导细胞内钙离子内流的影响.结果 BEL可抑制血管收缩剂苯肾上腺素和5-羟色胺诱导的肾内动脉浓度依赖性收缩反应(P<0.01);BEL对CaCl2诱导的收缩曲线也有抑制作用(P<0.05);在硝苯地平孵育后的无钙K-H溶液中,BEL对肌浆网钙释放和CaCl2诱导SOC通道钙内流引起的肾内动脉血管收缩均有抑制作用(P<0.05);BEL可明显抑制硝苯地平孵育后人主动脉平滑肌细胞株的ARC通道介导的外钙内流(P<0.01).结论 iPLA2通过调节L型钙通道、肌浆网钙释放、SOC通道及ARC通道功能介导肾内动脉血管的收缩反应.