长非编码RNA（lncRNA）是一种不编码表达蛋白质的RNA分子，在多种肿瘤的发生、发展中发挥着重要作用。SPRY4-IT1作为一种lncRNA，在乳腺癌组织中高表达，可作为乳腺癌上下游调控因子，促进乳腺癌的进展并与乳腺癌分期及预后密切相关。深入研究SPRY4-IT1与乳腺癌的相关分子机制，可为发现乳腺癌早期诊断生物标志物、评估疾病预后和寻找靶向位点提供新的思路。

目的:基于多重PCR方法针对Turner综合征患者，建立快速检测Y染色体特有序列的多重PCR方法。方法:在Y染色体不同区域选择9个基因设计引物，其中Y染色体短臂特有基因为 SRY、TBL1Y、TSPY，长臂特有基因为 DDX3Y、HSFY1、RPS4Y2、CDY1，以及X和Y染色体拟常染色体区(PAR)短臂的 SHOX和长臂的 SPRY3基因。建立并优化Y染色体9个基因的多重PCR方法，通过使用基因组DNA不同用量对多重PCR进行灵敏性测试，并对确诊的36例Turner综合征患者(2例患者核型携带mar，1例患者核型为45，X[40]/47XYY[21])以及1例核型为46，X，+mar的男性矮小症患者进行检测。 结果:优化多重PCR反应体系(50 μL)结果，每对引物上下游的终浓度为0.1 μM时，9对引物的多重PCR反应扩增出与理论大小一致的目的条带，无非特异性扩增，条带清晰易区分。在灵敏性试验中，多重PCR反应体系的基因组DNA用量低至1 ng时条带仍清晰可见。使用该方法检测36例Turner综合征患者，1例核型为45，X[40]/47XYY[21]的Turner综合征患者扩增出Y染色体特有目的基因，35例Turner综合征患者只扩增出 SHOX和 SPRY3两个目的基因，而无Y染色体特有的7个基因，与患者临床表现一致。 结论:本研究建立的9个基因多重PCR反应体系可快速准确的筛查Turner综合征患者是否携带Y染色体物质，具有检测成本低、操作简便、特异性强、检测周期短等优点，可供临床及时检出携带Y染色体物质的Turner综合征患者，为是否预防性切除性腺而防止恶性性腺肿瘤的发生提供诊断依据。

目的 探讨长链非编码 RNA(lncRNA)SPRY4 -IT1对宫颈癌细胞增殖侵袭及迁移的影响.方法 宫颈癌细胞株 HeLa中设计并合成 SPRY4 -IT1 RNA片段及其转染形成的 siRNA片段(si-SPRY4 -IT1 RNA),qRT-PCR技术检测其沉默效率,MTT检测 SPRY4 -IT1 RNA片段对 HeLa细胞的增殖影响,Transwell实验检测 HeLa细胞的侵袭、迁移能力,研究 si-SPRY4 -IT1 RNA对宫颈癌细胞HeLa侵袭凋亡能力的影响.结果 长链非编码 RNA SPRY4 -IT1在人宫颈癌细胞 HeLa中的表达明显增高,si -SPRY4 -IT1 RNA可下调 HeLa细胞中 SPRY4 -IT1的表达,并抑制宫颈癌细胞 HeLa的增殖和侵袭迁移能力.结论 SPRY4 -IT1是宫颈肿瘤的一个致癌基因,可作为新的靶向治疗目标.

长链非编码RNA(lncRNA)是一类长度超过200 nt、只能被转录、不能被翻译的非编码RNA.既往认为lncRNA是RNA聚合酶Ⅱ的副产物,没有生物学功能.但随着科技发展,尤其是高通量测序技术迅速发展,以及基因组相关研究的不断深入,发现lncRNA参与机体许多重要的生理病理过程,与肿瘤、子痫前期、胎儿生长受限等疾病的发生发展密切相关.近年,lncRNA已成为研究领域的“新宠”,在多种疾病中研究进展迅速,但在妊娠相关疾病及胎盘功能和调控方面处于起步阶段,尚有许多问题有待解决.总结胎盘组织中lncRNA的一些类别如H19、HOTAIR、MALAT-1、SPRY-4 IT1、LINC-HELLP、lncRHOXF1、NEAT1、MEG3、lncRNA-ATB和RPAIN的研究成果,发现他们异常表达可影响胎盘滋养层细胞的增殖、侵袭、迁移和凋亡,与妊娠及胎盘疾病的发生发展相关,但相关研究甚少,具体作用机制有待进一步研究.

目的 探究长链非编码RNA SPRY4-IT1在宫颈癌中的表达水平及其对宫颈癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响.方法 20对宫颈癌组织和癌旁组织取自2016年2月-2017年2月到该院就诊的20例宫颈癌患者,qRT-PCR检测长链非编码RNA SPRY4-IT1在宫颈癌组织和宫颈癌HeLa细胞中的表达水平;通过小RNA干扰技术检测沉默长链非编码RNA SPRY4-IT1,CCK-8实验检测沉默长链非编码RNA SPRY4-IT1对HeLa细胞增殖能力的影响;划痕愈合实验和Transwell迁移侵袭实验检测沉默长链非编码RNA SPRY4-ITI对HeLa细胞迁移及侵袭能力的影响.结果 长链非编码RNA SPRY4-IT1的表达水平在宫颈癌组织和HeLa细胞中显著高于癌旁组织和人永生化表皮细胞HaCaT,差异有统计学意义(t=3.21,P＜0.01;t=4.58,P＜0.001).HeLa细胞转染si-SPRY4-IT1 48 h后,HeLa细胞的增殖能力明显降低,差异有统计学意义(t=2.75,P＜0.01);迁移距离显著减少(t=4.19,P＜0.001);迁移和侵袭能力明显降低,差异有统计学意义(t=3.84,P＜0.001;t=3.96,P＜0.001).结论 长链非编码RNA SPRY4-IT1的表达水平在宫颈癌中显著上调,沉默长链非编码RNA SPRY4-IT1抑制HeLa细胞的增殖、迁移和侵袭能力.

目的 探讨乳腺癌组织SPRY4内含转录因子1(SPRY4-IT1)表达水平及其对远期生存的预测价值.方法 采用实时定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测99例乳腺癌组织及配对癌旁组织SPRY4-IT1的表达.利用受试者工作特征曲线(ROC)确定SPRY4-IT1最佳临界值及对乳腺癌的诊断效能;Kaplan-Meier法绘制不同SPRY4-IT1表达乳腺癌患者总体生存和无瘤生存曲线,Cox多因素回归模型分析乳腺癌预后的独立危险因素.结果 乳腺癌组织SPRY4-IT1表达水平明显高于癌旁组织,差异具有统计学意义(P＜0.05).SPRY4-IT1最佳临界值为1.57,诊断乳腺癌的AUC为0.876,敏感度为78.6％,特异度为94.2％.SPRY4-IT1高表达与TNM分期、淋巴结转移、分子分型和增殖标志物Ki-67有关(均P＜0.05),与年龄、肿瘤大小无关(均P＞0.05).乳腺癌患者中,SPRY4-IT1低表达组总生存率和无病生存率明显高于SPRY4-IT1高表达组,差异具有统计学意义(均P＜0.05).Luminal型乳腺癌中,SPRY4-IT1低表达组总生存率和无病生存率明显高于SPRY4-IT1高表达组(均P＜0.05);三阴型乳腺癌中,SPRY4-IT1低表达组和高表达组总生存率、无病生存率比较差异无统计学意义(均P＞0.05).淋巴结转移、Ki-67阳性、SPRY4-IT1高表达是影响乳腺癌总体生存和无病生存的独立危险因素(均P＜0.05).结论 SPRY4-IT1在乳腺癌组织中表达升高,高表达SPRY4-IT1可以作为乳腺癌不良预后的预测因子.

哺乳动物肠上皮是一种拥有快速自我更新能力的组织,在维持机体免疫稳态与肠道应激后的损伤修复中发挥重要作用.源于隐窝底部的多能肠干细胞不断进行增殖、迁移与分化,并沿隐窝-绒毛轴向上移动,从而维持肠上皮完整性.该过程受严格而复杂的基因调控网络参与.越来越多的数据表明,肠上皮完整性受到广泛的非编码RNA的调控,主要包括肠黏膜再生、保护与上皮屏障功能等方面.本文重点讨论了两类非编码RNA(包括microRNAs和lncRNAs)转录后调控肠上皮屏障功能的研究进展.其中,miR-503、miR-146和lnc-uc.173、lnc-SPRY4-IT1、lnc-plncRNA1、lnc-Gata6等,能够促进肠黏膜的更新,增强上皮屏障功能;相反,miR-222、miR-29b、miR-195和lnc-H19与lnc-BC012900等,抑制肠上皮再生并破坏肠上皮屏障功能.miRNAs、mRNAs与lncRNAs间构成复杂的分子网络,共同调控肠上皮稳态.深入研究与肠上皮相关的miRNAs和IncRNAs分子及其作用机制,探寻引起肠黏膜炎症的关键分子靶标,为肠道炎症临床诊治提供新方向与新方法.

目的:研究毒蕈碱型M3受体拮抗剂(4-diphenylacetoxy-N-methylpiperidine-methiodide,4-DAMP)对黑色素瘤增殖的抑制作用,从而探讨M3受体拮抗剂在抗肿瘤领域的发展前景及意义.方法:利用MTT[3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide]检测肿瘤细胞活力;EdU荧光染色观察细胞增殖情况.成年雄性BALB/c裸小鼠分为对照组、5-氟尿嘧啶(5-Fluorou-racil,5-Fu)组(20 mg?kg-1?d-1)及4-DAMP组(2 mg?kg-1?d-1),建立荷瘤模型.连续给药21 d后处死小鼠,计算抑制率、脾指数.实时定量PCR(quantitative reverse-transcription polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测A375细胞系中M3R、MIA(melanoma inhibitory activity)、SP-1(transcrip-tion factor Sp1)、Lnc-SPRY4-IT1(SPRY4 Intronic Transcript 1)的基因表达.Western Blot检测ERK1/2(extracellular signal-regulated kinase 1/2)蛋白含量的表达.结果:MTT及EdU均表明,4-DAMP可明显抑制A375细胞的活力(P<0.01).动物实验结果表明,5-Fu组与4-DAMP组肿瘤体积及质量均明显减小(P<0.05);H&E染色可见细胞间隙变大,结缔组织纤维增多.qRT-PCR结果表明,4-DAMP或转染si-M3R均可降低细胞内MIA、SP-1以及LncRNA-SPRY4-IT1的表达.Western Blot结果表明,4-DAMP或转染si-M3R后均可降低细胞内ERK1/2的表达.结论:M3受体拮抗剂4-DAMP在细胞及动物实验中均能抑制黑色素瘤增殖发挥抗肿瘤功效,降低肿瘤细胞内MIA、SP-1的mRNA和LncRNA-SPRY4-IT1的表达,同时抑制了ERK1/2的表达.

长链非编码RNA(lncRNA)是一类长度大于200 nt、没有编码蛋白能力的非编码RNA.近年研究表明,lncRNA与肺癌的发生发展密切相关,对肺癌的发生、发展、转移和预后有重要作用.lncRNA分为致癌lncRNA和抑癌lncRNA.与肺癌相关的致癌基因有肺腺癌转移相关因子1(MALAT1)、HOX转录反义RNA(HOTAIR)、结肠癌相关转录本2(CCAT2)、生长停滞特异性蛋白6-反义RNA1(DLX6-AS1)、H19、吸烟和癌症相关的长链非编码RNA1(SCAL1)、Sox2重叠转录本(Sox2ot)等,与肺癌的生长、迁移和侵袭相关.与肺癌相关的抑癌基因有生长停滞特异性转录本5(GAS5)、AK126698、生长停滞特异基因转录的反义RNA(GAS6-AS1)、SPRY4内含子转录本1(SPRY4-IT1)、BRAF基因激活的非编码RNA(BANCR),可以抑制肿瘤的发生发展.

目的 探讨血清lncRNA EWSAT1和SPRY4-IT1水平检测对卵巢癌的诊断及预后预测.方法 选择卵巢癌患者138例为病例组,健康体检者107例为对照组.获取2组患者血清组织,实时荧光逆转录法测定血清lncRNA EWSAT1和SPRY4-IT1表达水平,采用χ2检验分析lncRNA EWSAT1和SPRY4-IT1的表达情况与卵巢癌患者临床病理特征的关系,采用Log-rank检验分析不同lncRNA EWSAT1和SPRY4-IT1水平卵巢癌预后生存率.结果 病例组血清lncRNA EWSAT1、SPRY4-IT1 mRNA水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);lncRNA EWSAT1、SPRY4-IT1 mRNA阳性率与肿瘤大小、病理学分级、临床分期、有无淋巴结转移、是否复发相关性明显,且肿瘤越大、病理学分级越高、临床分期越高、有淋巴结转移、复发,lncRNA EWSAT1、SPRY4-IT1 mRNA阳性率越高,差异有统计学意义(P<0.05);lncRNA EWSAT1+SPRY4-IT1联合筛查方法灵敏度、特异度、准确度均高于lncRNA EWSAT1、SPRY4-IT1单独筛查方法,差异有统计学意义(P<0.05);lncRNA EWSAT1、SPRY4-IT1单独筛查方法灵敏度、特异度、准确度相近,差异无统计学意义(P>0.05);lncRNA EWSAT1、SPRY4-IT1阴性组3年生存率及生存期均明显高于lncRNA EWSAT1、SPRY4-IT1阳性组(P<0.05).结论 卵巢癌患者血清lncRNA EWSAT1、SPRY4-IT1升高;ncRNA EWSAT1+SPRY4-IT1联合筛查方法诊断卵巢癌灵敏度、特异度、准确度高,适合在临床上推广应用;lncRNA EWSAT1、SPRY4-IT1低表达的卵巢癌患者具有较好的预后.