目的 分析不同来源栝楼Trichosanthes资源群体的遗传结构和自然亚群间基因漂移分析以及资源的遗传多样性,为栝楼育种奠定基础.方法 从100对相关序列扩增多态性(sequence-related amplified polymorphism,SRAP)引物中筛选出扩增效果好、稳定性高的43对引物对13个来源于3个自然亚群的栝楼资源进行扩增,进行不同亚群间和品种之间的遗传结构和多样性分析.结果 共扩增出691个位点,其中多态性位点百分率达到79.16％,整个群体的多态性信息含量(polymorphic information content,PIC)、观察等位基因数(observing the number of alleles,Na)、有效等位基因数(effective number of alleles,Ne)、香农信息指数(Shannon information index,I)和遗传距离(genetic distance,H)依次为 0.495 5、1.791 6、1.374 6、0.359 4和0.2316,3个自然亚群中其他野生类群的遗传丰富度最高,潜山和合肥自然亚群之间的遗传相似度高,达到0.922 9.亲缘关系类群体间的群间分化系数(intergroup differentiation coefficient,Fst)平均为0.265 6,类群间基因流(gene flow,Nm)平均为1.382 6,遗传分化系数较大,不同自然亚群间具有一定的基因交流,但不同位点基因交换的差异很大.13个品种资源被分成2个亚群,2个长萼栝楼地方品种单独组成一个亚群,其他11个双边栝楼资源被聚为另一个亚类,2个亚群遗传相似性系数仅为60.94％,福建野生型与安徽育成品种相似性较低,四川野生型相似性较高,说明四川野生型已被大量应用于安徽栝楼育种.结论 栝楼种质资源之间有较大的遗传相似性,不同自然亚群的栝楼种质资源之间有一定的基因交流.

本研究旨在筛选与柱花草花粉不育基因相关的特异性分子标记,为今后筛选特异SCAR标记及建立柱花草稳定的雄性不育系提供新的理论基础,为柱花草杂交育种奠定基础.本研究以圭亚那柱花草1979(母本,花粉不育)和热研5号(花粉可育,轮回父本)的30株BC1F1代群体为材料,利用100对SRAP引物组合,筛选出在花粉不育基因池中稳定扩增的2个SRAP标记.经基因池各单株验证和群体单株验证,这2个标记仅在花粉不育个体中出现,表明这2个标记与柱花草花粉不育基因存在一定的连锁关系.

目的:选育优良广金钱草品种(系).方法:采用迭氮钠(NaN3),甲基磺酸乙酯(EMS)和秋水仙素最佳剂量对广金钱草种子进行诱变处理,初步筛选出13株表型变异的广金钱草植株,对广金钱草变异植株及对照基因组DNA进行相关序列扩增多态性(SRAP)分析.结果:广金钱草在株高、地茎、分枝状况等方面发生大量变异;10对SRAP引物扩增出多态性条带3 285个,平均每对引物扩增出328.5条带,多态性比例平均为96.45％,广金钱草化学诱变植株遗传相似系数范围0.326～0.476,遗传相似系数较低,表明经化学诱变剂处理后广金钱草在基因组水平上存在真实的遗传差异;相似性差异程度大小顺序为V-13＞V-7＞ V-6＞ V-1 1＞V-10＞ V-12＞ V-9＞ V-8＞ V-4＞ V-5＞ V-3＞V-2＞ V-1,表明NaN3在分子水平上对广金钱草的影响比EMS和秋水仙素小;化学诱变处理后广金钱草变异程度高于不同种源地的变异,进一步表明人工诱变育种可以缩短育种年限,提高突变率.结论:该研究揭示了广金钱草化学诱变株表型特异性和遗传多样性,筛选了一些特异资源,为高产优质广金钱草新品种(系)的选育提供重要的科学依据.

石斛作为我国传统中药材,具有养阴生津、润肺明目、抗癌防老等显著功效,有着广泛的分布和悠久的应用历史.随着分子生物学技术的发展,石斛属药用资源的研究进展迅速,分子标记技术具有微量、快速、特异性强、准确可靠等特点,为石斛资源的研究提供了新的方法.通过选用RAPD,ISSR,AFLP,SRAP等不同分子标记的结合使用,对石斛不同种类之间的遗传多样性及亲缘关系进行分析,获得的遗传信息,可以为濒危的石斛资源的保护及开发利用提供理论依据.核基因、线粒体基因、叶绿体基因的结合应用,可以有效便捷地鉴定石斛正品,为进一步发展中药材特异性分子鉴定提供科学依据.同时不同基因片段序列的联合运用,可以作为石斛鉴别DNA条形码的分子标记,将为石斛类药材的鉴定提供新的思路和方法,有效提高石斛属植物的鉴定速度和效率.该文从分子鉴定,DNA序列,石斛功能基因等方面进行论述,为石斛属药用植物的进一步开发应用提供理论基础,同时也为石斛属植物的有效保护和可持续开发提供科学依据.

利用SRAP分子标记,对国内外5个不同地区161份胡麻种质资源的遗传多样性及亲缘关系进行研究,为胡麻育种提供科学依据.结果表明:(1)20对引物扩增出307个条带,其中有192个多态性条带,多态比率为62.54％,平均每对引物组合有9.60个多态性位点,每对引物的多态性信息量(PIC)为0.51～0.76,平均为0.61.(2)有效等位基因数(Ne)、香浓信息指数(I)和Nei's遗传相似系数(H)在物种水平上分别为1.582 0、0.521 1和0.346 5,在群体水平上分别为1.491 1、0.431 1和0.286 3.(3)各群体遗传多样性指数表现为中国西北群体＞中国华北群体＞美洲群体＞亚洲群体＞欧洲群体.(4)聚类分析结果显示,在遗传相似系数为0.335 5处,将161份胡麻资源分为2大类;在0.455 0处,分为5个亚类,与国内外5个不同地区来源吻合.研究表明,中国西北地区胡麻品种(系)的遗传多样性最为丰富;地域是影响胡麻种质资源遗传多样性的主要因素;国内、外品种(系)间的遗传差异较大,表现出较远的亲缘关系.

目的 研究9种川续断属药用植物的亲缘关系.方法 采用ISSR、SCoT、SRAP 3种分子标记进行多态性检测,TREECONW分析软件计算遗传距离,UPGMA方法构建树状聚类图.结果 ISSR、SCoT、SRAP标记揭示的多态百分率差异不大,分别为90.4％、88.5％、88.2％,均表明供试材料的遗传多态性极为丰富;3种标记均揭示日本续断与大头续断之间遗传距离最大,表明二者亲缘关系最远;3种标记均将川续断属9种药用植物聚为3类,即大头续断与丽江续断、深紫续断与日本续断分别聚为一类,峨眉续断单独为一支,其余4个种聚为一类;ISSR标记和SRAP标记的聚类结果基本相同,仅是大理续断和川续断聚类先后略有差异.结论 3种标记的聚类结果与经典分类具有很好的吻合度,证实了分子标记技术的可靠性,可作为川续断属植物亲缘关系研究的有效方法之一.

榆黄菇味道鲜美,营养丰富,且必需氨基酸含量高,近几年成为食用菌的重要栽培种类之一.通过ISSR和SRAP分子标记方法对全国收集到的19个榆黄菇品种进行遗传多样性综合分析,从而为其杂交育种的亲本选择提供理论指导.筛选出10个ISSR引物和10对SRAP引物,利用筛选的引物,以榆黄菇的基因组DNA为模版进行PCR扩增,共获得194条清晰条带,其中150条是多态性条带,占总条带的77.3％.对条带进行聚类分析,结果表明在相似系数为0.70水平上,可将19个供试榆黄菇菌株分为4大类,表明19个供试榆黄菇菌株间具有较大的遗传差异,聚类分析图为杂交育种的亲本选择提供分子水平的依据.

以包含甘薯近缘野生种、地方品种和育成品种的129份种质为供试材料,采用SRAP分子标记对其进行遗传多样性分析,同时用MEGA软件结合DPS软件绘制甘薯及其近缘种进化树.结果表明:(1)基于SRAP标记的124份甘薯栽培种平均遗传距离为0.1848,5份野生种平均遗传距离为0.4822,野生种与栽培种之间的遗传距离平均为0.4135.(2)当遗传距离为0.31时,可以把近缘野生种和栽培品种完全区分开.124份栽培种可以在遗传距离为0.21处划分为8个类别.(3)在基于SRAP标记绘制的进化树上,129份甘薯及其近缘种种质按演化顺序分为3部分,分别为处于进化树最底端的由5个近缘野生种组成的第Ⅰ部分、处于进化树中部的由6个育成品种和1个地方品种组成的第Ⅱ部分,以及进化树上部由117份地方品种和育成品种组成的第Ⅲ部分.(4)从进化时间来看,近缘野生种平均进化时间最长,地方品种次之,育成品种最短,与理论预期一致,同时菲律宾引入的品种与我国福建地方品种进化时间一致,验证了甘薯经由菲律宾引入我国福建地区这一传播途径.SRAP标记可以有效的运用于甘薯遗传多样性及其起源与演化分析.

目的 建立qPCR法快速检测金黄色葡萄球菌及其mecA基因,以期快速精准诊断金黄色葡萄球菌感染及初步判断耐药情况.方法 从NCBI数据库下载金黄色葡萄球菌nuc、atl、icaB、fnbA、hla、srap基因序列用于鉴定标志筛选,mecA基因序列用于MRSA标志筛选;经DNA MAN比对后,选择各基因保守区分别设计1～2套引物、探针,建立单重及双重qPCR,用临床分离株及标准菌株筛选出检测性能最好的基因片段作为检测标志物,建立金黄色葡萄球菌鉴定和耐药双重qPCR检测方法,并进行性能评价.结果 经筛选,金黄色葡萄球菌atl基因(CP009361.1:1010217～1010341)、mecA基因(KF058908.1:1715～1843)两片段检测性能最优,将其作为标志物建立双重qPCR法.该方法的检测下限均低至4 copies/反应;扩增线性范围均达2.0×102～8 copies/mL.335份金黄色葡萄球菌(含94份MRSA)培养阳性的患者样本中,qPCR法分别检出SA 335份,MRSA 94份;95份金黄色葡萄球菌培养阴性的患者样本中,qPCR法分别检出SA 17份,MRSA 4份,经PCR产物测序,与标准菌株同源性均≥90％.双重qPCR法从样品处理到报告结果≤2.0 h.结论 qPCR法方法简便、快速、灵敏度高、特异性好,可望提高金黄色葡萄球菌感染的诊断能力并实现快速检测,为尽早精准治疗赢得时间.

本研究分别利用RSAP、SSR和SRAP对15份马铃薯种质进行遗传多样性分析,比较3种分子标记的分析效力.结果表明,平均每对引物扩增出的多态性位点RSAP (5.75个)＜SSR (6.33个)＜SRAP (7.75个);RSAP+SSR+SRAP联合聚类的结果与SRAP和RSAP聚类结果基本一致,相关性分别达到极显著和显著水平,与SSR的聚类结果基本相似,呈显著相关性.在分析马铃薯遗传多样性中,SRAP标记的效果最优,SSR标记效果略优于RSAP标记.RSAP分子标记能较好地分析马铃薯的遗传多样性,而以RSAP+SSR+SRAP联合分析,则能更好地评估种质的遗传多样性和亲缘关系.