目的:分析4例不明原因的溶血性贫血患者的基因变异类型。方法:采集4例以溶血性贫血为表型的患者及其家系成员外周静脉血，提取基因组DNA。应用高通量测序方法对4例患者红系相关疾病基因进行筛查，并用Sanger测序验证患者及其家系成员可疑变异位点。结果:4个先证者在 SEC23B基因上均检测到2个复合杂合变异，分别来自其父母，为先天性红细胞生成异常性贫血(congenital dyserythropoietic anemia，CDA)Ⅱ型患者。先证者1携带 SEC23B基因第15外显子c.1727T>C(p.Phe576Ser)和第16外显子c.1831C>T(p.Arg611Trp)复合杂合变异；先证者2携带第2外显子c.74C>A(p.Pro25His)和第14外显子c.1588C>T(p.Arg530Trp)复合杂合变异；先证者3携带第2外显子c.74C>A(p.Pro25His)和第16外显子c.1831C>T(p.Arg611Trp)复合杂合变异；先证者4及其弟携带第14外显子c.1571C>T (p.Ala524Val)和第19外显子c.2149G>T (p.Ala717Ser)复合杂合变异；检出的6个变异中，c.1727T>C(p.Phe576Ser)和c.2149G>T (p.Ala717Ser)为未见报道过的新变异。同时检测到先证者4其 PIEZO1基因上存在c.4608_4615del(p.Gly1537Glufs*82)杂合变异。 结论:高通量测序技术可快速准确地对CDAⅡ型患者进行基因变异分析，是传统诊断方法的有效补充手段，其中新发现的变异位点丰富了 SEC23B基因的变异数据库。

目的:比较靶向相对分子质量1.8×10 4转位蛋白(TSPO)的分子探针 N， N-二乙基-2-[2-(4- 18F-氟苯基)-5，7-二甲基吡唑[1，5-a]并嘧啶-3-基]乙酰胺( 18F-FDPA)和 18F-(R)-( N-仲丁基)-3-氟甲基- N-甲基-4-苯基喹啉-2-甲酰胺(LW223)用于探测兔腹主动脉粥样硬化易损斑块(VAP)的可行性和效能。 方法:选取9只健康新西兰大白兔，用完全随机法分为3组(每组3只)：正常对照组(A组)、VAP组(B组)和VAP治疗组(C组)，分别于造模后第12、16和24周末注射 18F-FDPA和 18F-LW223，并于注射后40～50 min行活体腹主动脉PET/CT和同机CT血管成像(CTA)。所有显像结束后，处死全部动物，行腹主动脉病理学及免疫荧光检测。采用重复测量方差分析(Bonferroni法)和配对 t检验分析数据。 结果:18F-FDPA在3组不同时间点(第12、16和24周末) PET/CTA同机显像中，靶本比(TBR；腹主动脉病灶/左心室血池)值间差异均有统计学意义( F值：68.09～144.88，均 P<0.001)。在第12周末显像中，3组腹主动脉区域均无明显显像剂摄取增高灶。在第16和24周末显像中，B组腹主动脉局部的摄取均高于同期时间点的C组(均 P<0.05)和A组(均 P<0.001)；C组腹主动脉局部的摄取高于同期时间点的A组(均 P<0.01)。3组不同时间点PET/CTA图像中，腹主动脉区域均无明显 18F-LW223摄取增高灶。在上述3个不同时间点，3组 18F-FDPA和 18F-LW223的TBR值间差异均有统计学意义( t值：2.88～36.79，均 P<0.05)。病理HE、免疫荧光CD68和TSPO染色显示，B组 18F-FDPA高摄取易损斑块处巨噬细胞浸润数量多于C组。 结论:与 18F-LW223相比， 18F-FDPA可用于早期探测兔腹主动脉易损斑块，并可评估降脂药物干预后易损斑块稳定性的变化。

目的:探究S高校附属医院重症医学专业在"十三五"期间科研效率的静态和动态趋势。方法:根据2016至2020年北京市S高校16家附属医院重症医学专业的科研数据来源，选取科研投入经费、参与科研医师人数作为投入评估指标，以科学引文索引（SCI）论文、中国科学引文数据库（CSCD）论文、硕博士培养人数作为产出评估指标，构建重症医学专业科研效率评价指标体系，运用SPSS 23.0软件进行描述性资料统计，分别运用DEAP 2.1软件的数据包络分析法（DEA）-BCC模型和DEA-Malmquist指数模型对其2016至2020年的科研效率进行静态和动态评价。结果:①在2016至2020年S高校16家附属医院的重症医学专业的科研技术效率（TE）差异很大，但纯技术效率（PTE）、规模效率（SE）均在较好的水平，且连续5年有6~11家附属医院重症医学专业保持DEA有效。②动态分析显示其2016至2020年科研全要素生产率指数（TFP）呈先上升后下降再提升的趋势，均值为0.985；技术效率变化指数（TEC）呈下降又上升趋势；技术进步变化指数（TC）呈缓慢上升又下降趋势，均值为0.953。而TEC、纯技术效率变化指数（PTEC）和规模效率变化指数（SEC）的均值均在1以上，可见科研创新TFP的增长更多地取决于技术效率指数。结论:S高校附属医院重症医学专业科研效率的"收益效应"和"追赶效应"明显，但未显现"增长效应"，虽然实现了"十三五"期间的科研效率的明显提升，但科技创新和国际学术影响力方面仍有较大的提升空间。

目的:研究转录激活因子6（ATF6）与需肌醇酶1-X-框结合蛋白1（IRE1-XBP1）在氧糖剥夺/复氧（OGD/R）损伤小鼠海马神经元（HT22）细胞中的交互作用。方法:复制OGD/R损伤HT22细胞模型，观察OGD/R后不同时间点（0、3、6、12、24 h）内质网应激（ERS）、细胞活性和凋亡的变化。将对数生长期的HT22细胞分为空白对照组、对照+ATF6激动剂AA147组、对照+IRE1抑制剂4μ8c组、OGD/R模型组、OGD/R+AA147组、OGD/R+4μ8c组（AA147组和4μ8c组于全程添加10 μmol/L AA147或16 μmol/L 4μ8c）。采用蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测各组HT22细胞ERS相关蛋白〔葡萄糖调节蛋白78（GRP78）、磷酸化需肌醇酶1（p-IRE1）、磷酸化真核细胞翻译起始因子2α（p-eIF2α）〕以及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3（caspase-3）、活化caspase-3的表达；采用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测ERS相关基因以及ATF6〔同型半胱氨酸内质网应激泛素样结构域1（Herpud1）、蛋白二硫键异构酶家族成员4（Pdia4）、Lin-12样抑制子/增强子（Sel1L）〕和剪接型X-框结合蛋白1〔XBP1s，包括DnaJ热休克蛋白成员B9（Erdj4）、Sec24相关基因家族成员D（Sec24d）、信号受体序列3（Ssr3）〕介导的转录反应相关基因的mRNA表达；采用细胞增殖与毒性检测试剂盒（CCK-8）检测细胞活性；采用免疫荧光法检测活化caspase-3表达。结果:与空白对照组比较，ERS相关蛋白p-IRE1和p-eIF2α的蛋白表达量分别在OGD/R 12 h、OGD/R 3 h升高（p-IRE1/β-actin：2.09±0.10比1.00±0.00，p-eIF2α/β-actin：1.39±0.11比1.00±0.00，均 P<0.01），ERS相关基因ATF6、XBP1s、非剪接型X-框结合蛋白1（XBP1u）、转录激活因子4（ATF4）、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白（CHOP）的mRNA表达量在OGD/R后不同时间点也明显升高，表明ERS在OGD/R作用的HT22细胞中被激活。与OGD/R模型组比较，OGD/R+AA147组p-IRE1蛋白表达量无改变，但XBP1s和XBP1u的mRNA表达量明显下降〔XBP1s（2 -ΔΔCt）：0.76（0.71，0.92）比1.13（1.03，1.29），XBP1u（2 -ΔΔCt）：0.29±0.05比0.52±0.04，均 P<0.01〕，而XBP1s介导的转录反应相关基因表达量无明显改变。与OGD/R模型组比较，在使用4μ8c后短链ATF6（sATF6）和GRP78的蛋白表达量无明显改变，ATF6介导的转录反应相关基因的mRNA也无明显改变。提示ATF6的激活能抑制XBP1s和XBP1u的mRNA表达，但ATF6与XBP1s介导的转录反应无交互作用。与空白对照组比较，HT22细胞活性在OGD/R 3 h时显著降低〔（44.64±5.12）%比（99.13±5.76）%， P<0.01〕，凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2比值和活化caspase-3/caspase-3比值分别在OGD/R 3 h和OGD/R 0 h显著升高（Bax/Bcl-2比值：6.15±1.65比1.00±0.00，活化caspase-3/caspase-3比值：17.48±2.75比1.00±0.00，均 P<0.01），表明凋亡在OGD/R作用的HT22细胞中被激活。与OGD/R模型组比较，OGD/R+AA147组细胞活性显著下降〔（36.52±17.78）%比（69.90±9.43）%， P<0.01〕，Bax/Bcl-2比值和活化caspase-3/caspase-3比值明显升高（Bax/Bcl-2比值：2.06±0.31比1.10±0.25，活化caspase-3/caspase-3比值：3.35±0.59比0.55±0.09，均 P<0.01）。 结论:在OGD/R损伤HT22细胞中，ATF6和XBP1s介导的转录反应无明显交互作用，但AA147激活的ATF6能抑制XBP1s和XBP1u的mRNA表达并促进应激HT22细胞中死亡的发生。

目的:探明血浆支架蛋白SEC16A水平及相关模型诊断乙型肝炎病毒相关肝硬化（HBV-LC）及肝细胞癌（HBV-HCC）的临床价值。方法:选择2017年6月至2021年10月河北医科大学第三医院经临床、实验室检查、影像学及肝组织病理学诊断的HBV-LC及HBV-HCC患者，设立健康对照组。血浆SEC16A水平采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测，血清甲胎蛋白（AFP）采用电化学发光仪检测。应用SPSS 26.0、MedCalc 15.0统计学软件分析血浆SEC16A水平与肝硬化、肝细胞癌发生和发展的关系，有序logistic回归模型分析相关因素，并建立SEC16A联合诊断模型（SAA），受试者操作特征曲线评估该模型诊断肝硬化及肝细胞癌的临床效能。Pearson相关性分析明确新型诊断标志物的影响因素。结果:共纳入健康对照60例、HBV-LC 60例、HBV-HCC 52例，血浆SEC16A平均水平依次为（7.41±1.66） ng/ml、（10.26±1.86）ng/ml、（12.79±1.49）ng/ml， P < 0.001；SEC16A诊断肝硬化、肝细胞癌灵敏度为69.44%、71.05%，特异度为89.36%、88.89%。SEC16A、年龄、AFP为HBV-LC、肝细胞癌发生的独立危险因素，以此建立模型SAA诊断界值分别为26.21、31.46，灵敏度为77.78%和81.58%，特异度为87.23%和97.22%；诊断早期HBV-HCC灵敏度、特异度分别为80.95%、97.22%。Pearson相关性分析显示：AFP水平与丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）、总胆红素（TBil）、γ-谷氨酰转移酶（GGT）均呈正相关， P值均< 0.01；而血清SEC16A水平仅在肝硬化组中与ALT、AST呈轻度正相关（ r值分别为0.268、0.260， P值均< 0.05）。 结论:血浆SEC16A可作为乙型肝炎肝硬化及肝细胞癌的诊断标志物，SEC16A联合年龄、AFP诊断模型SAA可显著提高HBV-LC及HBV-HCC的早期诊断率，其应用有助于HBV相关系列疾病进展的诊断及鉴别诊断。

目的:建立并优化1型单纯疱疹病毒(herpes simplex virus type 1, HSV-1)感染HEp-2细胞外泌体的分离方案。方法:收集HSV-1感染HEp-2的细胞培养上清，经差速离心和滤膜过滤对上清液进行预处理，使用外泌体提取试剂(total exosome isolation，TEI)结合尺寸排除色谱法(size-exclusion chromatography，SEC)的组合方案对粗提的外泌体进行分离和纯化，最后经超滤浓缩，获得高纯度外泌体。使用3种检测方法对纯化的外泌体进行表征鉴定。结果:Western blot结果显示，HSV-1感染或未感染HEp-2细胞外泌体均含有外泌体标志蛋白TSG101和CD9，另外，HSV-1感染细胞外泌体含有gB、VP16和ICP5等3种病毒蛋白。透射电镜观察显示，纯化的外泌体近似圆形，具有膜结构，直径50~150 nm，未发现典型HSV-1病毒颗粒。NTA结果显示，纯化的外泌体峰值粒径均为112.2 nm；单纯HEp-2细胞来源的粒子峰值浓度为3.4×10 9个粒子/ml，HSV-1感染细胞来源的粒子峰值浓度为4.1×10 9个粒子/ml。 结论:本研究建立了高效优化的HSV-1感染细胞外泌体分离纯化方案。

Background::Psoriasis is a common, chronic, immune-mediated inflammatory skin disease with increased epidermal proliferation. The objective of this review was to systematically identify the evidence and perform a network meta-analysis (NMA) to estimate the relative efficacy of secukinumab (SEC) against adalimumab (ADA) and infliximab (INF) for the treatment of moderate-to-severe plaque psoriasis.Methods::A systematic literature review (SLR) was conducted according to a pre-specified protocol to identify relevant studies. Initially, the databases were searched from database inception till June 2013, and the SLR was updated in April 2020. The eligibility criteria included adult patients (≥18 years old) with moderate-to-severe plaque psoriasis, and the SLR included randomized controlled trials (RCTs). The comparators of interest were SEC, ADA, INF, and placebo (PLA), while outcomes of interest were Psoriasis Area and Severity Index (PASI) (50, 75, and 90) at weeks 12, 16, and 24. A Bayesian NMA for PASI was utilized with a framework that evaluated the probability of PASI responses in different categories of PASI thresholds within a single model.Results::A total of 23 RCTs that assessed the efficacy of SEC, ADA, and INF in patients with moderate-to-severe plaque psoriasis were identified. At 12 weeks, SEC was associated with a significantly better response compared with PLA and ADA for PASI 75 and 90, while response results were comparable against INF. At 12 weeks, risk ratio (95% confidence interval) derived from NMA for SEC vs. ADA and INF for PASI 75 was 1.35 (1.19, 1.57) and 1.01 (0.90, 1.18), respectively. At the 16-week and 24-week time interval, SEC was significantly better than PLA, ADA, and INF for PASI 75 and 90. Conclusion::Efficacy of SEC in the treatment of patient populations with moderate-to-severe plaque psoriasis is well demonstrated through NMA.

目的 获得可溶表达的GⅡ.2[P16]型诺如病毒(norovirus,NV)P蛋白,并分析其抗原特性.方法 通过优化合成GⅡ.2[P16]型NVP蛋白基因并克隆至pET-28a(+)载体上,构建重组质粒GⅡ.2-NV-pET-28a,转化DH5α感受态细胞,通过对表达菌种的优化,使P蛋白以可溶性形式表达.表达的P蛋白经Ni-NTA亲和层析纯化后,采用Western blot法检测纯化蛋白抗原性;体积排阻高效液相色谱(size exclusion high performance liquid chromatography,SEC-HPLC)法检测抗原纯度;ELISA法鉴定抗原抗体结合能力.结果 重组BL21 Star(DE3)pLySs工程菌目的蛋白以可溶形式高表达,经亲和层析纯化后,GⅡ.2P蛋白纯度为95.53％,且抗原性较好.结论 用原核表达菌种成功制备了可溶性表达的NVP蛋白,并明确了 P蛋白的抗原性,为GⅡ.2[P16]型NV检测试剂盒和重组亚单位疫苗的研制奠定了基础.

目的:比较超速离心法和尺寸排阻色谱法提取干细胞外泌体的产率、纯度、生物活性和促骨修复能力的差异.方法:采用超速离心法和尺寸排阻色谱法提取骨髓间充质干细胞外泌体,对外泌体的粒径、外观形貌和标志蛋白进行鉴定表征.采用二喹啉甲酸(BCA)蛋白定量试剂盒测定外泌体中蛋白含量,并采用血管生成因子芯片对外泌体中成血管相关蛋白进行分析.采用划痕实验和小管形成实验评价外泌体体外促血管生成能力,进一步在大鼠骨缺损模型中评价外泌体对骨修复再生的效果.结果:单位体积上清液中,超速离心法所得外泌体(Exo-UC)质量低于尺寸排阻色谱法所得外泌体(Exo-SEC)质量.电镜下见Exo-SEC中杂质蛋白少于Exo-UC中的杂质蛋白.Exo-UC中检测到16种成血管蛋白,Exo-SEC中检测到的成血管蛋白种类和含量均少于Exo-UC.与Exo-SEC比较,Exo-UC能够显著促进血管内皮细胞迁移和小管形成,并显著提升大鼠骨缺损部位的骨体积百分比和骨矿物质密度.结论:超速离心法提取的干细胞外泌体促新生血管形成能力更强,骨修复效果更佳.

目的:比较术中滑轨CT联合C形臂X线机辅助与单纯使用C形臂X线机辅助透视下经皮骶髂关节螺钉治疗骨盆后环损伤临床疗效.方法:自2018年12月至2022年2月收治76例骨盆后环损伤患者,其中,C形臂联合滑轨CT辅助下行内固定治疗39例为CT组,男23例,女16例,年龄(44.98±7.33)岁;仅在C形臂透视下行内固定治疗37例为C形臂组,男24例,女13例,年龄(44.37±10.82)岁.合并有前环骨折患者42例,均采用经皮髂前下棘内置外固定架(internal fixation,INFIX)或耻骨上支螺钉固定骨盆前环.术后比较两组随访时间、置钉时间、并发症.比较两组Matta复位评价、Majeed疗效评价、CT分级及二次手术翻修率.结果:CT组置钉时间(32.63±7.33)min,短于C形臂组(52.95±10.64)min(t=-9.739,P＜0.05).CT组随访时间(11.97±1.86)个月,C 形臂组(12.03±1.71)个月,两组比较差异无统计学意义(P＞0.05).两组术后并发症发生比较,差异无统计学意义(x2=0.159,P＞0.05).CT组Matta复位评价结果(Z=2.79,P＜0.05)、Majeed 疗效评价结果(Z=2.79,P＜0.05)、CT 分级(Z=2.83,P＜0.05)均优于 C 形臂组.CT 组二次手术翻修率低于C形臂组(x2=5.641,P＜0.05).结论:术中滑轨CT联合C形臂辅助下经皮骶髂关节螺钉置入手术与传统C形臂透视相比,具有手术时间短、准确度及安全性高、术后二次翻修率显著下降等特点,是重建骨盆骨折后环稳定性的有效方法之一.