目的:探讨钙库操纵的钙离子通道（store-operated calcium entry, SOCE）抑制剂SKF96365对百草枯（paraquat, PQ）致肝肾损伤的作用。方法:体外培养A549细胞，分为对照组（DMSO组、SKF 2 μmol/L组，SKF 10 μmol/L组)，PQ组（PQ+DMSO组、PQ+SKF 2 μmol/L组，PQ+SKF 10 μmol/L组）。采用荧光素酶报告基因技术检测A549细胞活化T细胞核因子（nuclear factor of activated T cells, NFAT）激活水平变化。构建PQ中毒的小鼠模型，分为对照组、SKF组、PQ组、PQ+SKF组。PQ组按照50 mg/kg腹腔注射PQ；SKF组按照10 mg/kg每天腹腔注射SKF96365，共注射3 d。PQ+SKF组按照50 mg/kg腹腔注射PQ一次，按照10 mg/kg每天腹腔注射SKF96365，共注射3 d。第4天处死小鼠取肝肾组织，苏木精-伊红（H&E）染色观察肝脏、肾脏组织病理学变化，TUNEL染色观察肝肾组织凋亡情况。正态分布计量资料多组间均数比较采用单因素方差分析，两组间比较采用LSD- t检验。 结果:荧光素酶报告基因技术检测结果显示PQ组NFAT明显被激活，给予SKF96365预处理后，NFAT激活明显下降，且具有剂量依赖性。HE染色提示PQ染毒组肝脏、肾脏组织轮廓结构不清、细胞肿胀，大量炎性细胞浸润；PQ+SKF组肝脏细胞肿胀减轻，炎性细胞浸润明显减少。TUNEL染色提示PQ染毒组肝脏、肾脏组织凋亡细胞增加，PQ+SKF组凋亡明显减少。结论:SOCE抑制剂SKF96365能够明显减轻PQ引起的肝脏、肾脏损伤。

在非兴奋型细胞中，电压门控性T型钙通道可通过激活、失活及缓慢灭活状态调控细胞内外钙离子浓度和膜电位。上述特性使得T型钙离子通道参与了多种肿瘤细胞的生物学特性的调控，包括细胞的增殖、分化、凋亡及侵袭、转移等。通过药物或基因方法抑制T型钙通道活性，可改变细胞相应通道电流和细胞内外离子分布，进而调控肿瘤细胞的生物学特性。本文对肿瘤进展过程中T型钙离子通道的电生理变化进行综述，以望为肿瘤发生发展的机制研究与治疗提供科学依据。

目的:探讨药物代谢相关基因多态性对急性冠状动脉综合征（ACS）患者氯吡格雷疗效的影响。方法:收集2017年至2019年在北京市大兴区人民医院住院、接受阿司匹林（100 mg/d）及氯吡格雷（75 mg/d）标准化治疗且进行了氯吡格雷吸收/代谢相关基因多态性检测的ACS患者病历资料和随访记录，根据患者治疗1年内是否出现心肌梗死、支架内血栓形成、脑梗死等血栓相关事件将患者分为血栓事件组及非血栓事件组，对比2组患者年龄、性别、烟酒嗜好、基础疾病、并用药物及氯吡格雷吸收/代谢相关等位基因等因素；采用logistic回归模型对影响氯吡格雷临床疗效的因素进行分析。结果:共有342例患者纳入分析，男性274例，女性68例，年龄（58±9）岁，78例（22.8%）发生血栓事件。血栓事件组与非血栓事件组患者的年龄、性别、吸烟史、饮酒史、高血压病、糖尿病、高脂血症、经皮冠状动脉介入治疗史、并用钙离子通道拮抗剂占比、细胞色素P450（CYP）2C19*3、对氧磷酶-1基因Q192R及三磷酸腺苷结合盒转运蛋白B1基因C3435T均无明显差异（均 P>0.05），但血栓事件组患者体重指数（BMI）、CYP2C19*2 GG型及CYP2C19*17 CT型患者的比例低于非血栓事件组（均 P<0.05），并用质子泵抑制剂患者和CYP2C19*17 CC型患者的比例高于非血栓事件组（均 P<0.05）。多因素logistic回归分析结果显示，高BMI（ OR=0.915，95 %CI：0.847~0.989， P=0.026）、CYP2C19*2 GG型（ OR=0，95 %CI：0~0.008， P<0.001）及GA型（ OR=0.028，95 %CI：0.003~0.296， P=0.003）是氯吡格雷治疗后发生血栓事件的独立保护因素；CYP2C19*17 CC型（ OR=2 856.665，95 %CI：87.337~93 436.810， P<0.001）是氯吡格雷治疗后发生血栓事件的独立危险因素。 结论:CYP2C19*2和CYP2C19*17突变是ACS患者氯吡格雷疗效和治疗后血栓事件发生的重要影响因素。

背景 H型高血压严重影响着人们的健康及生活质量,目前临床上治疗高血压主要根据患者症状和临床经验选择药物,降压效果不理想,急需探寻降压药物基因分布的多态性,为高血压患者进行个体化用药指导.目的探讨济南市社区H型高血压药物作用靶点基因多态性分布及叶酸联合维生素D的干预作用,为该地区开展高血压医防融合精准医疗提供参考依据.方法 2020 年 6 月—2022 年 6 月随机抽取山东省济南市槐荫区 20 家街道办事处社区卫生服务中心 200 例血压控制不佳的高血压患者为研究对象,治疗前首先进行 5 类常用抗高血压药物[利尿剂、β受体阻滞剂、血管紧张素转化酶抑制剂(ACEI)、钙离子通道抑制剂(CCB)、血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂(ARB)]相关高血压个体化用药基因位点的基因多态性检测.将患者随机分为基因导向治疗组(基因组)与基因导向协同叶酸、维生素D治疗组(基因导向组),每组 100 例.基因组根据检测的高血压基因作用位点的特点调整用药;基因导向组在基因组治疗方案的基础上同时服用叶酸、维生素D.干预初始(M0)、干预 3 个月(M3)、干预 6 个月(M6)时采集患者晨间未服用降压药物情况下坐位收缩压和舒张压.记录患者患病情况、不良反应发生情况、脑卒中发生情况,进行基因测序,检测血清同型半胱氨酸(Hcy)浓度.采用Pearson相关性分析或Spearman秩相关分析探究性别、年龄、收缩压、舒张压与Hcy的相关性.结果 研究对象性别(rs=-0.463)、收缩压(r=0.181)、舒张压(r=0.188)与Hcy水平有相关性(P<0.05).5 类抗高血压药物基因作用靶点中,与药物代谢酶基因多态性位点相关的分别是CYP3A5(A6986G)、CYP2C9(c.1075A>C)、CYP2D6(c.100C>T),与药物作用靶点敏感性基因多态性位点相关的是ADRB1、ACEI(I/D)、AGTR1、NPPA.基因组A6986G:CYP3A5*1/*1(AA)、ACEI(I/D):D/D、c.100 C>T:CYP2D6*1/*1(CC)患者M3、M6 舒张压低于M0,A6986G:CYP3A5a1/a3(AG)、ADRB1 c.1165 G>C:GG、c.1075 A>C:CYP2C9*1/*3(AC)、c.1075 A>C:CYP2C9*3/*3(CC)患者M6 舒张压低于M0,A6986G:CYP3A5*3/*3(GG)、ADRB1 c.1165 G>C:CC、ACEI(I/D):I/I、c.1075 A>C:CYP2C9*1/*1(AA)、AGTR1 c.1166 A>C:AA、NPPA T2238C:TT、c.100 C>T:CYP2D6*10/*10(TT)患者M3、M6 收缩压、舒张压低于M0,ADRB1 c.1165 G>C:GC、ACEI(I/D):I/D、c.100 C>T:CYP2D6*1/*10(CT)患者M6 收缩压低于M0,M3、M6 舒张压低于M0,差异有统计学意义(P<0.05).Hcy水平组间比较结果显示,M3、M6 基因导向组Hcy水平低于基因组,差异有统计学意义(P<0.05).组内比较结果显示,基因组M6 Hcy水平低于M0,基因导向组M3、M6 Hcy水平低于M0,M6 Hcy水平低于M3,差异有统计学意义(P<0.05).收缩压、舒张压组间比较结果显示,M3、M6 基因导向组收缩压、舒张压低于基因组,差异有统计学意义(P<0.05).组内比较结果显示,基因组、基因导向组M6 收缩压、舒张压低于M0,M6 收缩压低于M3,差异有统计学意义(P<0.05).结论 社区H型高血压患者中存在高血压药物相关基因多态性的表达差异,个体化用药效果显著;叶酸联合维生素D协同治疗更能显著降低H型高血压水平.

目的 探讨丙泊酚对脓毒症心肌收缩功能障碍的改善作用及其机制.方法 采用盲肠结扎穿孔术(cecal ligation and puncture,CLP)建立大鼠脓毒症模型,24只成年SD大鼠按照随机数字表法分为3组,①假手术组;②脓毒症组:造模12 h后取材;③丙泊酚治疗组:造模后腹腔注射丙泊酚(Propofol,10 mg/kg),12 h后再次注射丙泊酚,3 h后取材.利用细胞微张力仪,测量急性分离心肌细胞的肌节长度和细胞内钙离子荧光强度的变化情况.急性分离丙泊酚组心肌细胞,分别加入肌醇1,4,5-三磷酸受体(inositol-1,4,5-triphosphate receptor,IP3R)抑制剂[2-aminoethyl diphenylborinate(2-APB)]、肌浆网 Ca2+-ATP 酶(sarco/endoplasmic reticulum Ca2+-ATPase,SERCA)抑制剂[2,5-di-t-butyl-1,4-benzohydroquinone(BHQ)]、雷诺丁受体(Ryanodine receptors,Ry Rs)抑制剂 Azumolene 及大电导钙激活钾通道(large conductance Ca2+-activated K+channels,BKCa)抑制剂 Paxiline 后,检测心肌细胞的肌节长度和细胞内钙离子荧光强度的变化情况.结果 与假手术组相比,脓毒症组心肌细胞收缩功能和钙瞬变幅度显著下降;丙泊酚治疗可显著恢复脓毒症心肌细胞的收缩功能和钙释放能力,最大收缩幅度恢复27.6％(P＜0.05),最大钙瞬变幅度恢复41.2％(P＜0.05),2-APB和BHQ明显抑制丙泊酚对心肌细胞的收缩功能的改善作用,其抑制率分别为62.61％(P＜0.05)和42.15％(P＜0.05),但Azumolene对收缩功能无显著影响.2-APB、BHQ和Azumolene对丙泊酚改善钙瞬变都有不同程度的抑制作用,其中Azumolene对钙瞬变抑制效果最小,其抑制率为46.94％(P＜0.05),而2-APB和BHQ的抑制率分别为65.28％(P＜0.05)、65.33％(P＜0.05).Paxiline对丙泊酚改善心肌细胞收缩功能和钙瞬变无显著影响.结论 丙泊酚可改善脓毒症心肌细胞的收缩功能,其机制可能与其通过IP3R和SERCA调节钙离子浓度相关.

目的 探讨醋酸落叶松酯在体内外对膀胱癌的抗瘤作用.方法 采用CCK-8实验、平板克隆实验、Western blotting及流式细胞术检测醋酸落叶松酯对体外培养的膀胱癌细胞生物学行为的作用.将醋酸落叶松酯注入膀胱癌原位移植瘤动物模型中,观察其在体内对膀胱癌的作用.钙成像技术观察醋酸落叶松酯对钙离子通道的作用.结果 CCK-8实验、平板克隆实验证明,醋酸落叶松酯在体外能抑制膀胱癌T24和J82细胞的增殖,Western blotting实验及流式细胞术证明,醋酸落叶松酯可诱导T24和J82细胞体外凋亡.钙成像技术检测到醋酸落叶松酯对TRPC6的抑制作用.动物实验表明,醋酸落叶松酯在体内可抑制T24细胞增殖,从而抑制肿瘤生长.结论 醋酸落叶松酯可在体内外抑制膀胱癌T24和J82细胞的增殖,并诱导其凋亡.

目的:基于钙离子通道探讨麻黄鞣酸及麻黄等治疗哮喘作用机制研究.方法:60只大鼠随机分为空白组、对照组、模型组、麻黄组、麻黄鞣酸组、麻杏止咳片低剂量组、麻杏止咳片高剂量组.构建哮喘模型后,采用HE染色计算哮喘大鼠支气管横断面单位面积的炎性细胞数以及WAm/Pbm,WAi/Pbm,以评估气道炎症.用免疫组化法及蛋白质免疫印迹法(Western-blot)测定大鼠CACC和T MEMl6A蛋白表达.结果:(1)炎性细胞数,模型组高于空白组(P＜0.01).与模型组比较,炎性细胞数,鞣酸组、麻黄组、麻杏止咳片低剂量组、麻杏止咳片高剂量组降低(均P＜0.01).WAm/Pbm,WAi/Pbm,鞣酸组下降(P＜0.01),麻黄组、麻杏止咳片低剂量组、麻杏止咳片组高剂量组与模型组比较无差异.(2) CACC1在模型组和空白对照组,模型组阳性表达细胞数目多于对照组,强度也高于对照组(P＜0.01).与模型组比,计算其光密度比值,鞣酸组、麻黄组、麻杏止咳片低剂量组、麻杏止咳片组高剂量组比值下调(P＜0.01).CACC4在模型组和空白对照组,模型组阳性表达细胞数目多于对照组,强度也高于对照组(P＜0.01).与模型组比较,计算光密度比值,鞣酸组、麻黄组、麻杏止咳片低剂量组、麻杏止咳片组高剂量组比值下调(均P＜0.01).(3)各组大鼠肺组织中TMEM16A的表达检测结果显示:与空白对照组比较,其余各组大鼠肺组织中TMEM16A的表达水平均显著下调,差异有统计学意义(P＜0.01);与模型对照组比较,各治疗组大鼠肺组织中TMEM 16A的表达水平均显著上调,差异有统计学意义(P＜0.05或0.01);其中麻杏止咳片高剂量组大鼠肺组织中T MEM 16A的表达水平上调最为显著.结论:(1)麻黄鞣酸可以使WAm/Pbm、WAi/Pbm下降,可以改变气道重构.(2)鞣酸组、麻黄组、麻杏止咳片低剂量组、麻杏止咳片高剂量组均可以下调CACC1、CACC4在肺组织中的表达,也都可以上调TMEM16A的表达.

目的 研究2型糖尿病大鼠心房组织钙离子通道的表达及钙电流的改变情况.方法 30只雄性Wistar成年大鼠随机分为对照组和糖尿病组.其中糖尿病组高脂高糖饮食4周后给予小剂量链脲佐菌素35 mg/kg腹腔注射,建立2型糖尿病模型.8周后取两组大鼠的血清测定血糖、胰岛素、总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白以及高密度脂蛋白,判定两组的代谢情况.将固定后的大鼠心房组织切成冰冻切片,通过免疫荧光双标染色法测定两组的Cav1.2,Cav3.1和Cav3.2的表达情况.采用Langendorff装置进行急性分离成年大鼠心房细胞,通过全细胞膜片钳技术分别测定两组L型和T型钙电流的峰值电流、I-V曲线、稳态激活和失活电流曲线等数据.结果 与对照组相比,糖尿病组有严重的代谢紊乱,Cav1.2的蛋白表达降低,Cav3.1的蛋白表达升高,Cav3.2的蛋白表达未见明显改变.另外,糖尿病组L型钙电流的峰值电流显著降低(P＜o.05)、电流-电压(I-V)曲线下移、稳态激活和失活电流曲线未见明显差异(P＞0.05),T型钙电流的峰值电流显著升高(P＜0.05)、电流-电压(I-V)曲线上移、稳态激活电流曲线未见明显差异(P＞0.05).结论 2型糖尿病大鼠心房肌细胞有着明显的钙通道重构,导致L型钙电流密度下降,T型钙电流密度上升.

外周神经损伤引起的神经病理性疼痛很常见,危害严重,是神经科学研究的重点和前沿.神经病理性疼痛的发病机制非常复杂,包括外周敏化和中枢敏化机制.我们实验室早在2011年提出"急性疼痛早期治疗"的理念,即外周神经损伤后早期的外周敏化(如异位放电)不仅是早期急性痛的重要原因,而且这些异位放电不断轰击脊髓背角等中枢部位,诱发中枢敏化,成为神经病理性疼痛后期维持的重要机制.早期阻断异位放电,可以阻断疼痛由急性期向慢性期的转变,有效阻止神经病理性疼痛的发生.临床医生应尽早治疗神经损伤后的急性痛,越早治疗,病人越早康复,无需忍受慢性神经病理性疼痛的折磨 [1,2].

目的 探讨人巨细胞病毒(HCMV)感染对原代培养SD乳鼠海马神经元细胞内钙离子的影响及其机制.方法 取24 h内出生的SPF级SD乳鼠雌雄各10只,建立原代乳鼠海马神经元单层细胞;在体外培养的第8天将生长良好的单层神经元细胞随机分为HCMV感染组、HCMV+ MK-801组、MK-801组和对照组,每组设10个复孔;在处理后24 h用Fluo-3 AM钙离子探针进行荧光染色,在激光共聚焦显微镜下检测各组神经元游离钙离子的荧光强度值.结果 接种HCMV 24 h后,神经元逐渐变圆、肿胀,4d后大部分细胞裂解消失;通过免疫组织化学在海马神经细胞的培养物中可见HCMV产生早期蛋白,呈棕黄色颗粒,苏木精复染后呈棕褐色.HCMV组神经元细胞内游离钙离子荧光强度值为215.5±14.9,高于对照组(116.4±5.9),差异有统计学意义(t=15.2,P＜0.01);HCMV+ MK-801组神经元的荧光强度值(135.5±8.6)较HCMV组(215.5±14.9)明显下降,下降率为(37.0±3.4)％,差异有统计学意义(t=11.3,P＜0.01);MK-801组的荧光强度值为88.1±4.5;较对照组(116.4±5.9)明显下降,下降率为(24.0±6.7)％,差异有统计学意义(t=-9.3,P＜0.01).结论 HCMV AD16株感染体外培养大鼠海马神经元可致细胞内的钙超载,N-甲基-D-天冬氨酸受体通道介导的钙离子内流可能是HCMV感染后神经元内钙超载的主要机制之一.