目的:检测跨膜emp24结构域蛋白4(TMED4)在肝癌患者肝组织中的表达情况，并初步探究 TMED4基因对肝癌细胞增殖和迁移能力的影响及其相关分子机制。 方法:采用蛋白质印迹法和免疫组织化学染色检测肝癌患者癌组织、癌旁组织中TMED4的蛋白质表达水平，并分析其表达与患者的临床病理参数之间的相关性；分别通过细胞增殖实验、Transwell实验、划痕愈合实验和裸鼠皮下成瘤实验探究过表达或敲减 TMED4基因对肝癌细胞体内外增殖、迁移和愈合能力的影响；通过通路分析初步探究 TMED4基因调控肝癌细胞生物学行为的可能分子机制。统计学方法采用独立样本 t检验、Mann－Whitney U检验和卡方检验。 结果:蛋白质印迹法结果显示，TMED4在肝癌组织中的蛋白质表达水平低于其对应的癌旁组织(0.52±0.29比0.83±0.22)，差异有统计学意义( t＝2.54， P＝0.022)。免疫组织化学染色结果显示，TMED4在肝癌组织中的蛋白质表达水平低于其对应的癌旁组织(5.46±3.37比7.58±3.08),差异有统计学意义( t＝3.49， P<0.001)。TMED4的蛋白质表达水平与患者是否发生肿瘤血管侵犯和巴塞罗那临床肝癌(BCLC)分期显著相关( χ2＝6.83、4.20， P＝0.009、0.040)。细胞增殖实验结果显示，SMMC-7721细胞中 TMED4过表达组细胞的光密度值低于对照组(1.38±0.05比2.37±0.08)，HepG2细胞中 TMED4敲减组细胞的光密度值高于对照组(0.76±0.04比0.54±0.01)，差异均有统计学意义( t＝18.23、8.85，均 P<0.001)。Transwell实验结果显示，SMMC-7721细胞中 TMED4过表达组的迁移细胞数少于对照组(286.30±13.01比439.70±12.34)，HepG2细胞中 TMED4敲减组的迁移细胞数多于对照组(249.00±6.00比160.00±6.56)，差异均有统计学意义( t＝14.81、17.34，均 P<0.001)。划痕愈合实验结果显示，SMMC-7721细胞中 TMED4过表达组的细胞愈合率低于对照组[(0.21±0.01)%比(0.45±0.01)%]，HepG2细胞中 TMED4敲减组的细胞愈合率高于对照组[(0.46±0.01)%比(0.20±0.01)%]，差异均有统计学意义( t＝200.10、30.46，均 P<0.001)。裸鼠皮下成瘤实验结果显示， TMED4过表达组细胞的生长速度较对照组缓慢，细胞接种6周后， TMED4过表达组小鼠的皮下肿瘤体积小于对照组[27.36 mm 3(138.70 mm 3)比1 741.62 mm 3(1 783.39 mm 3)]，肿瘤质量低于对照组[0.06 g(0.14 g)比1.46 g(1.09 g)]，差异均有统计学意义(均 Z＝－2.31,均 P<0.001)。蛋白质印迹法结果显示，SMMC-7721细胞中 TMED4过表达组锌指转录因子(Snail)的蛋白质水平低于对照组(0.32±0.01比0.90±0.03)，HepG2细胞中 TMED4敲减组Snail的蛋白质水平高于对照组(1.03±0.01比0.97±0.01)，差异均有统计学意义( t＝28.49、12.31，均 P<0.001)。实时荧光定量聚合酶链反应结果显示，SMMC-7721细胞中 TMED4过表达组 Snail的mRNA水平低于对照组(0.13±0.05比1.00±0.15)，HepG2细胞中 TMED4敲减组 Snail的mRNA水平高于对照组(1.25±0.32比0.21±0.14)，差异均有统计学意义( t＝9.62、5.10， P<0.001、＝0.007)。 结论:TMED4可能通过调控Snail的表达进而影响肝癌细胞的增殖和迁移能力，其有望成为肝癌治疗的潜在靶点。

目的:探究TMED2在胃癌中的表达情况和对病人临床预后的影响及可能作用机制.方法:采用免疫组织化学技术检测TMED2在胃癌组织及癌旁组织中的表达水平,分析TMED2表达水平与临床病理参数及术后5年生存率的关系.生物信息学预测TMED2的功能,利用慢病毒调控胃癌MGC-803细胞TMED2的表达,并分析TMED2对胃癌细胞周期进程、增殖、迁移和侵袭的影响.结果:免疫组织化学检测结果显示TMED2在胃癌组织中高表达(P<0.01),且其表达量与外周血肿瘤标志物CEA和CA19-9水平呈正相关(r=0.604,0.581,P<0.01).单因素及多因素分析显示TMED2高表达(HR=3.155,95％CI:1.740～5.721)是影响胃癌术后5年生存率的独立危险因素.富集分析提示TMED2的功能和细胞周期有关.流式细胞术检测表明上调TMED2促进G1/S细胞周期的转化,下调则抑制(P<0.05);Western blotting结果显示下调TMED2抑制胃癌细胞DK4和Cyclin D2蛋白的表达,上调则促进(P<0.05).CCK-8和Transwell检测显示上调TMED2促进胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭,下调则相反(P<0.05).结论:TMED2在胃癌组织中高表达并影响病人临床预后,可能与调控胃癌细胞周期进程和恶性生物学行为有关.

跨膜p24(transmembrane emp24 domain,TMED)基因与哺乳动物的免疫反应、信号传导、生长发育和疾病发展等密切相关.然而,昆虫中仅有果蝇TMED的报道.本研究从基因组鉴定了家蚕、赤拟谷盗、烟草天蛾和意大利蜂的TMED家族基因,并发现 1 个α类、1 个β类、1 个δ类和多个γ类的TMED家族基因成员构成模式产生于膜翅目分化前昆虫的共同祖先,而果蝇类TMED家族成员构成在进化中形成了独特模式.昆虫 TMED 家族 γ 类基因进化速度较快,分化成了TMED6-like、TMED5-like和TMED3-like这 3 个独立的亚类.TMED5-like基因在膜翅目昆虫发生了丢失,在鳞翅目昆虫祖先中发生了复制,在果蝇类发生了重复.昆虫TMED蛋白除具有典型的TMED结构特征外,还有明显的信号肽.家蚕 7 个TMED基因分布在 6 条染色体上,1 个基因为单外显子,6个基因为多外显子.从幼虫组织克隆了家蚕 7个TMED基因的开放阅读框(open reading frame,ORF)全序列并登录到GenBank数据库.BmTMED1、BmTMED2和BmTMED6在家蚕各个时期和组织中均表达,所有基因都在家蚕 4 龄、5 龄和丝腺组织中表达.本研究发现了昆虫的TMED家族成员构成模式、γ类分化特点以及它们的进化历史等,为进一步研究家蚕以及其他昆虫TMED基因提供了基础.

目的 探讨肾上腺皮质癌(ACT)潜在致病机制,并筛选出可能作为相关生物靶标的基因.方法 从基因表达数据库Gene Expression Omnibus (GEO)中选取儿童ACT相关RNA芯片数据集(GSE75415),利用R语言的相关函数包对其中的18个ACT组织样本(实验组)以及7个正常肾上腺皮质组织样本(对照组)中的mRNA表达数据进行预处理差异表达分析,对ACT各分级(stage1～4)的差异表达基因(DEGs)和重合差异基因(OLDEGs),采用功能富集分析(GO功能富集和KEGG通路),并筛选出中心基因.同时对TCGA数据库包括79个ACT样本的二代测序数据进行分析,筛选出对ACT患者生存时间有影响的基因.结果 Stage1～4分别有248、334、315和561个基因发生了差异表达,各分级样本组间存在73个重合基因(OLDEGs),中心基因HSPA13、GARS、STXBP1、AKIRIN1、TUBB3在各分级中均表达上调,中心基因ADH1B、DCN、RASSF2、PDGFRA、PLAT、C3、FOS在各分级中均表达下调,它们通过影响免疫反应、细胞周期、磷酸化、凝血及相应的信号通路,对ACT的发生与发展发挥作用.另外,OLDEGs在79个TCGA数据库ACT样本生存期分析发现,基因XPO1、RACGAP1、PDGFD、NR4A2、MXRA5、VPS51、TMED3、NDFIP1和CDKN1C与ACT的生存期密切相关.结论 在各级中均差异表达的基因和生存期相关基因可以作为ACT治疗的新靶点,这将有助于进一步理解肾上腺皮质癌的病因和预后治疗.

肠道病毒A组71型(Enterovirus-A71,EV-A71)感染引起的手足口病给婴幼儿造成严重的疾病负担,明确EV-A71的致病机制能为有效防控手足口病提供科学依据.为了研究EV-A71感染与人扁桃体上皮细胞的互作,本研究采用Label-free定量蛋白组学技术研究EV-A71感染人扁桃体上皮细胞UT-SCC-60B 6h和12h后蛋白质组的改变情况,并确定EV-A71感染动力学(EV-A71 6h: 12h)过程中蛋白质组的改变情况,并进行差异表达蛋白(Differentially expressed proteins,DEPs)的蛋白互作网络和基因本体(Gene ontology,GO)分析.EV-A71感染6h时共有27个DEPs(下调12个DEPs,上调15个DEPs)发生显著改变;EV-A71感染12h时共有62个DEPs(下调26个DEPs,上调36个DEPs)发生显著改变;EV-A71感染动力学(EV-A71 6h: 12h)过程中共有40个DEPs(下调21个DEPs,上调19个DEPs)发生显著改变.显著发生改变的COX6C、TIMM10、MAP1LC3B、HIST1H1D、DNAJC8、TMED4和ARPC5等DEPs为各组间重叠蛋白.蛋白互作网络和GO分析结果显示,DEPs主要涉及到线粒体及线粒体膜的通透性调节、细胞囊泡形成、细胞凋亡、线粒体介导的凋亡等生物学过程.因此,EV-A71感染使人扁桃体上皮细胞的蛋白表达谱发生改变.