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高通量测序确定肠道病毒A71型感染致宿主细胞miRNA表达谱的改变
编辑人员丨1周前
目的:确定肠道病毒A71型(Enterovirus-A71,EV-A71)感染人扁桃体上皮细胞后miRNA表达谱的改变。方法:EV-A71以感染复数为1感染人扁桃体上皮细胞6 h后,采用Trizol提取总RNA,构建小RNA文库,在Illumina NextSeq 500平台进行高通量测序,处理数据后确定差异表达的已知和新型miRNA种类及其靶基因,进行基因本体和信号途径分析;使用psRNATarget预测具有潜在结合EV-A71基因组的差异表达的miRNA种类。实时定量RT-PCR检测差异表达miRNA的变化倍数。结果:通过高通量测序共鉴定61个已知差异表达的miRNA(下调21个、上调40个)和559个新型miRNA,新型miRNA具有典型的前miRNA的二级发卡结构。实时定量RT-PCR确定hsa-miR-517b-3p和hsa-miR-199a-5p的变化倍数与高通量测序结果基本一致。差异表达miRNA靶基因涉及到不同的生物学过程和信号途径。共鉴定出24个差异表达的miRNA(5个已知miRNA,19个新型miRNA)具有与EV-A71结合的潜在"种子序列"。结论:EV-A71感染人扁桃体上皮细胞后引起miRNA表达谱的显著改变,且差异表达的miRNA可能靶向结合EV-A71基因组进而调控EV-A71复制。
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编辑人员丨1周前
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人扁桃体隐窝上皮细胞的分离、原代培养与鉴定
编辑人员丨2023/8/6
目的:建立高效、稳定的人扁桃体隐窝上皮细胞原代培养方法.方法:收集80例3~5岁儿童手术切除的扁桃体组织,分别采用组织块贴壁法和Ⅱ型中性蛋白酶联合0.25%胰蛋白酶-EDTA消化法提取扁桃体隐窝上皮细胞并比较两种方法的提取效果;应用无血清角化细胞培养基进行细胞纯化及原代培养;用相差显微镜观察细胞形态和生长特点、免疫细胞化学染色及免疫荧光技术鉴定细胞来源.结果:Ⅱ型中性蛋白酶联合消化法在分离扁桃体隐窝上皮细胞成功率、细胞密度以及细胞融合时间方面均高于组织块贴壁法(P<0.05),细胞接种后第2天开始贴壁,外观呈现多边形,岛状生长,培养12d左右,细胞连成单层,呈现铺路石样生长.免疫细胞化学染色显示广谱角蛋白表达阳性,波形蛋白阴性;免疫荧光攀定角蛋白8/18染色阳性.结论:应用Ⅱ型中性蛋白酶联合0.25%胰蛋白酶-EDTA消化法以及无血清角化细胞培养基可建立高效稳定的人扁桃体隐窝上皮细胞原代分离方法和体外培养体系.
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编辑人员丨2023/8/6
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干细胞向甲状旁腺细胞的分化及在甲状旁腺功能减退中的研究进展
编辑人员丨2023/8/6
干细胞是一类能够自我复制、自我更新,具有多向分化潜能,能产生多种分化细胞类型的细胞,由于它的自我复制和多向分化潜能,干细胞技术已经被广泛的应用于细胞移植治疗中.甲状旁腺功能减退作为一种内分泌疾病,目前的治疗方案都不能从根本上治疗该疾病.因此应用干细胞来源的甲状旁腺细胞移植治疗甲状旁腺功能减退越来越受到医学界的重视.目前,已有科研团队报道了应用胚胎干细胞(ESCs)、胸腺上皮细胞和扁桃体间充质细胞向甲状旁腺细胞分化及其在甲状旁腺功能减退中的治疗.本文将干细胞向甲状旁腺细胞的分化及在甲状旁腺功能减退治疗中的研究进展进行综述.
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编辑人员丨2023/8/6
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肠道病毒71型感染UT-SCC-60A对细胞周期阻滞和细胞凋亡发生的研究
编辑人员丨2023/8/6
目的 研究肠道病毒71型感染人扁桃体上皮细胞UT-SCC-60A后对细胞周期阻滞和细胞凋亡发生情况.方法 以人扁桃体上皮细胞UT-SCC-60A为细胞模型,CCK8试剂盒和流式细胞仪检测EV71感染UT-SCC-60A后细胞增殖抑制率、凋亡发生和细胞周期阻滞情况.结果 EV71对UT-SCC-60A呈现感染时间依赖性抑制,感染48h后抑制率达92.6%;不同剂量的EV71感染均能够显著抑制UT-SCC-60A增殖.EV71感染使UT-SCC-60A以剂量依赖性发生以早期凋亡为主的细胞凋亡,EV71以感染复数为0.5和1感染12h后,早期凋亡细胞比例分别为21.4%和27.1%.EV71感染UT-SCC-60A后使细胞周期阻滞在S期且G0/G1比例下降,EV71以感染复数为1感染12h后,S期比例由对照组的19.0%上升至31.1%,G0/G1期比例由59.8%下降至45.9%.结论 EV71通过使UT-SCC-60A发生S期阻滞来抑制细胞增殖且诱导以早期凋亡为主的细胞凋亡.
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编辑人员丨2023/8/6
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肠道病毒A71型致人扁桃体上皮细胞系UT-SCC-60B凋亡和S期阻滞的研究
编辑人员丨2023/8/6
肠道病毒A71型(Enterovirus A71,EV-A71)是手足口病的重要病原体,为研究EV-A71感染人扁桃体上皮细胞后对细胞凋亡和细胞周期的影响,确定ERK1/2、JNK1/2、PI3K/Akt和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Cysteinyl aspartate specific proteinase,Caspase)的作用,本文以人扁桃体上皮细胞系UT-SCC-60B为细胞模型,CCK-8试剂盒检测EV-A71对UT-SCC-60B的抑制率、流式细胞仪检测EV-A71感染组和抑制剂处理组的凋亡和细胞周期、Caspase活力检测试剂盒测定Caspase-3,Caspase-8,Caspase-9活力.EV-A71以感染剂量和感染时间依赖方式抑制UT-SCC-60B增殖;EV-A71感染致UT-SCC-60B发生细胞凋亡,抑制ERK1/2、JNK1/2和PI3K/Akt能够降低UT-SCC-60B细胞凋亡比例;EV-A71感染UT-SCC-60B后发生S期阻滞,抑制ERK1/2、JNK1/2、PI3K/Akt和Caspase阻止UT-SCC-60B发生S期阻滞;EV A71感染UT-SCC-60B能够活化Caspase-3,Caspase-8,Caspase-9且ERK1/2、JNK1/2和PI3K/Akt调控Caspase-3,Caspase-8,Caspase-9活力.因此,EV A71能够导致人扁桃体上皮细胞UT-SCC-60B发生凋亡和S期阻滞,并且ERK1/2、JNK1/2、PI3K/Akt和Caspase参与凋亡和S期阻滞的调控.
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编辑人员丨2023/8/6
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猪伪狂犬病综合诊断及分离毒株gE和TK基因遗传变异分析
编辑人员丨2023/8/6
2012年以来,许多使用gE基因缺失活疫苗免疫过的猪场广泛性出现伪狂犬病毒(PRV)感染,gE抗体阳性率不断升高,伪狂犬典型病例不断增加.2018年3月鲁南地区几个种猪场先后发生疑似伪狂犬病疫情,怀孕母猪流产、产死胎和木乃伊胎,仔猪出现神经症状且死亡率高.通过对病死猪及死胚剖检进行初步诊断,取病料进一步进行病理组织学诊断及病毒分离鉴定.结果 显示,病死猪均可见病毒性脑炎、肝细胞变性坏死及淋巴组织坏死等病理变化,在病变的神经元、肝细胞、扁桃体隐窝上皮细胞等细胞核内见红染包涵体.对分离到的4株PRV进行了gE和TK基因的序列测定及遗传变异分析发现,4株PRV的gE和TK核苷酸序列的同源性分别为98.8%~99.3%和98.9%~99.6%与国内流行毒株其核苷酸序列的同源性分别99.1%~99.7%和98.6%~99.8%,与匈牙利和美国等流行毒株核苷酸序列的同源性分别为97.3%~97.8%和98.8%~99.5%,表明4株分离株高度同源,与国内PRV变异株处在同一分支,而与匈牙利和美国等毒株遗传距离较远.传统疫苗对PRV变异毒株不能提供有效保护,给猪场伪狂犬病的防控和净化工作带来了新的挑战.
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编辑人员丨2023/8/6
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间接法、ABC法和UltraVision法免疫组化染色效果的比较
编辑人员丨2023/8/5
UltraVision Quanto(简称UltraVision法)是近年新兴的聚合物标记技术[1],聚合物检测法现已被证明能够增加免疫组化染色灵敏度并简化检测步骤.本实验采用免疫组化法检测慢性扁桃体炎组织细胞膜分子CD8的表达和口腔鳞状上皮细胞癌组织胞内抗原GAPDH的表达,分别采用间接法、ABC法、UltraVision法进行敏感度和背景分析.
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编辑人员丨2023/8/5
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基于Label-free定量蛋白组学揭示肠道病毒A71型感染致人扁桃体上皮细胞蛋白质组的改变
编辑人员丨2023/8/5
肠道病毒A组71型(Enterovirus-A71,EV-A71)感染引起的手足口病给婴幼儿造成严重的疾病负担,明确EV-A71的致病机制能为有效防控手足口病提供科学依据.为了研究EV-A71感染与人扁桃体上皮细胞的互作,本研究采用Label-free定量蛋白组学技术研究EV-A71感染人扁桃体上皮细胞UT-SCC-60B 6h和12h后蛋白质组的改变情况,并确定EV-A71感染动力学(EV-A71 6h: 12h)过程中蛋白质组的改变情况,并进行差异表达蛋白(Differentially expressed proteins,DEPs)的蛋白互作网络和基因本体(Gene ontology,GO)分析.EV-A71感染6h时共有27个DEPs(下调12个DEPs,上调15个DEPs)发生显著改变;EV-A71感染12h时共有62个DEPs(下调26个DEPs,上调36个DEPs)发生显著改变;EV-A71感染动力学(EV-A71 6h: 12h)过程中共有40个DEPs(下调21个DEPs,上调19个DEPs)发生显著改变.显著发生改变的COX6C、TIMM10、MAP1LC3B、HIST1H1D、DNAJC8、TMED4和ARPC5等DEPs为各组间重叠蛋白.蛋白互作网络和GO分析结果显示,DEPs主要涉及到线粒体及线粒体膜的通透性调节、细胞囊泡形成、细胞凋亡、线粒体介导的凋亡等生物学过程.因此,EV-A71感染使人扁桃体上皮细胞的蛋白表达谱发生改变.
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编辑人员丨2023/8/5
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药物过敏反应导致Kounis综合征1例
编辑人员丨2023/8/5
患者,男,32岁,因"反复咳嗽2年余,间断气喘1年余,加重1周",于2019年12月3日入院.入院症见咳嗽,干咳无痰,夜间咳甚,偶可闻及喉间哮鸣音,胸闷气喘,夜间及晨起时喘甚,鼻塞,流黄白涕.体检:体温36.4℃,脉搏138次/分,呼吸频率20次/分,血压115/92 mmHg.咽部无充血,扁桃体肿大,全身浅表淋巴结未触及肿大,双肺呼吸音粗,双下肺可闻及湿啰音;心率138次/分,律齐,心脏各瓣膜听诊区未闻及额外心音及杂音;腹部及神经系统检查未见阳性体征.辅助检查:嗜酸性粒细胞计数1.85×109/L(参考值0.02×109/L~0.52×109/L),嗜酸性粒细胞百分比25.0%(参考值0.4%?8.0%),余均在正常范围内.CRP 10.1 mg/L(参考值0.0?5.0 mg/L),降钙素原(PCT)1.140 ng/L(参考值0.0~0.046 ng/L),尿常规、大便常规、凝血、血沉、甲状腺功能、真菌D葡聚糖、肝功能、肾功能、心肌酶、空腹血糖、电解质、肌酸激酶同工酶MB、细胞角蛋白19片段、鳞状上皮细胞癌抗原均未见明显异常.胸部CT平扫:双肺间质性炎症(以双下肺为著),纵隔内可见淋巴结肿大.心脏彩超及心功能测定诊断意见:(1)心脏形态结构及瓣膜功能未见明显异常.
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编辑人员丨2023/8/5
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人鼻病毒1B感染人扁桃体上皮细胞和人肺支气管上皮细胞的比较代谢组学研究
编辑人员丨2023/8/5
人鼻病毒(Human rhinovirus,HRV)是呼吸道感染的主要病原体之一,明确HRV的致病机制能为有效防控该病毒感染提供科学依据.为确定1B型HRV(human rhinovirus type 1B,HRV1B)感染致宿主细胞的代谢组改变及差异性,本文采用非靶向代谢组学技术研究HRV1B感染人扁桃体上皮细胞UT-SCC-60B和人肺支气管上皮细胞BEAS-2B后代谢组的改变情况.HRV1B感染UT-SCC-60B细胞6h和12h分别有21个差异显著代谢产物(differentially significant metabolites,DSMs)(上调13个、下调8个)和51个DSMs(上调42个、下调9个),HRV1B感染UT-SCC-60B和BEAS-2B细胞6h和12h后,比较分析发现分别有303个DSMs(上调69个,下调234个)和324个DSMs(上调88个,下调236个),未知DSMs占据比例较大.脂肪酸、脂质、氨基酸、核苷酸和糖类的比例随着感染时间的延长而增加,7-酮基脱氧胆酸、溶血磷脂酰胆碱、垂盆草甙、组氨酸-甘氨酸、腺苷酸等涉及到胆汁酸代谢、脂肪酸和脂质代谢、糖代谢、氨基酸代谢和核苷酸代谢.因此,细胞水平表明HRV1B感染改变了人上皮细胞的脂肪酸、脂质、氨基酸、核苷酸和糖类的代谢水平.
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编辑人员丨2023/8/5
